猪繁殖与呼吸综合征病毒胶体金检测试纸卡的研制

为快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒,应用抗猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体PRRSV-3D10株和4H11株分别作为胶体金标记物和诊断抗体,羊抗鼠IgG作为质控线,制备胶体金免疫层析抗原检测试纸。该试纸卡具有良好的特异性、敏感性、重复性和稳定性,与PCR方法对比总符合率为93．3％。研究显示,本试纸卡能够快速、准确检测猪繁殖与呼吸综合征病毒,可为临床诊断提供参考。     

鸡传染性贫血病毒VP1、VP2基因在杆状病毒表达系统中的表达

将鸡传染性贫血病毒M9905株VP1、VP2基因分别或同时克隆到杆状病毒转移载体pFastBacDUAL中，然后转化到DHIOBAC感受态细胞中与Bacmid杆状病毒穿梭载体进行转座重组，最后将重组子转染Sf9昆虫细胞，得到分别或同时含VP1、VP2基因的重组杆状病毒rBacVP1、rBacVP2及rBacVP1—2。PCR扩增结果证实VP1、VP2基因重组到杆状病毒基因组中；SDS-PAGE电泳分析和间接免疫荧光试验结果表明VP1、VP2基因在重组病毒中得到了表达。     

新城疫病毒ClassⅠ强毒株磷蛋白在细胞中的表达与定位

根据Class Ⅰ新城疫病毒分离株9a5b编码序列设计特异性引物扩增P蛋白基因,原核表达后利用纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,经二次亚克隆后筛选到4株针对P蛋白的单克隆抗体,利用所得单抗进行P蛋白在细胞内定位分析,NDV 9a5b株按5 M.O.I感染量接种DF1单层细胞,当PI=4 h时,P蛋白呈点状弥散分布于细胞浆内;PI=6~8 h时,P蛋白聚集于细胞核周围;PI=12 h时,P蛋白呈单极化聚集于细胞核一侧;而PI=16 h后开始形成合胞体,P蛋白在单个细胞中仍呈现单极分布;当PI=48 h时,细胞核已发生碎裂,荧光强度有所减弱。本研究为深入开展P蛋白在病毒增殖以及细胞周期中的作用机制研究奠定了基础。     

口蹄疫病毒P1-2A和3C蛋白重组腺病毒的构建及其免疫原性研究

为研制口蹄疫病毒(FMDV)的新型重组腺病毒疫苗,本研究通过RT-PCR扩增FMDV GD株3C、P1、P1-2A、L-P1和L-2A基因,分别构建重组腺病毒穿梭质粒,并在含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183E.coli中同源重组获得腺病毒重组质粒pAd-3C、pAd-P1、pAd-P1-2A、pAd-L-P1、pAd-L-2A,经PacⅠ线性化后转染AD-293细胞,获得含有目的基因的重组腺病毒。将具有感染能力的复制缺陷型重组腺病毒rAd-3C分别与rAd-P1、rAd-P1-2A、rAd-L-P1、rAd-L-2A共感染Vero细胞,裂解细胞收集细胞上清液并进行小鼠免疫试验。经ELISA检测表明,重组腺病毒rAd-3C分别与rAd-P1-2A、rAd-L-2A共感染Vero细胞上清液能够诱导小鼠产生特异性体液免疫应答。     

猪捷申病毒Swine/CH/IMH/03株免疫原性的研究

为确定猪捷申病毒(Porcine Teschovirus,PTV)Swine/CH/IMH/03株免疫原性,本研究将该PTV分离株灭活后分别与氢氧化铝佐剂和Montanide ISA 50V2佐剂混合,制成油佐剂疫苗,并采用不同免疫程序接种实验猪后对病毒抗体进行检测。抗体检测结果表明:PTV Swine/CH/IMH/03分离株能够诱导实验动物产生较高抗体水平,并显著高于对照组;与氢氧化铝佐剂混合制成的佐剂疫苗免疫效果优于Montanide ISA 50V2佐剂;而且一次免疫组与二次免疫组没有明显差异。通过PTV Swine/CH/IMH/03株免疫原性的研究,为后续猪捷申病的预防工作提供技术支持。     

格鲁吉亚暴发非洲猪瘟

英国缝康保护机构5月25日发布公报说，4人被确诊感染了禽流感病毒，但好在他们感染的并非H5N1型高致病性禽流感病毒，而是危险性较小的H7N2型禽流感病毒。     

犬细小病毒高效纳米PCR检测方法的建立及初步应用

为建立灵敏、快速的犬细小病毒(CPV)检测方法,本研究针对CPVVP2基因保守序列设计一对能扩增574bp片段的特异性引物,对纳米PCR的退火温度、引物浓度等反应条件进行了优化,并对其特异性和灵敏度进行了评估。结果表明,所建立的纳米PCR特异性和灵敏性良好,最低核酸检出量为2拷贝·μL^-1,其敏感性比常规PCR高1000倍。分别采用纳米PCR和常规PCR,对广西、北京、吉林送检的75份疑似CPV的临床样品进行检测,CPV阳性率分别为89.3%(67/75)和70.7%(53/75),表明该方法具有更高的敏感性,适用于CPV低含量临床样品的检测。本方法的建立为CPV感染的早期快速、灵敏、准确的诊断提供了新方法,为CPV的防控奠定基础,具有重大的临床应用意义和价值。     

对虾白斑综合症病毒检测技术概述

对虾白斑综合症病毒(White Spot Syndrome Virus，WSSV)病是全世界范围内对养殖对虾危害最大的病毒病。迄今为止，学者们对引起该病的病毒命名尚不统一，有白斑杆状病毒(White Spot Baculovirus，WSBV)、皮下及造血组织坏死病杆状病毒(Hepodermal and Hematopoietie Necroisis Bacu—     

南方根结线虫Col基因分子克隆及其VIGS效应分析

为了明确线虫角质层胶原蛋白基因(Col)与根结线虫病害的关系,利用从线虫基因组中预测的Col设计特异引物,克隆了南方根结线虫Meloidogyne incognitacol基因MiCol.该基因完整编码区长903bp,编码300个氨基酸.克隆的MiCol与预测的MiCol基因序列一致性高达99.67％,氨基酸序列一致性高达100％.利用病毒介导的基因沉默技术,将其导入番茄植株并接种南方根结线虫,60 d后,沉默载体pTV-MiColi处理番茄植株的根结数比空载体对照及清水对照分别减少49.4％和49.2％,表明MiCol基因沉默显著降低了南方根结线虫的侵染数量.     

猪流行性腹泻病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

根据Gen Bank报道的N基因高度保守核苷酸序列,设计并合成一对引物。上下游引物与Gen Bank中登录的153株猪流行性腹泻病毒(PEDV)N基因全长序列匹配度分别是100%和97%。以本实验室分离流行毒株为模板,利用SYBR Green I荧光染料法进行RT-PCR扩增,获得扩增产物构建重组质粒作为阳性对照,建立检测猪流行性腹泻病毒核酸的方法。同一样品进行3次重复试验,变异系数0.9%。通过对临床样品进行检测和测序验证,核酸检测结果中的阳性样品准确率为100%。本研究所建立的荧光定量PCR检测方法具有快速、灵敏、准确等优点,可用于临床PEDV的检测及分子流行病学调查。