空肠弯曲杆菌SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立

空肠弯曲杆菌（Campylobacter jejuni）是一种人兽共患病病原菌,给养殖业带来了较大经济损失。为实现对空肠弯曲杆菌的快速检测,针对其MapA基因序列设计特异性引物,优化反应条件和反应体系,建立了空肠弯曲杆菌SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行了评估。结果显示：建立的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法具有良好的特异性,仅能特异性扩增出空肠弯曲杆菌,对胎儿空肠杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌无交叉反应;敏感性较强,最低检测限为6.42 copies/μL;以5个稀释度的重组质粒为模板分别进行组内和组间重复性试验,发现组内和组间Ct值变异系数（CV）均小于2.50%,说明该方法具有良好的可重复性。结果表明,本研究建立的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR具有良好的特异性、敏感性及重复性,可用于空肠弯曲杆菌的快速诊断和流行病学调查。     

鼠源细胞TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

为对鼠源细胞进行鉴别检测,以鼠线粒体16S rRNA基因序列为靶位点设计特异性引物及探针,建立实时荧光定量PCR检测方法,并评价该方法的特异性及敏感性。结果显示,所建立的检测方法特异性好,针对鼠源细胞基因组荧光定量PCR扩增曲线良好,其他物种来源细胞基因组及生物制品原辅材料未出现特异性扩增曲线;敏感性高,基因拷贝数检出限度为45.3拷贝。本试验建立的荧光定量PCR检测方法能够有效地对鼠源细胞进行快速检测,为细胞质量控制提供了有效方法。     

兔源强毒力金黄色葡萄球菌荧光定量PCR检测方法的建立

为了建立一种快速、特异性强且敏感性高的兔源强毒力金黄色葡萄球菌检测方法,本试验根据金黄色葡萄球菌pvl基因的保守序列设计了特异性的引物和探针,通过反应条件的优化,建立了检测兔源强毒力金黄色葡萄球菌的荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法耗时短,仅需约50 min就能完成检测,较已报道的双重PCR方法和环介导等温扩增方法均省时;该方法特异性强,对兔源低毒力金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌、肺炎克雷伯菌、魏氏梭菌、大肠杆菌和阴性对照(灭菌ddH₂O)均无交叉反应;该方法敏感性高,最低检测限为10拷贝/μL,分别是已报道的双重PCR方法和环介导等温扩增方法的1 000倍和10倍。此外,该方法重复性好,批内和批间重复性试验的变异系数均小于2%。应用该方法检测126份已知结果的临床样品,检测结果与已知结果、已报道的双重PCR方法和环介导等温扩增方法的检测结果完全一致。该方法的建立不仅丰富了兔源强毒力金黄色葡萄球菌的检测方法,也为该菌的快速检测提供了更有力的技术支持。     

pBI121载体酶切位点添加及拟南芥Na+/H+逆向转运蛋白基因表达载体的构建

对pBI121载体GUS基因后的终止子序列（Sac Ⅰ-EcoR Ⅰ）通过PCR扩增法进行了酶切位点的添加，即在SacⅠ后添加了XhoⅠ、在EcoRⅠ前添加了KpnⅠ。序列分析发现，两个酶切位点的添加是成功的，但扩增的终止子序列与原序列的同源性间有差异，即有4个碱基发生了变异，特别是第17个碱基位点出现了缺失。利用绿色荧光蛋白（GFP）对添加酶切位点载体进行了终止子活性的检测，结果发现，它与携带GFP的pBI121载体一样，GFP基因能正常表达，说明pBI121载体终止子序列酶切位点的添加是成功的。利用改造后的载体（pBI121-GZ）构建了CaMV35S启动子驱动AtNHX1基因的植物表达载体。     

12个竹种的45S rDNA和5S rDNA分布特性比较

【目的】分析12个竹种的45S rDNA和5S rDNA分布特征,并调查这些竹种的染色体数目和结构,为竹类植物系统分类和染色体结构等研究提供相应的细胞遗传学资料,为相关的染色体识别提供相应的染色体物理标记。【方法】以毛竹、花毛竹、龟甲竹、早竹、金镶玉竹、白哺鸡竹、紫竹、斑竹、黄秆乌哺鸡竹、人面竹、大明竹和茶秆竹为材料,以45S rDNA和5S rDNA为探针,采用双色荧光原位杂交技术分析45S rDNA和5S rDNA在这些竹种染色体上的分布。【结果】1)12个竹种的染色体数目均为2 n=48,45S rDNA在12个竹种染色体上展现出一定的多态性分布。(1)毛竹、花毛竹、龟甲竹、早竹、黄秆乌哺鸡竹和斑竹均具有2个45S rDNA位点,且2个45S rDNA位点信号强度和分布位置表现一致。(2)茶秆竹、人面竹、白哺鸡竹和金镶玉竹也具有2个45S rDNA位点,其中1个位点较为稳定,位于染色体末端,另外1个位点断裂严重,经常脱离分布位置。(3)紫竹和大明竹具有2个45S rDNA位点,这对位点在信号强度上存在较大差异,特别是紫竹表现更明显。2) 5S rDNA在12个竹种染色体上展现出了...     

光强对金丝李幼苗生长及光合特性的影响

【目的】研究岩溶山地的珍稀濒危树种金丝李苗对光照的需求及适应规律,为其引种、迁地保护、种群复壮、规模化栽培和用于岩溶山体生态恢复提供依据。【方法】将3年生金丝李幼苗进行为期2年相对光强10%、25%、50%和100%处理(分别记为RI10%、RI25%、RI50%和RI100%),对其生长和叶片特征、生物量分配、光合特性、叶片光合色素含量及叶绿素荧光参数进行比较,分析其对不同光环境的适应机制。【结果】1)金丝李幼苗在4种光强下均能生长,2年后RI25%和RI50%的地径、株高和冠幅显著大于RI10%和RI100%处理。2) RI25%的单叶面积和叶片厚度显著大于其他处理,生物量、比叶面积和叶面积比随光强增加呈先增大后减小的趋势,RI100%的根生物量比与根冠比最大,显著大于RI10%处理。3)第1年,幼苗的最大净光合速率(P_max)和表观量子效率(AQY)的排序为RI50%>RI25%>RI100%>RI10%,光饱和点(LSP)、光补偿点(LCP)和暗呼吸速率(R_d)均随着光强的增加而增大;第2年RI50%、RI25%和R...     

不同光质对福鼎大白茶叶片叶绿素荧光参数和呈味氨基酸积累的影响

以茶树品种福鼎大白茶为试材,采用LED精准可调人工气候箱设置红光(R)、蓝光(B)和红蓝组合光1.4∶1(RB)3个处理,以白光(W)为对照,研究红蓝光质对福鼎大白茶叶片叶绿素荧光参数和呈味氨基酸积累的影响。结果表明,与对照相比,红光降低了实际光量子产量[Y (Ⅱ)],蓝光升高了光能的利用效率(α)和潜在最大相对电子传递效率(rETR_max),红蓝混合光降低了Y (Ⅱ);从处理时间比较,随着处理时间的增加,α、rETR_max和强光耐受能力(I_k)在各种光照射下均表现先下降后升高最后下降的趋势;对氨基酸含量影响表现为红光增加苦味氨基酸含量,降低甜爽氨基酸和总游离氨基酸含量,蓝光和红蓝混合光增加甜爽氨基酸和总游离氨基酸含量。因此,蓝光和红蓝混合光处理有利于提高茶叶的品质。     

盐驯化对3个辣椒品种的高盐耐受性研究

2022年4—9月在江苏南京采用0、30、60、90和120 mmol/L NaCl浓度为0.3%的Hoagland溶液,对3个辣椒杂交种的幼苗进行了耐盐驯化;在人工气候室内,采用砂石栽培,用高浓度NaCl溶液(100和200mmol/L NaCl,以清水处理为对照)对上述材料进行了盐胁迫处理,利用叶绿素荧光成像系统对盐处理辣椒幼苗进行了生理指标测定。结果表明：(1)早期驯化对后期高盐分胁迫带来的影响,以60 mmol/L NaCl的驯化效果最为明显,所测定的9种表型性状指标,除了单株分支数、主茎节数外,大都极显著地优于其他NaCl处理浓度的;(2)低盐驯化过的3个辣椒品种在高盐处理时,除了单株分枝数和主茎节数外,3号品种其余性状大都优于1号和5号品种的;(3)检测植株叶绿素荧光参数,盐胁迫处理与对照相比,F_v/F_m、F_m、Rfd、qP荧光参数表现为下降,NPQ则表现为上升;(4)60 mmol/L NaCl驯化品种的叶绿素荧光参数优于其他盐浓度下的驯化品种。综合上述,盐驯化条件能够显著提高3个辣椒品种的耐盐性,最佳盐驯...     

毛细管电泳荧光检测中的异常电泳类型及原因分析

采用毛细管电泳荧光检测技术进行玉米SSR标记的片段分析.利用峰型、峰面积和其它荧光干扰峰等方面的特征对特异峰和非特异峰进行甄别.分析了特异峰的具体表现类型及原因:包括N 1峰、稀有峰、连续多峰、三峰和高低峰等.探讨了片段扩增产物大小与异常峰型的关系.为保证玉米品种DNA指纹库构建的标准化,提出了数据统计规范化的解决方案.