全文获取类型
收费全文 | 15120篇 |
免费 | 678篇 |
国内免费 | 1804篇 |
专业分类
林业 | 283篇 |
农学 | 1718篇 |
基础科学 | 48篇 |
908篇 | |
综合类 | 6460篇 |
农作物 | 940篇 |
水产渔业 | 795篇 |
畜牧兽医 | 5351篇 |
园艺 | 758篇 |
植物保护 | 341篇 |
出版年
2024年 | 252篇 |
2023年 | 768篇 |
2022年 | 956篇 |
2021年 | 998篇 |
2020年 | 746篇 |
2019年 | 899篇 |
2018年 | 461篇 |
2017年 | 692篇 |
2016年 | 815篇 |
2015年 | 803篇 |
2014年 | 876篇 |
2013年 | 849篇 |
2012年 | 1248篇 |
2011年 | 1155篇 |
2010年 | 1076篇 |
2009年 | 1026篇 |
2008年 | 1046篇 |
2007年 | 711篇 |
2006年 | 568篇 |
2005年 | 459篇 |
2004年 | 336篇 |
2003年 | 250篇 |
2002年 | 159篇 |
2001年 | 96篇 |
2000年 | 95篇 |
1999年 | 71篇 |
1998年 | 56篇 |
1997年 | 34篇 |
1996年 | 30篇 |
1995年 | 14篇 |
1994年 | 27篇 |
1993年 | 5篇 |
1992年 | 5篇 |
1991年 | 3篇 |
1990年 | 6篇 |
1989年 | 3篇 |
1988年 | 1篇 |
1987年 | 1篇 |
1985年 | 1篇 |
1983年 | 1篇 |
1981年 | 1篇 |
1955年 | 3篇 |
排序方式: 共有10000条查询结果,搜索用时 0 毫秒
11.
鸡贫血病病毒VP2基因在大肠杆菌中的表达及其特性 总被引:2,自引:0,他引:2
将鸡贫血病病毒(chicken anaemia virus,CAV)VP2基因克隆入表达性载体PGEX-5X-3,在大肠杆菌以谷胱甘肽转移酶(GST)融合蛋白的形式获得了表达。以此表达产物免疫小鼠,制备抗CAV VP2的多克隆抗体。通过对CAV感染的MSB1细胞作间接免疫荧光试验(IFA)检测,结果为阳性,这表明表达产物保留了CAV相关的抗原特性,本研究为进一步探索CAV VP2的生物学特性奠定了基础。 相似文献
12.
13.
将猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的M基因和N基因从重组质粒pMD18-T—M—N中亚克隆至pBV220原核表达栽体上,成功构建了重组表达质粒pBVM—N。将pBVM—N转化大肠埃希氏菌DH5α感受态细胞.重组菌经温度敏感诱导表达,其细菌裂解物经SDS—PAGE可检测到分子质量约为19ku的目的蛋白,与M基因表达产物一致;经蛋白质分析软件Bandscan分析,其表达量可达19.1%;Western-blotting分析表明,该重组蛋白可被兔抗PRRSV血清所识别,与预期的M基因表达产物相一致,而N基因未获表达。 相似文献
14.
结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6、CFP10基因的克隆、鉴定及其原核表达 总被引:3,自引:0,他引:3
以人型结核分枝杆菌 H37RV株基因组 DNA为模板 ,应用 PCR法对 ESAT- 6和 CFP10基因进行扩增 ,产物经纯化后与载体 PMD18- T连接、转化及酶切鉴定 ,亚克隆到原核表达载体 PGEX- 6 P- 1,构建原核重组表达质粒 ,转化入大肠杆菌 BL2 1中 ,以 1mmol/L IPTG诱导 ,进行 SDS- PAGE电泳。结果表明 ,ESAT- 6和 CFP10基因表达的融合蛋白相对分子质量分别为 32 0 0 0和 36 0 0 0 ,与实测相符。重组结核杆菌分泌蛋白 ESAT- 6和 CFP10的成功表达为结核病诊断及重组疫苗的构建打下了基础 相似文献
15.
16.
根据环形泰勒虫TaA1272-1株裂殖体表面抗原(TaSP)基因的序列设计了1对引物,用PCR扩增出该基因长为393bp的高免疫原性区片段(SBxp)。将扩增产物连接到pGEM-T Easy载体上,转化入大肠埃希氏菌JM109中进行克隆。随后将重组质粒pGEM-SBxp和表达载体pGEX-4T-1分别以BamHⅠ、XhoⅠ酶切后,将酶切的目的片段SBxp亚克隆到原核表达载体中构建了重组表达载体pGEX-4T-1-SBxp,并将其转化到BL21宿主菌中。提取重组质粒经BamHⅠ、XhoⅠ酶切、PCR鉴定和测序确证后,阳性克隆用IPTG诱导表达。收集不同时间的菌液进行SDS-PAGE电泳和Western blotting检测。结果,SBxp基因在大肠埃希氏菌中成功表达,其表达产物为分子质量43ku的融合蛋白,该产物能被牛环形泰勒虫阳性血清所识别。 相似文献
17.
phyA基因的克隆及其新型表达载体的构建 总被引:2,自引:0,他引:2
直接以黑曲霉菌株F246基因组为模板,对植酸酶基因phyA的成熟肽(分子长度为1347bp)进行了PCR扩增,再将PCR产物克隆入pMD18-T质粒,经DNA测序鉴定正确后,亚克隆入表达载体pET30a^ 和pMG36e,成功构建了phyA基因2种新型表达载体。植酸酶phyA基因2种新型表达载体的构建,为进一步获得大量、高活性植酸酶以及研究和开发新型微生态制剂打下了基础。 相似文献
18.
对从含有鸡毒霉形体H3株TM-1基因的大肠埃希氏菌DH5α中提取的质粒,进行EcoR Ⅰ和Sα/Ⅰ双酶切,获得了大约为786bp的目的片段。将此片段与经EcoRⅠ和Sαl Ⅰ双酶切的线性原核表达载体pET-30a-1连接。转化宿主菌BL21(DE3),筛选阳性克隆。提取质粒,经酶切、PCR扩增和测序分析确证其插入正确,从而构建成了重组表达载体。阳性克隆用IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳分析,证明其分子质量约为29ku;Western-blotting分析表明,该蛋白可被鸡毒霉形体阳性血清识别,具有生物学活性。 相似文献
19.
根据已克隆的堆型艾美球虫(Eimeria acervulina)广东株子孢子表面抗原基因cSZ1的cDNA序列设计了特异性引物,用PCR方法扩增cSZ1的开放阅读框架(ORF)后克隆至表达载体pET-32a( ),构建了重组表达质粒pET-32a( )-cSZ1,并将其转化至大肠埃希氏菌BL21(DE3)。经IPTG诱导,获得了cSZ1重组抗原在大肠埃希氏菌中的高效表达,表达产物量可达菌体总蛋白的9.3%,融合蛋白的分子质量约为40ku。重组菌诱导表达的产物经SDS—PAGE后,用堆形艾美球虫感染鸡的超免疫血清进行免疫印迹分析,结果为阴性,提示cSZ1所编码的抗原可能主要是T细胞抗原表位。 相似文献
20.
以猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型25-4株基因组DNA为模板,PCR方法扩增外膜蛋白(OMP)5′末端保守区基因片段(OMPc),酶切及核苷酸序列分析鉴定后,与原核表达载体质粒pGEX-6P-1进行连接,构建成重组表达载体pGEX-OM-Pc,转入大肠杆菌BL21中,以IPTG进行诱导,SDS-PAGE电泳分析发现,转化了重组质粒的菌株所表达的融合蛋白相对分子量为34 kD,与实际预测相符,命名为GST-OMPc.GST亲和层析柱进行纯化,ELISA方法对纯化蛋白进行检测.结果表明:纯化蛋白GST-OMPc能够与兔抗猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型的阳性血清反应.OMPc蛋白的成功表达为其功能的研究打下基础. 相似文献