铺地黍染色体制片优化及核型分析

以铺地黍(Panicum repens)根尖为材料,比较不同的预处理、固定、前低渗、解离条件对染色体制片效果的影响,并进行核型分析。结果表明,铺地黍染色体制片的优化条件分别为：冰水混合物、4 ℃条件预处理22 h,卡诺氏固定液Ⅰ、4 ℃条件固定24 h,0.075 mol·L?1 KCl溶液在25 ℃条件前低渗15～20 min,1%果胶酶和2%纤维素酶混合酶液于25 ℃条件酶解3 h。铺地黍核型公式为2n = 2x = 40 = 34m + 6sm,未发现有随体;染色体绝对长度范围为10.87～19.21 μm,属于大型染色体;染色体相对长度组成为2n = 40 = 2L + 16M2 + 22M1;最长与最短染色体长度比值为1.77,臂比值范围为1.04～2.08;核型不对称系数为58.99%,核型类型属于2A型,其在进化类型上可能属于原始类型,为铺地黍的起源、演化及遗传育种提供了一定的理论依据和技术基础。     

辣椒根尖预处理及植株倍性鉴定

采用0.1%秋水仙素、0.002 mol/L 8-羟基喹啉和冰水3种试剂对辣椒辛香8号花药培养再生植株根尖进行预处理,研究不同预处理对根尖细胞中期分裂相的影响效果,并对辣椒花药培养再生植株进行倍性鉴定,以期获得辣椒染色体计数的最佳预处理。结果表明:3种预处理中,利用0.1%秋水仙素对辣椒根尖预处理3 h,细胞的中期分裂指数最高,达56.6‰,而且染色体分散度好,染色体分裂相多,比较适合染色体计数;经染色体计数鉴定得出5株花药培养再生植株中有4株双倍体和1株单倍体,可用于下一步育种实践中。     

百子莲茎尖分生组织蛋白双向电泳体系的建立

以‘蓝色大花’百子莲(Agapanthus praecoxssp.orientalis‘Big blue’)茎尖分生组织为材料,对比研究了不同提取与裂解方法制备蛋白样品以排除多酚、多糖及核酸物质对蛋白双向电泳体系(Two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)的干扰。提取过程采用TCA/丙酮沉淀法和超声波破碎法;蛋白裂解过程中分别使用苯甲基磺酰氟(Phenylmethanesulfonyl Fluoride,PMSF)和乙二胺四乙酸(Ethylene Diamine Tetraacetic Acid,EDTA)、Cocktail(广谱性)蛋白酶抑制剂、核酸酶Nuclease Mix和2-D Clean-Up蛋白纯化试剂盒。制备的各蛋白样品经过7cm IPG(pH 3~10)胶条上样、电泳后发现,使用TCA/丙酮沉淀法提取蛋白,裂解液中加入Cocktail蛋白酶抑制剂裂解后,用2-D Clean-Up试剂盒所制备的样品其双向凝胶电泳图谱效果最好,获得蛋白点数量最多,且蛋白等电点pI主要分布于4~8之间。随后,应用分辨率更高的24cm IPG(pH 4~7)胶条进行电泳效果的验证,蛋白点在凝胶的2个方向上均得到了较好地分离,经过ImageMaster 2-D Platinum5.0软件分析后共检测到有效蛋白点820个。本研究初步建立了百子莲茎尖分生组织蛋白双向凝胶电泳体系,为后续开展百子莲属植物蛋白质组学研究提供了重要的技术保障。     

单子叶植物居间分生组织的研究进展

对单子叶植物居间分生组织研究的主要内容进行了回顾,并且对以后的工作进行了展望。     

氨基寡糖素(0.5%水剂)对黄瓜根结线虫病的防治试验

进行了氨基寡糖素(0.5%水剂)防治黄瓜根结线虫病试验。试验结果表明,用氨基寡糖素(0.5%水剂)对水对黄瓜进行灌根处理,可以较好的防治黄瓜根结线虫病。其中:有效成分用量45 g/hm2、60 g/hm2的防效分别达到65.73%和69.10%;产量分别增加22.88%和30.61%。     

人参化感物质对其幼苗根尖解剖结构的影响

为探讨人参化感物质的作用机制,采用石蜡切片技术研究人参化感物质对其幼苗根尖解剖结构的影响。利用人参化感物质活性组分培养其幼苗96 h后,取其根尖,进行石蜡切片,采用番红—固绿染色。结果表明:化感物质组分处理后的人参幼苗根尖几个功能部位的细胞大小及排列发生了明显的变化,处理后的幼苗根尖明显变粗,细胞间隙加大,表皮层细胞部分脱落,顶端分生组织和根冠的细胞混乱,这种效应随着处理浓度的增加而增强,且在浓度为40 g·mL-1处理时,一部分顶端分生组织细胞的细胞壁形态异常甚至破裂,中柱鞘细胞明显膨胀。     

2种防治水稻病害的药剂对蚕豆根尖细胞遗传毒性的研究

以蚕豆为试验材料,利用微核检测技术研究井冈·三环唑和苯甲·咪鲜胺对蚕豆根尖细胞的遗传毒性效应。结果表明:与阴性对照比较,不同浓度的2种药剂处理后,蚕豆细胞微核率和污染指数都有不同程度提高,但是不呈明显的浓度-剂量效应关系;通过回归建模分析可以发现,二次函数模型能更好地描述微核率随药剂浓度的变化趋势。此外,相同浓度下苯甲·咪鲜胺对蚕豆微核率和污染指数影响比井冈·三环唑更大。     

基因枪轰击转化棉花茎尖分生组织影响因素的探讨

以农大KB18的茎尖分生组织为受体材料,利用基因枪轰击法将植酸酶基因(PhyA)导入棉花茎尖分生组织,经过再生、筛选、分子检测等过程获得若干转基因植株。通过研究碳源、外源激素、活性炭、轰击距离和轰击次数以及茎尖的恢复培养与抗性筛选等,建立了较为完善的棉花基因枪茎尖转化体系。结果表明,植株再生率与再生培养基的成分,如激素的有无、活性炭的含量和碳源等有关,轰击距离以及筛选程序中卡那霉素的起始筛选时间、筛选浓度和浓度梯度等因素对转化周期和转化率有直接影响。     

蜀葵根尖染色体制片技术优化和核型分析

本研究以蜀葵‘春庆’(Althaea rosea‘Spring Celebrities’)为材料,从预处理试剂、固定时间、解离试剂和时间四个角度,优化常规染色体制片技术,获得了一套蜀葵染色体制片技术,并以此为基础进行核型分析,获得完整核型指标。根据研究结果,使用冰水混合物预处理24 h,卡诺氏液固定处理24 h,接着1 mol/L HCl解离处理90 min后,用卡宝品红染色5 min,在100×油镜下观察,可以观察到结构完整、分散清晰的蜀葵染色体制片。蜀葵为二倍体,核型公式为K(2n)=38=22m+12sm+4st,核型不对称系数为64.91%,核型分类属于2B型,染色体相对长度组成为2n=38=8L+8M2+12M1+10S。这些核型指标为研究蜀葵的进化和育种提供了重要的参考数据。     

高丹草多倍体的诱导与鉴定

高丹草(Sorghum bicolor×S.sudanense)是一种优质牧草。为获得高丹草多倍体材料,试验以秋水仙素为诱导剂,以引进的高丹草品种‘大卡’为供试材料,应用浸种法和滴生长点法分别对高丹草种子和幼苗生长点进行了处理,对获得的诱变后代采用表型测定、根尖染色体法和表皮气孔保卫细胞法相结合的方式,通过逐代鉴定筛选,最终在M_5代获得了稳定遗传的两份高丹草多倍体材料。本研究可为高丹草多倍体诱导相关研究提供参考;同时创制的两份多倍体材料除可作为种质资源使用外,经进一步培育后有望作为品种在生产上推广应用。