产harpin的成团泛菌工程菌的构建

 梨火疫病菌(Erwinia amylovora)产生的胞外蛋白harpin是引发其非寄主植物过敏反应的因子。harpin蛋白还具有诱导植物抗性的功能。成团泛菌(Pantoea agglomerans)308R对链格胞属(Alternaria)的真菌具有拮抗活性,是一株抗利福霉素的自发突变株,对壮观霉素敏感。本文通过电击转化法将带有梨火疫病菌hrp基因簇的重组质粒pCPP430导入308R。所得转化子具有pCPP430的壮观霉素抗药性标记,在番茄上引起过敏反应;从转化子中提取到与pCPP430大小一样的质粒,其酶切物理图谱也与pCPP430完全相同;用地高辛标记的harpin的结构基因hrpN为探针对转化子中的质粒进行Southern blotting分析,结果在转化子中得到信号明显的杂交片段,而受体菌308R中未出现杂交信号;提取细菌的外壁的蛋白质进行PAGE分析,在大约44 kd的位置上308R(pCPP430)比308R明显多出1条带。这些结果表明成团泛菌能够表达梨火疫病菌的hrp基因簇,所产harpin蛋白也是有活性的。     

利用RK2的parDE片段提高重组质粒在生防菌成团泛菌中的稳定性

用ＰＣＲ方法将广宿主范围质粒ＲＫ２中控制稳定性的片段ｐａｒＤＥ克隆到ｐＧＥＭ┐Ｔ载体上,然后插入到分泌表达载体ｐＥｘＳｅｃ１的ＢａｍＨＩ切点上,得到两个新载体ｐＺＬ２和ｐＺＬ３,其中ｐａｒＤＥ的转录方向分别与Ｔ７启动子相同和相反。经酶切物理图谱分析和ＰＣＲ扩增验证后,将ｐＺＬ２和ｐＺＬ３分别电击转化到成团泛菌３０８Ｒ中,在无抗生素的ＬＢ培养基中生长１００代后仍１００％地保留在细胞内。新质粒在植物叶面生长的细胞内也１００％稳定     

玉米细菌干茎腐病菌成团泛菌的种子传播

为明确成团泛菌Pantoea agglomerans引起的玉米细菌干茎腐病经种子传播的规律,采用细菌常规分离法、Sherlock微生物鉴定系统、特异性分子检测技术,对与干茎腐病相关的杂交种金玉9856及其父本PS056、母本OSL190进行了种子带菌检测,证明金玉9856和PS056种子内部带菌,获得分离物Pagl和Pag2,2个分离物对感病的PS056均具有致病性.菌液浸种、种子注射接种和自然带菌种子直播都能够引发干茎腐病,发病率分别达到100%、100%和80%,而持续高温(50℃)处理4天的种子则在植株上不表现症状.对种子接种后长成的植株的系统检测证明,成团泛菌侵染种子后,通过植株维管束系统向地上部组织扩展,随着水分的运输,病菌通过茎秆到达果穗的籽粒中,完成从种子到植株、再到新种子的病害循环,同时能够引起植株发病.     

构建同源调节基因的广谱穿梭质粒

利用PCR方法扩增生防细菌成团肠杆菌（Enterobacter agglomerans,IC1270)基因组调节基因CrrS、GrrA、rpoD、rpoS，插入质粒pGEMT-easy中。切下目的片段与酶切穿梭质粒pJFF224-XN连接，经PCR及酶切鉴定，调节基因片段分别以正向或反向插入到质粒的T4启动子下。将带有调节基因的穿梭质粒导入IC1270的感受态细胞，得到带有同源调节基因不同插入方向的IC1270衍生物。抑菌实验结果表明，正向插入的调节基因未提高对病原真菌的生防效果，而反向插入的调节基因丧失对病原真菌的颉抗作用，推测与抑制调节基因的转录有关。     

10种病毒抑制剂对小麦黄矮病的防治效果

在田间条件下研究了10种病毒抑制剂对小麦黄矮病的防治效果。结果表明,不同药剂处理对小麦黄矮病均有一定的抑制作用,其中6%寡糖·链蛋白WP、25%宁南·嘧菌酯AS和0.5%菇类蛋白多糖AS的防效分别为64.26%、58.44%和53.18%。不同病毒抑制剂处理的小麦产量有不同程度的增加,6%寡糖·链蛋白WP、20%吗胍·乙酸铜WP、0.5%葡聚烯糖SP和25%宁南·嘧菌酯AS增产率分别为21.5%、20.9%、20%和19.5%。说明6%寡糖·链蛋白WP是一种有前途的小麦黄矮病抑制剂,可在农业生产实践中进行推广应用。     

广东省冬枣叶枯病病原菌的分离与鉴定

2018年2月,广东省清远市冬枣种植区发生了一种叶枯病,发病率约为17％,严重影响植株生长.为明确引起广东省清远市冬枣叶枯病的病原,采用常规病组织分离法获得2株菌株,通过致病性、生理生化特征和分子生物学对2株菌株进行鉴定.致病性测定结果显示,该细菌可侵染引起冬枣叶片产生枯死症状,与田间病株的症状相同.生理生化测定结果显...     

成团泛菌(Pantoea agglomerans)对稻谷的致病性

分离自稻谷的成团泛菌 (Pantoea agglomerans)菌株的致病性测定结果表明 ,所有成团泛菌菌株对稻谷都有一定的致病力 ,但强弱差异明显 ,其中 FDQ1、FDSN4、XD2、XSH4菌株较强 ,XD2最强 .成团泛菌影响稻谷的灌浆与发育 ,水稻对该菌的易感期为孕穗期到抽穗初期 ,症状表现为抽穗迟、(半 )包穗、白穗、稻粒变色、秕谷率高等 ;该菌还影响稻种的萌发 ,表现为胚芽与胚根的伸长受到抑制 ,容易造成死苗 .成团泛菌对稻谷的污染部位主要集中在内、外颖组织上 .要使该菌保持较强致病力 ,菌液接种菌量应不低于 1 0 8CFU·m L- 1 .     

成团泛菌对玉米自交系PS056致病性基因yhfK的克隆

 【目的】通过克隆和鉴定成团泛菌(Pantoea agglomerans)的致病相关基因,阐明该种土壤习居细菌在玉米自交系PS056上引起细菌性干茎腐病的原因。【方法】利用转座子Tn5的随机插入突变特点,构建致病性菌株P. agglomerans XJ1突变体库;经对Tn5插入位点的侧翼扩增,确认突变体PA121的致病力相关基因;通过基因互补试验,证明yhfK与致病力的关系。【结果】通过对突变菌株的接种筛选,获得11个致病力丧失的突变体。Southern杂交和PCR扩增结果表明,Tn5在突变体PA121中为单拷贝插入,插入位点为细菌编码内膜蛋白的yhfK(Tn5 插入在yhfK的1 082 bp处)。将yhfK克隆到质粒pBBR1MCS上,并导入突变体PA121中进行互补,生物测定结果显示转化子完全恢复了正常的细菌生理功能,并能够在玉米自交系PS056上恢复致病力。RT-PCR试验证明,yhfK调控hrpA的转录。【结论】 成团泛菌XJ1中yhfK是调控其对植物致病性的基因之一,具有在玉米自交系PS056上引起细菌性干茎腐病的功能。     

甜樱桃细菌性果斑病病原菌的分离与鉴定研究

甜樱桃细菌性果斑病为近年来发生在辽宁省大连地区樱桃上的一种新病害。经病原菌分离及柯赫氏法则验证,证明引起该病的病原菌为一种细菌,根据分离株培养特性、生理生化反应、致病性及16S rDNA序列分析将该病原细菌初步鉴定为成团泛菌（Pantoea agglomerans）。成团泛菌侵染引起的樱桃果斑病在国内外尚属首次报道。     

一株自生固氮细菌的分离和鉴定

利用阿须贝培养基从土壤样品中分离到一株具有自生固氮作用的细菌,编号为GN15。GN15为革兰氏阴性菌,在牛肉膏蛋白胨培养基上生长速度快,长势好,通过对其进行形态特征、生理生化特征测定以及16SrDNA序列分析,结果表明,GN15为成团泛菌(Pantoea agglomerans),将其命名为Pantoea agglomerans GN15,对该菌的基础研究为固氮菌肥的研制提供基础的科学依据。