鹿茸中3种生物碱基的提取工艺研究

[目的]优化鹿茸中3种生物碱基的提取工艺。[方法]利用乙醇作为生物碱基的提取溶剂,为了确定鹿茸中这一组有效成分的准确含量,首先选择适宜的提取方法,并采用正交设计,对影响尿嘧啶、次黄嘌呤和尿苷3种生物碱基提取率的因素,如乙醇溶液浓度、溶剂用量、温度和时间等进行考察,并进行必要的单因素延伸实验,从而得到优化的提取鹿茸中3种生物碱基的工艺条件。[结果]确定了鹿茸中尿嘧啶、次黄嘌呤和尿苷3种生物碱基成分的含量,即在50%乙醇浓度∶物料=10∶1,60℃,45 min,4次提取的优化条件下,鹿茸中尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷的提取率分别为0.405 5 mg/g,0.504 9 mg/g0,.481 8 mg/g。[结论]研究结果可为鹿茸有效成分回收率的计算提供数据基础,为珍贵鹿茸资源的合理开发及利用提供科学依据。     

IDO在梅花鹿茸角中的表达及对鹿茸软骨细胞分化的影响

以梅花鹿茸角为研究对象,通过原位杂交方法检测吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)和吲哚胺2,3-双加氧酶2(IDO2)在茸角中的表达。在培养的鹿茸软骨细胞中分别添加IDO1抑制剂1-甲基-L-色氨酸(1-L-MT)和IDO2抑制剂1-甲基-D-色氨酸(1-D-MT),作用24h后,通过荧光定量PCR方法检测软骨细胞分化标志分子Ⅹ型胶原(ColⅩ)表达的变化,进一步研究IDO1和IDO2对鹿茸软骨细胞分化的影响。结果显示:IDO1和IDO2主要在鹿茸真皮层成纤维细胞、间充质细胞和软骨细胞中表达。用浓度分别为200μmol/L和100μmol/L的1-L-MT和1-DMT处理鹿茸软骨细胞24h后,荧光定量PCR结果显示,ColⅩmRNA在鹿茸软骨细胞中的表达量均显著下降。结果表明:当IDO的活性受到抑制时,鹿茸软骨细胞的分化过程也受到明显抑制,IDO可能在梅花鹿鹿茸软骨细胞分化过程中起重要的作用。     

鹿茸角畸形的类型、原因及预防措施

1畸形鹿茸的常见类型 基部原生陛畸形,主要有丛生状茸、瘤形茸、无眉枝茸、高鸡腿茸、多枝形茸、独挺茸和锥形茸等。 眉枝畸形,主要有多眉枝茸、眉枝双尖形茸、单门桩马鹿茸、眉枝折曲形茸、眉枝过于短小茸等。     

梅花鹿的生活习性、繁殖特点及鹿茸的生长发育

1外貌特征梅花鹿体长125～145厘米,尾长12～13厘米,体重70～100千克。头部略圆,颜面部较长,鼻端裸露,眼大而圆,眶下腺呈裂缝状,泪窝明显,耳长且直立。颈部长,四肢细长,主蹄狭而尖,侧蹄小,尾较短。毛色随季节的改变而改变,夏季体毛为棕黄色或栗红色,无绒毛,在背脊两旁和体侧下缘镶嵌着许多排列有序的白色斑点,状似梅花,因而得名。     

微切变—助剂互作技术与超微粉碎技术加工的鹿茸粉对小鼠生长繁殖性能的影响

应用微切变—助剂互作技术和超微粉碎技术加工鹿茸获得鹿茸微切助粉和超微粉,采用有机溶剂索式提取法和热水浸提法提取鹿茸微切助粉和超微粉中的雌二醇、孕酮和睾酮性激素,用放射免疫法分析微切助粉和超微粉中性激素的溶出量;将鹿茸微切助粉和超微粉以2g/kg的比例分别添加到粉末状商品鼠粮中混匀,重新压制成棒状鼠粮,连续饲喂昆明小鼠9周。通过分析其对小鼠生长繁殖性能的影响,评价了微切变—助剂互作技术和超微粉碎技术加工鹿茸的应用效果。结果表明,运用微切变—助剂互作技术提取的鹿茸微切助粉中的雌二醇、孕酮和睾酮的溶出量均高于超微粉碎的鹿茸粉,尤其是水作为溶剂提取的雌二醇的溶出量是超微粉碎的15.5倍。饲喂含鹿茸微切助粉鼠粮的小鼠与饲喂含鹿茸超微粉鼠粮的小鼠相比,雄鼠的精子数、a级精子数和精子活力均高,具有统计学意义(p0.05);卵巢和子宫的发育指数明显高于超微粉组,动情周期也比超微粉组短,血清中雌二醇、孕酮和睾酮性激素浓度显著增加(p0.01);孕鼠的胚胎数量较多,发育较快,哺乳期仔鼠的生长也较快。以上结果充分证明,应用微切变—助剂互作技术加工鹿茸,能够高效释放目标活性物质。     

鹿茸粉对CCl_4及APAP肝损伤小鼠蛋白合成贮备功能的影响

为了探讨鹿茸粉对肝损伤小鼠肝脏蛋白合成贮备功能的影响,本研究以小鼠为研究对象,建立CCl4及APAP肝损伤模型。除空白组外,其余各组小鼠灌胃给予鹿茸粉,7d后检测其血清TP和ALB含量。结果表明,鹿茸粉能明显提高CCl4及APAP肝损伤小鼠血清TP和ALB的含量,调节蛋白质代谢,改善肝脏的合成贮备功能。     

鹿茸干细胞基因组DNA甲基化的检测方法

以鹿茸干细胞为研究对象,分别采用甲基化敏感性扩增多态性(MSAP)和荧光标记甲基化敏感性扩增多态性(F-MSAP)方法对鹿茸干细胞进行全基因组DNA甲基化检测。结果表明:MSAP方法共检测到387个位点,F-MSAP方法共检测出1 524个位点。2种方法所得结果中均发现Ⅰ型条带数最多,Ⅲ型条带数最少。与MSAP方法比较,F-MSAP方法在数据分析和实际操作过程中具有安全、高效、高通量、自动化等特点,更适用于检测鹿茸干细胞基因组DNA甲基化。     

东北梅花鹿Galectin-1基因RNAi载体的构建

构建东北梅花鹿galectin-1基因特异小分子干扰RNA(shRNAs)真核干扰载体,并获得稳定感染生茸区骨膜细胞系。设计2对galectin-1 mRNA特异性shRNAs,两端分别带有ClaⅠ/MluⅠ酶切位点和一个9 nt发夹结构,通过基因克隆技术将其插入真核表达质粒pLVTHM中,构建galectin-1 shRNA表达载体,利用PCR和测序筛选出阳性质粒。将重组质粒与PPAX及pMD2.G共转染到293 t细胞中,在倒置显微镜下观察转染效果并收集、浓缩病毒质粒,感染生茸区骨膜细胞。结果表明,成功构建东北梅花鹿galectin-1基因RNAi载体,获得稳定传代被感染生茸区骨膜细胞系,为进一步研究galectin-1基因在鹿茸再生中的作用奠定基础。     

5种鹿茸中氨基酸和生物活性的研究

鹿茸主要分为花鹿茸、马鹿茸、水鹿茸等。花鹿茸(梅花鹿茸)主要产于吉林、辽宁、河北等地。马鹿茸主要产于黑龙江、吉林、内蒙古等地,又称为东马鹿茸;在四川、云南、青海、新疆等地产的又称为西马鹿茸。鹿茸含有丰富的氨基酸。笔者采用化学计量     

我国养鹿业现状及发展前景

目前，我国养鹿存栏50-60万头，其中梅花鹿占85％-90％，其余为马鹿。梅花鹿主要分布在辽宁、吉林、黑龙江等省。品种有双阳、西丰梅花鹿和长白山品系。马鹿主要分布在新疆，品种有天山、塔里木品种和清原品系。养殖场规模100头以上的约3500个；其中工商登记的养鹿企业1600多家。鹿茸产量每年100吨，其中花茸80吨、马茸20吨。据了解，我国养鹿历史悠久，是世界上鹿业生产大国之一，也是将鹿产品用于医药保健事业最早的国家。我国的养鹿业发展很快，在某些研究领域处于国际领先水平。目前我国鹿业现状主要是：