草鱼胰岛素样生长因子-Ⅰ的融合表达、纯化和抗血清制备

采用PCR方法改造已克隆到的草鱼胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)cDNA,使其成为成熟肽cDNA并亚克隆到pGEX-4T-1载体中,构建草鱼IGF-Ⅰ融合蛋白表达质粒pGEX-IGF.质粒转化大肠杆菌BL21菌株.该菌株经IPTG诱导可表达分子量约34kD的特异蛋白.在不同的温度条件下分别产生以可溶性的和包涵体形式为主的特异蛋白.经30℃诱导的菌体经溶菌酶消化、超声破碎及高速离心后,裂解液上清经glutathionesepharose亲和层析纯化获得高纯度的GST-IGF.以此纯化的融合蛋白为抗原制备兔抗草鱼IGF-Ⅰ的抗血清.凝胶双扩散试验显示抗血清效价为1:64,说明表达产物具免疫原性.     

哲罗鲑胰岛素样生长因子－I（IGF－I）cDNA 分子克隆、序列分析及组织表达

采用逆转录聚合酶链式反应（RT－PCR）方法,从哲罗鲑（Hucho taimen）肝脏的总 RNA 中扩增出胰岛素样生长因子－I（IGF－I）的 cDNA 开放阅读框（Open reading frame, ORF）序列,运用软件对其进行生物信息学分析,并利用荧光实时定量 PCR 技术检测了哲罗鲑成鱼不同组织中 IGF－I mRNA 的表达情况。结果显示, IGF－I 基因的 cD－NA 开放阅读框为573 bp,编码190个氨基酸,蛋白质等电点为9．21,氨基酸结构由信号肽、 B、 C、 A、 D 结构域及 E 肽组成;氨基酸序列与其他鲑科鱼类具有较高的同源性,其中与北极红点鲑的 IGF－I 同源性最高（99．2％）;组织表达分析显示,哲罗鲑 IGF－I mRNA 在肝脏中表达量最高,在鳃、前肠中次之,在脑、头肾、脾、心、胃和肌肉等组织中的表达量较低。     

绵羊胚胎FGF5基因单碱基突变体系的建立

研究旨在利用单碱基编辑技术定点修饰绵羊（Ovis aries）成纤维细胞生长因子5（fibroblast growth factor 5，FGF5）基因第1外显子以引入终止密码子，获得定点编辑类型的绵羊胚胎，为培育具有长毛性状的绵羊提供试验材料。首先设计合成4个单导向RNA （single guide RNA，sgRNA）寡核苷酸链（sgRNA-T1~sgRNA-T4），构建4组不同的重组表达载体；将构建好的pGL3-U6-sgRNA-PGK-puromycin和pCMV-AncBE4max-P2A-GFP质粒以共转染的方法分别转入4组绵羊成纤维细胞，随后用Cruiser^TM酶对转染的细胞进行活性检测并在胚胎水平进行测序验证。结果显示，sgRNA-T1和sgRNA-T4组细胞的PCR产物可被Cruiser^TM酶酶切，且测序结果表明都具有靶向效果，编辑效率分别为68.75%和47.37%。利用显微注射技术将不同浓度的AncBE4max mRNA与有效sgRNA混合注射到绵羊孤雌激活胚胎中，并检测胚胎卵裂率、囊胚率和编辑效率，结果显示，胚胎水平的最佳注射浓度组合为AncBE4max （ng/μL）∶sgRNA （ng/μL）=100∶50，从该浓度组中随机挑选的单枚胚胎测序结果显示，引入终止密码子的编辑效率为80%。而sgRNA-T1在不同浓度组合的注射胚胎中均未检测到编辑。本研究针对FGF5基因的第1外显子，通过在成纤维细胞转染表达载体，成功筛选到高效靶向绵羊FGF5基因的2个sgRNA （T1、T4）；通过显微注射绵羊孤雌激活胚胎，成功在胚胎上实现FGF5基因第1外显子打靶位点C→T的转变，为后期FGF5基因定点编辑羊的生产奠定基础。     

表皮生长因子对肉鸡十二指肠形态结构、消化酶活性以及表皮生长因子受体表达的影响

本试验旨在研究肉鸡饲粮中添加表皮生长因子(EGF)对十二指肠形态结构、消化酶活性和表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响。试验选用72只1日龄爱拔益加(AA)肉鸡,随机分成4个组,每组3个重复,每个重复6只。对照组(CK组)饲喂基础饲粮,抗生素组(K组)在基础饲粮中添加250 mg/kg盐酸金霉素,EGF组(E组)在基础饲粮中添加500 mg/kg EGF,EGF+抗生素组(E+K组)在基础饲粮中添加500 mg/kg EGF+250 mg/kg盐酸金霉素。试验期为42 d。采用苏木精-伊红(HE)染色、双抗体夹心和原位杂交方法,分别检测了十二指肠黏膜形态,碱性蛋白酶、脂肪酶和α-淀粉酶活性以及EGFR的表达。结果表明:1)28、35、42日龄时,各组十二指肠碱性蛋白酶活性无显著差异(P0.05),但E组十二指肠碱性蛋白酶活性均为最高。21、28、35、42日龄时,各组十二指肠脂肪酶活性无显著差异(P0.05),但E组十二指肠脂肪酶活性均为最高。35日龄时,E组十二指肠α-淀粉酶活性显著高于CK组和E+K组(P0.05);42日龄时,E组十二指肠α-淀粉酶活性极显著高于K组和E+K组(P0.01)。2)21日龄时,E组十二指肠EGFR基因平均光密度值显著高于CK组(P0.05);42日龄时,E组和K组十二指肠EGFR基因平均光密度值极显著高于CK组和E+K组(P0.01)。3)21日龄时,K组和E组十二指肠绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度显著高于CK组(P0.05)。28、35和42日龄时,各组十二指肠绒毛高度、隐窝深度和绒毛高度/隐窝深度无显著差异(P0.05)。21、35和42日龄时,E组绒毛高度/隐窝深度均为最高。综上所述,饲粮添加500 mg/kg EGF能促进21、28、35、42日龄肉鸡十二指肠黏膜形态的发育,增强十二指肠中碱性蛋白酶、脂肪酶和α-淀粉酶活性,提高十二指肠EGFR的表达。     

补喂N-甲基-D-天冬氨酸对哺乳期湖羊羔羊生长及生长轴相关激素水平的影响

本试验旨在探究日粮中补喂N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）对湖羊哺乳期羔羊生长及生长轴相关激素的影响，为NMDA在哺乳期湖羊羔羊养殖中的应用提供科学依据。采用单因素多水平随机分组试验设计，选取平均体重为（5.6±1.15）kg、体况健康的7日龄羔羊32只为试验研究对象，随机分为4组，分别为CON组、1.25 NMDA组、2.5 NMDA组、5 NMDA组，每组8只。所有羔羊正常随母羊吮乳，7日龄开始补喂精料，自由采食。在此基础上，NMDA补喂水平分别为0、1.25、2.5、5 mg/kg BW只，进行为期38 d试验。结果表明：（1）在生长发育方面，补喂NMDA显著提高了湖羊哺乳期羔羊总增重，以1.25 mg/kg BW时效果最佳。（2）在血液生化指标方面，哺乳期羔羊补喂NMDA 14 d血浆中，1.25 NMDA组血浆中白蛋白含量显著高于CON组（P <0.05），提高了14.12%；各组血浆中胰岛素含量显著低于CON组（P <0.01）;5 NMDA组血浆中甘油三酯含量显著高于对照组及其他水平组（P <0.05）；各组血浆尿素含量与CON组相比分别降低了24.1%...     

脐静脉血脂联素、胰岛素和IGF-1含量与犊牛初生质量的相关性

选取规模化养殖场正常分娩奶牛54头,按犊牛初生质量划分为A组(≤40kg)9头、B组(40~45kg)25头、C组(≥45kg)20头共3组,母牛分娩后立即采集脐静脉血,ELISA法检测血液脂联素、胰岛素和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)含量,分析其间的相关性及与犊牛初生质量的相关性。结果表明,3组脐静脉血中均有脂联素、胰岛素和IGF-1表达,随犊牛初生质量增加,脐静脉血中脂联素、胰岛素和IGF-1含量均逐渐增加。其中A组脂联素含量显著低于C组(P0.05),A、B组和B、C组脂联素含量均分别差异不显著(P0.05);A、B组胰岛素、IGF-1含量均分别显著低于C组(P0.05);A、B组胰岛素、IGF-1含量均分别差异不显著(P0.05);脐静脉血脂联素、胰岛素和IGF-1含量均分别与犊牛初生质量呈极显著性正相关(P0.01);脐静脉血脂联素、胰岛素和IGF-1含量两两间均呈极显著性正相关(P0.01);公犊牛脐静脉血脂联素和胰岛素含量均略高于母犊牛脐静脉血,而公犊牛脐静脉血IGF-1含量略低于母犊牛脐静脉血,但脐静脉血脂联素、胰岛素、IGF-1含量在公、母犊间差异均分别不显著(P0.05)。据此得出,脐静脉血均有脂联素、胰岛素和IGF-1表达;脐静脉血脂联素、胰岛素和IGF-1含量均对犊牛初生质量影响较大;但脐静脉血脂联素、胰岛素、IGF-1含量在公、母犊间差异性均不显著;为进一步研究脐静脉血脂联素、胰岛素和IGF-1对犊牛宫内生长发育的影响机理提供参考。     

IGF-1和IGFBP-3在5个地方猪种血液中含量及其与猪肉质性状相关性分析

为研究胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)在血液中的含量及其与胴体和肉质表型指标的相关性,采用ELISA技术检测了丫杈猪、乌金猪、成华猪、雅南猪和藏猪血液中IGF-1和IGFBP-3的含量,同时测定了肌纤维直径和眼肌面积。结果显示:藏猪肌纤维直径最小,且显著低于丫杈猪、乌金猪、成华猪和雅南猪(P<0.05);丫杈猪和乌金猪的眼肌面积极显著高于藏猪(P<0.01),显著高于成华猪(P<0.05);血液中丫杈猪的IGF-1含量极显著地低于乌金猪、雅南猪和藏猪(P<0.01),乌金猪、成华猪和雅南猪的IGF-1含量极显著地低于藏猪(P<0.01);丫杈猪的IGFBP-3含量极显著地高于雅南猪和藏猪(P<0.01),乌金猪的IGFBP-3在血液中的含量显著地高于雅南猪和藏猪(P<0.05);相关性分析显示,肌纤维直径与IGF-1呈显著负相关(r=-0.51,P<0.05),眼肌面积与IGFBP-3呈显著正相关(r=0.57,P<0.05)。结果表明:可以通过调控IGF-1和IGFBP-3含量来调控猪的胴体品质和肉质。     

外用碱性成纤维细胞生长因子在糖尿病足溃疡的疗效分析

目的评价外用碱性成纤维细胞生长因子在糖尿病足溃疡的疗效。方法将124例糖尿病足患者按溃疡分级分为实验组(外用碱性成纤维细胞生长因子)和对照组,实验组在常规治疗的基础上采用外用碱性成纤维细胞生长因子,并与对照组进行比较。结果实验组的疗效明显优于对照组(有效率分别为96.67%和76.56%,P<0.05),治愈时间较短[(18.45±5.23)天比(22.60±6.11)天,P<0.01)]。结论外用碱性成纤维细胞生长因子治疗糖尿病足溃疡的临床效果较好,值得进一步研究并推广应用。