日本血吸虫SjCHGC06822蛋白诱导BALB/c小鼠免疫保护效果观察

利用PCR技术扩增日本血吸虫Sj CHGC06822 ORF全长序列,以p ET28a(+)为载体构建重组质粒,大肠杆菌表达系统进行表达,His-Ni柱层析纯化r Sj CHGC06822/His蛋白后,生物信息学分析其可能结构,Western blot分析其抗原性。利用重组蛋白免疫BALB/c小鼠评估其免疫效果,ELISA分析血清抗体亚型变化。结果显示,获得日本血吸虫Sj CHGC06822的完整ORF序列591 bp,编码192个氨基酸,序列aa37~aa72含一个EF-hand手性域结构,无信号肽及跨膜结构。获得的Sj CHGC06822/His重组蛋白具有较好的抗原性,在2次独立BALB/c小鼠实验中,与PBS对照组相比,Sj CHGC06822/His蛋白免疫组诱导小鼠获得30.36%、40.26%减虫率和30.14%、12.28%肝脏减卵率,血清Ig G抗体免疫及感染后持续增高,Ig G2a和Ig G1水平随免疫次数增高,感染后出现下降,但Ig G2a/Ig G1(1)水平持续增加。本研究成功克隆了Sj CHGC06822基因,并成功表达纯化了r Sj CHGC06822/His蛋白,且免疫原性和反应原性良好。Sj CHGC06822蛋白免疫可以诱导BALB/c小鼠产生一定的保护力,诱导宿主的免疫应答更偏向于Th1型。     

日本血吸虫钙网织蛋白在Sf9昆虫细胞中的表达及其活化树突细胞的初步分析

为获得在Sf9昆虫细胞中表达的日本血吸虫钙网织蛋白(Schistosoma japonicum calreticulin protein,SjCRT)并分析其活化小鼠骨髓来源树突状细胞的功能,将构建的重组杆状病毒转移载体pFastBacHTA-SjCRT转入DH 10Bac细胞,得到重组穿梭质粒reBacmid-SjCRT,再转染到Sf9昆虫细胞,进行重组蛋白的表达.用Westem blot和间接免疫荧光对表达蛋白进行鉴定.His柱亲和层析法纯化表达的蛋白,Westen blot鉴定纯化后的蛋白.从BALB/c小鼠产生骨髓来源的树突细胞mDCs,用纯化的重组SjCRT蛋白与mDCs共培养,流式细胞术检测mDCs细胞的表面分子MHCⅡ、CD40和CD86的表达.结果显示,在Sf9昆虫细胞中成功表达了SjCRT蛋白;纯化后的重组SjCRT蛋白既能被感染日本血吸虫42 d的兔阳性血清识别,也能被原核表达的重组SJC RT蛋白免疫鼠的血清所识别.流式细胞术结果显示,与对照组的相比,SjCRT蛋白刺激组mDCs细胞表面分子MHCⅡ和CD86的表达量显著增强(P＜0.05).可见,在Sf9昆虫细胞中表达的SjCRT蛋白能刺激小鼠骨髓来源树突细胞表型的成熟.     

日本血吸虫保护性免疫机制的研究——活化巨噬细胞和超敏反应测定

本文用辐照致弱日本血吸虫童虫疫苗,冷冻辐照童虫苗和速冻致死童虫苗免疫雌性C57-BL/6小鼠。免疫后对小鼠腹腔巨噬细胞(MФ)的吞噬杀伤活性和超敏反应进行动态测定。结果表明2个活苗免疫组小鼠腹腔MФ体外表现出强烈杀伤童虫活性,杀伤力显著强于死苗免疫组和对照组(P<0.01);免疫后第6周杀伤力达峰值,第8周杀伤力下降;MФ杀伤力与保护力存在显著正相关(r=0.630,r>r0.05);活化MФ在免疫血清调理后杀伤活力有所增加,而免疫血清对于未活化MФ则无调理作用;活苗和死苗免疫鼠都出现强烈的速发型超敏反应,但与保护力之间缺乏相关性;迟发型超敏反应在本次实验中出现较弱。     

江滩地区耕牛血吸虫病季节性感染规律的研究

目的 :为了解江滩地区耕牛血吸虫病季节性感染规律。方法 :随机选择黄牛和水牛各 5 0头为研究对象 ,分别于 2 0 0 3年 3、5、7、9、1 1月和次年 1月中旬重复调查感染情况 ,对每次粪检阳性者均给予化疗。于同年 4月和1 1月分别用 GPS法对有螺滩地进行定位随机抽样调查钉螺。结果 :3、5、7、9、1 1月和次年 1月牛的感染率分别为1 1 .76 %、1 .6 5 %、9.76 %、2 0 .4 7%、1 9.84 %和 1 7.97% ;4月和 1 1月钉螺感染率、感染性钉螺密度分别为 3 .1 9%、1 .5 4只 /4m2 和 7.2 2 %、1 .6 4只 /4m2 。结论 :秋季为耕牛血吸虫病感染的高峰季节     

日本血吸虫促凋亡基因SjBAD真核表达及其功能研究

根据日本血吸虫促凋亡基因SjB AD的参考序列设计引物,应用PCR技术扩增SjB AD,选用pcD NA3.1(+)真核表达载体,构建pcDNA3.1(+)-SjB AD,并将其转染到293T细胞内,采用实时定量PCR检测SjB AD在转染入293T细胞培养不同时期后的转录水平;利用细胞流式术检测pcD NA3.1(+)-SjB AD转染入293T细胞后细胞的凋亡水平。结果:成功克隆、表达了日本血吸虫SjB AD基因,构建了真核重组表达质粒pcD NA3.1(+)-SjB AD,并将其转染入293T细胞内,利用实时定量PCR检测SjB AD在转染入293T细胞培养36h后转录水平最高。利用细胞流式术检测pcD NA3.1(+)-SjB AD转染入293T细胞后可以引起细胞凋亡。本文为研究线粒体细胞凋亡通路和血吸虫的生长发育奠定基础。     

曼氏血吸虫EST中的微卫星分析

美国基因组研究协会网上公布了138 259条曼氏血吸虫EST（表达序列标签）序列,总长约为52345kb。通过分析发现,其中包含了8 133条SSR（简单重复序列）,检出率为5.88%,平均每6.4 kb含有一个SSR。三核苷酸重复基元的SSR最多,占总数的54.2%,其次为二核苷酸和四核苷酸,分别占20.5%和20.6%,五核苷酸最少,只占4.7%。在曼氏血吸虫EST中没有发现单核苷酸重复基元和六核苷酸重复基元的SSR。同时,在各种SSRs重复单元中,富含A碱基的重复单元占据优势地位,如：AT、AG、AC、AAT、AAG、AAC、AAAT、AAAC、AAAAT和AAAAG重复基序,而富含GC碱基的重复单元在基因编码区中含量较低。本文通过分析SSR在曼氏血吸虫EST中的分布频率与密度,为曼氏血吸虫和近缘种属寄生虫SSR标记的开发提供信息,有利于进一步开展吸虫的系统发育以及比较基因组学的研究。