全文获取类型
收费全文 | 1325篇 |
免费 | 31篇 |
国内免费 | 88篇 |
专业分类
林业 | 14篇 |
农学 | 49篇 |
基础科学 | 2篇 |
31篇 | |
综合类 | 442篇 |
农作物 | 48篇 |
水产渔业 | 50篇 |
畜牧兽医 | 724篇 |
园艺 | 24篇 |
植物保护 | 60篇 |
出版年
2024年 | 9篇 |
2023年 | 21篇 |
2022年 | 49篇 |
2021年 | 41篇 |
2020年 | 24篇 |
2019年 | 39篇 |
2018年 | 7篇 |
2017年 | 36篇 |
2016年 | 29篇 |
2015年 | 20篇 |
2014年 | 48篇 |
2013年 | 53篇 |
2012年 | 62篇 |
2011年 | 94篇 |
2010年 | 64篇 |
2009年 | 91篇 |
2008年 | 86篇 |
2007年 | 81篇 |
2006年 | 74篇 |
2005年 | 71篇 |
2004年 | 51篇 |
2003年 | 46篇 |
2002年 | 31篇 |
2001年 | 37篇 |
2000年 | 32篇 |
1999年 | 38篇 |
1998年 | 35篇 |
1997年 | 36篇 |
1996年 | 41篇 |
1995年 | 35篇 |
1994年 | 23篇 |
1993年 | 23篇 |
1992年 | 7篇 |
1991年 | 7篇 |
1990年 | 1篇 |
1989年 | 1篇 |
1955年 | 1篇 |
排序方式: 共有1444条查询结果,搜索用时 31 毫秒
81.
柿属植物ISSR分析技术的建立 总被引:15,自引:0,他引:15
以部分柿属(Diospyros)植物为材料,对ISSR-PCR反应体系腗g2+、dNTPs、引物、模板DNA和Taq DNA聚合酶浓度,退火温度及扩增循环次数进行了探讨,确立了适合柿属植物ISSR分析技术体系在25 μL反应体系中,含1× Buffer,Mg2+2.0或2.5 mmol/L,dNTPs 0.2 mmol/L,引物0.6 μmol/L,Taq DNA聚合酶1U,甲酰胺2%,模板DNA 2.4 ng/μL;PCR扩增程序94℃变性3 min;94℃ 30 s,(Tm+2)℃(根据引物不同设定)45 s,72℃1.5 min,35个循环;72℃延伸7 min;2%琼脂糖电泳分离PCR产物.结果为柿属植物遗传多样性和分子系统学研究提供技术支持. 相似文献
82.
应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增38例 HBsAg 携带者和58例正常人血清中的HBV DNA 特异性片段,通过与 HBsAg 滴度及 HBV 血清标志物进行对比分析发现 HBV DNA 阳性率与 HBsAg 滴度呈正相关(r=0.981,p<0.005),与 HBeAg 减低,抗-HBe 产生以及其后的 e系统消失过程呈相应递减趋势。并且在单项抗-HBs 阳性的血清中,HBVDNA 检出率可达10%。 相似文献
83.
根据 Gen Bank中 Barrett报道的犬瘟热病毒弱毒株 Onderstepoort的血凝蛋白基因序列 ,设计合成了一对能扩增 76 0 bp基因片段的引物。用异硫氰酸胍 -酚 -仿一步抽提法提取细胞总 RNA进行反转录 ,再以此产物为模板进行 PCR扩增 ,筛选出最佳扩增条件。结果以此对引物进行 PCR扩增能得到与设计片段大小相同的产物 ,并且不扩增犬细小病毒、犬 I型腺病毒、犬冠状病毒、狂犬病病毒的核酸。敏感性试验证实 ,此法能扩增出稀释 1 0 0 0倍的 CDV强毒细胞培养物 ( 1 0 5 .1 TCID5 0 /0 .1 ml)的反转录产物 ,其敏感性远高于电镜负染和荧光抗体染色法。经初步应用表明 ,此法可用于犬瘟热的临床诊断和实验研究。 相似文献
84.
以水稻广陆矮4号为材料,利用PCR技术从水稻基因组中扩增出10kD富硫醇溶蛋白基因,并将其插入质粒pU18的Sma I位点,导入大肠杆菌JM109中筛选重组子。经酶切鉴定、PCR检测获得含目的基因的克隆。采用银染测序法进行序列分析。结果表明,克隆的基因含402bp的OPF,与Masumura发表序列的同源率为87.3%,编码133个氨基酸,包括24个氨基酸的信号肽序列,推测的氨基酸序列与Masum 相似文献
85.
86.
为构建山羊乳腺基因打靶载体的选择标记盒,将loxP位点分别引入正、反向引物,以含新霉素磷酸转移酶(neo)基因的质粒pTarget为模板,用高保真聚合酶链反应(PCR)扩增得loxP neo loxP选择标记盒。将PCR产物克隆到pGEM T载体后进行的序列分析结果显示,引入的loxP位点及扩增后的neo基因序列均是正确的。将此选择标记盒克隆到不含neo基因的真核表达载体ΔpTarget后转染COS 1细胞,经过G418筛选获得药物抗性细胞克隆。再将此选择标记盒克隆到山羊β 乳球蛋白基因打靶载体并转染山羊成纤维细胞,经过G418选择后也获得抗性细胞克隆。结果表明:克隆的loxP neo loxP选择标记盒可用于基因打靶载体的构建。 相似文献
87.
苹果茎沟病毒RT-PCR检测技术 总被引:2,自引:3,他引:2
用苹果的叶片作为材料,研究比较了两种提取苹果总RNA方法的效果,确定了较好的提取方法。根据苹果茎沟病毒外壳蛋白基因设计引物,通过RT-PCR扩增在苹果叶片总RNA样品中获得了524 bp的特异片断,通过对该片段的序列分析与苹果茎沟病毒外壳蛋白基因源序列比较,其同源性高达93%。通过多次重复实验验证,该方法能很好地检测苹果茎沟病毒。 相似文献
88.
性别确定有重要的临床意义,采用聚合酶链反应(PCR),扩增Y染色体上的性别决定区(SPY基因)的开放阅读框架(217bp),可确定临床患者是否存在SRY基因,帮助了解性别异常的机制。讨论了一例染色体核型为46,XX伴SRY基因的性反转的发生原因。 相似文献
89.
由于蜜蜂疾病的传统诊断方法费时、费力,因此开发快速诊断技术非常重要。分子生物学技术的发展为其提供了可能。笔者对PCR技术在蜜蜂疾病诊断中的应用现状作了综述,并对其中存在的问题和应用前景进行了探讨。 相似文献
90.
PCR方法检测2型猪链球菌2种毒力因子 总被引:21,自引:4,他引:21
根据 2型猪链球菌毒力因子溶菌酶释放蛋白 (MRP)与细胞外蛋白因子 (EF)基因 (mrp与 epf)序列 ,分别设计、合成一对引物 ,建立聚合酶链反应 (PCR)方法。该方法扩增出 2型菌株的 mrp大小为 885 bp,epf为 62 6bp,而对马链球菌兽疫亚种 (C群 )、猪丹毒杆菌、猪肺疫巴氏杆菌、猪肺炎霉形体等 PCR均未扩增出任何条带。用 Xba 和 H ae 分别酶切 PCR扩增产物 ,均获得与预计一致的酶切图谱 ,PCR扩增产物测序结果显示 :其基因序列分别与 Gen Bank上公布的mrp全基因第 5 0 0~ 1 3 1 5位碱基及 epf全基因第 2 441~ 3 0 2 8碱基对一致。PCR检测的敏感度可达 1 0 0个细菌。用建立的 PCR对从病猪体内分离的菌株进行检测 ,检测的 1 5株 2型分离株中有 1 3株 mrp与 epf均为阳性 ,为典型的高毒力表现型菌株 (mrp epf ) ,1株为 mrp epf- ,1株为 mrp- epf- 。 相似文献