鹿茸多肽及其生长因子制备工艺的研究进展

鹿茸是我国传统中药材,鹿茸多肽及其生长因子具有重要的生理功能。本文综述了鹿茸多肽及其生长因子的提取、分离、纯化以及文库构建表达的应用前景。     

乳化植物甾醇对雄性日本鹌鹑生长性能及相关激素水平的影响

为研究乳化植物甾醇对雄性日本鹌鹑(Coturnix coturnix japonica)生产性能、胰岛素样生长因子1(IGF-1)和肾上腺皮质酮水平的影响,将100只体质量为(70±4)g的26日龄雄性日本鹌鹑分为4组,每组5个重复,每只鹌鹑每天灌喂含0、0.1、0.2和0.4 mg.mL-1植物甾醇的乳化液0.2 mL。21 d后,采食量、体质量增加和饲料转化率均无显著变化(P>0.05),但饲料转化率随植物甾醇灌喂量的提高呈下降趋势。植物甾醇乳化液均显著提高了鹌鹑血清中的IGF-1含量(P<0.05),但不影响皮质酮水平(P>0.05),血清丙二醛(MDA)含量也无显著变化(P>0.05)。0.04和0.08 mg.d-1植物甾醇显著降低了血清总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平(P<0.05)。结果提示:植物甾醇能显著上调雄性日本鹌鹑IGF-1水平从而对其生产性能产生潜在影响。     

日粮粗蛋白质水平对鹅组织IGF-ImRNA表达的影响

为了探明不同粗蛋白质(CP)水平日粮对鹅组织中胰岛素样生长因子-I基因(IGF-I)mRNA表达量的影响,为科学配制肉鹅饲料提供理论依据,采用半定量RT-PCR方法检测分别饲喂粗蛋白质水平为16％、18％、20％日粮的28日龄苏牧白鹅的肝脏、腿肌和胸肌组织的胰IGF-I mRNA表达量差异.结果表明:在不同粗蛋白质水平下鹅的肝脏和胸肌组织中均能检测到IGF-I mRNA表达,而在腿肌中未能检测到该基因mRNA表达.在肝脏组织中,18％CP组IGF-I mRNA表达量低于16％CP组和20％CP组,后两者之间无显著差异.在母鹅胸肌组织中,各组IGF-ImRNA表达量无显著差异;但20％CP组公鹅的IGF-I mRNA表达量显著高于16％CP组.20％CP组公鹅IGF-I mRNA表达量显著高于母鹅,18％CP组、20％CP组公鹅肝脏组织IGF-I mRNA表达量极显著低于母鹅,其他组公母间差异均不显著.不同粗蛋白质水平能影响鹅组织中IGF-I mRNA表达;在相同粗蛋白质水平的日粮和同性别条件下,IGF-I mRNA相对表达量肝脏大于胸肌,腿肌中未检出.     

小鼠FGF9在大肠杆菌中的表达与纯化

为了建立小鼠FGF9的原核表达体系,获得纯化的FGF9重组蛋白,采用PCR技术扩增FGF9,并将其克隆入原核表达载体pET30a(+)中,经测序验证后将该重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,采用亲和层析技术进行目的蛋白的纯化,并用Western blotting进行了免疫原性验证.测序结果显示插入到载体中的片段与FGF9的天然序列一致,在BL21(DE3)中表达出了可溶性的FGF9重组蛋白,其表达量达到总蛋白的40 %;用镍螯合亲和层析方法获得了纯度大于95 %的FGF9重组蛋白.     

强力霉素对骨关节炎大鼠膝关节软骨成纤维细胞生长因子-18表达的影响

目的 探讨强力霉素对骨关节炎大鼠膝关节软骨成纤维细胞生长因子-18(FGF-18)表达的影响.方法 32只SD大鼠通过膝关节前交叉韧带离断建立骨关节炎模型,随机分为A、B、C、D组,分别每日1次腹膜腔注射0.9％氯化钠溶液1 mL及3、6、9 mg/(kg.d)强力霉素溶液,共8周;免疫组化染色检测股骨髁FGF-18表达.结果 强力霉素处理组FGF-18表达低于对照组(P＜0.05),而不同剂量强力霉素组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 强力霉素可减少骨关节炎大鼠膝关节软骨FGF-18表达.     

慢病毒介导的CRISPR/Cas9敲除TGF-β1基因对鹿茸软骨细胞增殖的影响

为探究TGF-β1基因在鹿茸快速生长期的作用,利用慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因编辑技术,设计并构建3条靶向梅花鹿TGF-β1基因第1外显子的gRNA寡核苷酸序列,在人胚肾细胞293T内进行慢病毒包装,通过neo抗性筛选稳转细胞株。提取稳转细胞株总蛋白,经BCA法测定总蛋白质量浓度,Western Blot检测TGF-β1蛋白的相对表达水平;MTT法检测TGF-β1基因敲除对鹿茸软骨细胞体外增殖的影响。结果表明:成功构建了靶向梅花鹿TGF-β1的CRISPR/Cas9基因敲除载体p BOBI-gRNA2。TGF-β1基因的缺失抑制了鹿茸软骨细胞的体外增殖。     

人表皮生长因子融合蛋白在干酪乳杆菌中的表达

以干酪乳杆菌作为传递载体,构建表达人表皮生长因子的重组干酪乳杆菌,探讨原位表达特定蛋白的可行性。采用SOE PCR合成人表皮生长因子序列,克隆到干酪乳杆菌表达载体pELWH,构建pELWHhEGF重组质粒,将该质粒电转化干酪乳杆菌宿主,采用Western blot及间接免疫荧光检测目的蛋白的表达,并通过细胞增殖实验验证目的蛋白的生物学活性。结果表明:在重组菌的细胞表面及培养液上清中均检测到SlpA-hEGF融合蛋白,分子质量约55ku;细胞增殖实验显示SlpA-hEGF融合蛋白及干酪乳杆菌上清均能显著促进NIH/3T3细胞的增殖。     

转人表皮生长因子基因红花研究

【目的】制备转人表皮生长因子(Human epidermal growth factor,hEGF)基因红花植株,为利用植物生物反应器规模化生产hEGF奠定基础。【方法】利用分子生物学方法将植物偏好的双基因hEGF克隆至表达载体pOP上,构建了重组质粒pOP-hEGF-hEGF,采用冻融法将质粒pOP-hEGF-hEGF转入根癌农杆菌EHA105中,通过农杆菌介导方法转化红花,采用PCR检测、Southern blot筛选转基因红花阳性植株。【结果】成功构建了植物特异表达载体pOP-hEGF-hEGF,通过转化红花子叶,共获得了30株转基因红花植株,其中3株鉴定为阳性,转化率为10%;对转化植株进行分子生物学检测,从DNA水平检测结果可知,hEGF基因已整合进红花基因组中。【结论】获得了转hEGF基因的红花株系。     

表皮生长因子对21日龄肉鸡肠道菌群多样性的影响

【目的】研究表皮生长因子（EGF）对肉鸡肠道菌群的影响。【方法】将72只1日龄AA肉鸡随机分成对照组（CK）、K组、E组和EK组,每组3个重复,每个重复6只鸡。CK组肉鸡饲喂基础饲粮,K组肉鸡饲喂添加250 mg/kg盐酸金霉素的饲料,E组肉鸡饲喂添加500 mg/kg EGF的饲料,EK组肉鸡饲喂添加500 mg/kg EGF和250 mg/kg盐酸金霉素的饲料。饲喂期21 d。21日龄时采集肉鸡盲肠内容物样本,采用16S rDNA基因分析方法对肉鸡盲肠中的细菌群落进行评价,利用 QIIME等测序分析软件对肉鸡盲肠中的菌群进行分类。【结果】1）菌种组成结果表明,无论是OTUs总数还是独有的OTUs数量,E组的菌种数量较CK组、K组高,而与EK组的数量接近。2）优势菌群分布结果表明,在门水平上,厚壁菌门在E组中含量最高,而K组与CK组中变形菌门水平相当;在种水平上,与CK组相比,E组肉鸡肠道中乳酸菌数量显著升高。3）Alpha 多样性分析表明,E组中观察到的菌种数、菌种多样性指数和菌种丰富度指数高于CK组和K组,但无显著性差异（P>0.05）。4）功能预测结果表明,CK组肠道微生物在遗传信息处理方面的功能较丰富,EK组在有机体系统、代谢作用和细胞工程方面的功能较丰富,E组各类功能较为均衡,而K组除未分类功能外,主要以环境信息处理功能较为丰富。【结论】喂饲500 mg/kg的EGF有助于提高肉鸡肠道内菌群多样性,并能改善肠道菌群结构,提高以乳酸菌为代表的厚壁菌门菌群丰度,降低以大肠杆菌为代表的变形菌门菌群含量。     

小球藻生长因子对凡纳滨对虾生长及营养成分的影响

为探明饲料添加小球藻生长因子对对虾生长性能、基础体成分和营养成分的影响,以凡纳滨对虾幼虾为试验对象,在基础饲料中分别添加0%、0.5%、1.0%、5.0%、10.0%、15.0%的小球藻生长因子,进行45 d的养殖试验,测定其生长性能、基础体成分和营养成分。试验结果显示,饲料添加小球藻生长因子能够提高凡纳滨对虾的存活率、质量增加率和特定生长率,降低饲料系数。饲料中添加小球藻生长因子能够降低凡纳滨对虾水分、粗脂肪和灰分含量,提高虾体粗蛋白含量,其中1%组凡纳滨对虾水分、粗脂肪、灰分均最低,粗蛋白最高。饲料添加10.0%～15.0%的小球藻生长因子凡纳滨对虾脂肪酸总量、饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸含量显著升高。饲料添加小球藻生长因子能够提高凡纳滨对虾多不饱和脂肪酸占比,降低饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸占比,其中1.0%组凡纳滨对虾饱和脂肪酸占比最低。饲料添加不同比例小球藻生长因子(除10.0%组)能显著提高肌肉氨基酸总量和必需氨基酸含量(P<0.05)。试验结果表明,饲料添加一定比例的小球藻生长因子能够提高凡纳滨对虾存活率和生长性能,降低水分、脂肪、灰分比例,提高蛋白比例...