贻贝凝集素的激光拉曼光谱的研究

从海洋无脊椎动物贻贝Crenomytilus grayanus中分离出的凝集素(CGL，糖结合蛋白)，经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定，其相对分子量为18000。经激光拉曼光谱测定，侧链C-C-S-S-C-C具有扭曲-扭曲-反式构型。在谱图1377cm^-1附近未见锐峰，显示该糖蛋白的色氨酸主要暴露在分子表面。     

刺槐种子中凝集素的纯化及性质研究

从刺槐(RobiniapseudoacaciaL.)的种子中分离纯化出2种凝集素RPsAⅠ和RPsAⅡ。种子经磨碎、过滤、离心、硫酸铵分级、透析、Sepharose4B离子交换和SephadexG 150分子筛层析,即可获得在PAGE和SDS PAGE上均呈现单一蛋白染色带的凝集素纯品,分子筛层析测得RPsAⅠ和RPsAⅡ的分子量分别为132000和130000,SDS PAGE测得亚基分子量分别为38000和31000。当2种凝集素的质量浓度分别达到7 80μg/mL和15 60μg/mL时能凝集兔血红细胞,凝集活性均可被L 阿拉伯糖、D 果糖、D 半乳糖、麦芽糖抑制;热稳定性实验结果表明2种凝集素对热处理均具有一定的稳定性;当pH>9和pH<5时,它们的活性都明显降低。     

农杆菌介导半夏凝集素基因对油菜的遗传转化

以3～4d苗龄的甘蓝型油菜品种陇油2号带柄子叶为转化受体材料,通过农杆菌LBA4404介导将半夏凝集素抗虫基因（pta）导入,获得抗卡那霉素的抗性植株3株。实验中还对影响油菜遗传转化的外源激素种类和配比进行了研究,结果表明,在预培养阶段1．0mg／L 2,4-D与0．2mg／L6-BA配合使用比单独使用2,4-D效果好,在幼苗分化阶段2．5mg／L6-BA、0．1mg／L NAA和0．5mg／L GA3配合使用有促进芽分化、抑制根分化的作用。     

理化因素对白芸豆凝集素生物学活性影响

[目的]研究物理与化学因子对白芸豆凝集素生物学活性的影响,为白芸豆凝集素开发利用奠定理论基础和提供技术参考.[方法]白芸豆（Phaseolus vulgarisL）种子经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换和Sephadex G-100凝胶柱层析得到凝集素（PVL）;然后以不同温度和pH梯度、不同金属离子、不同变性剂处理样品,通过倍比稀释法测定凝集素的生物学活性.[结果]白芸豆凝集素能使兔血红细胞发生凝集,在20～70℃红细胞凝集活性不受影响,当温度达到80℃时凝集素样品仅有25％凝血活性,85℃加热30 min凝血活性全部消失.用EDTA溶液处理后,白芸豆凝集素失去凝血活性,金属离子Mg2＋和K＋能恢复凝血活性,Mn2＋能完全恢复凝血活性,Ba2＋、Cu2＋、Fe3＋、Ca2＋不能使凝血活性恢复.白芸豆凝集素在缓冲液pH低于4.0时凝血活性逐步降低,在pH 3.0时,活性仅有45％;在缓冲液pH高于7.2时活性逐步降低,pH 9.0时凝血活性仅有44％.3种变性剂变性试验中,脲能使凝集素凝血活性降低70％,盐酸胍能降低30％,SDS能降低18％.[结论]白芸豆凝集素具很强的热稳定性和广谱酸碱度适应能力;凝血活性依赖Mn2＋等金属离子,且仅能被变性剂6 mol/L脲部分抑制.在实际应用中,可根据适宜条件控制其物理和化学因素,防止凝集素变性失活.     

刀豆凝集素的血凝活性及其性质研究

[目的]为进一步研究刀豆凝集素提供依据。[方法]从豆科植物刀豆属(Canavalia)中Canavalia ensiformis(L.)DC的干燥成熟种子中提取刀豆凝集素(Concanavalin A,简称ConA),进行血凝活性测定,并对其部分性质作了初步研究。[结果]结果表明:采用胰蛋白酶修饰人血(A型)红细胞来检测ConA凝集活性时,发现其活性提高了8倍。ConA对人A、B、O、AB型及供血动物(兔,鸡,鸭,鸽,鲤、鲫鱼)的血红细胞都具有一定程度的凝集活性,无供体细胞专一性或血型专一性;D-葡萄糖和D-甘露糖是ConA的专一性结合糖。ConA是一种对热较稳定的凝集素,40℃以下时ConA很稳定,80℃以上保温20 min后,血凝活性完全丧失。在pH值范围5.8~8.3,ConA的凝集活性较高,在pH>11.9时,凝集活性完全丧失。变性剂脲浓度达到0.4 mol/L以上时,ConA的凝集活性可完全丧失。[结论]该研究对今后系统阐明其生物学作用,扩大应用范围具有重要意义。     

掌叶半夏凝集素基因表达载体的构建与鉴定

从掌叶半夏(Pinellia pedatisecta Schott)块茎中提取总RNA,反转录合成cDNA.根据GenBank中已报道的天南星科凝集素基因序列,设计带有酶切位点的表达引物,用RT-PCR方法扩增出掌叶半夏凝集素(Pinellia pedatisecta agglutinin,PPA)基因.PPA经双酶切后与表达载体pGEX-6P-3连接,构建pGEX-PPA重组表达载体.通过PCR、双酶切及测序鉴定,结果表明,重组载体pGEX-PPA构建成功,为进一步进行PPA的原核表达及其功能研究奠定了基础.     

芸豆凝集素受体在小鼠生殖细胞上的分布及作用研究

[目的]探讨芸豆凝集素（PHA）受体在小鼠精子和卵母细胞上的分布及作用。[方法]应用异硫氰酸荧光素（FITC）标记的芸豆凝集素作为分子探针,确定其PHA受体在小鼠精子和卵母细胞上的分布。通过不同浓度PHA处理精子和卵母细胞,研究PHA预处理对精子获能和顶体反应,以及对卵母细胞FITC—PHA染色的影响。l结果]PHA受体主要表达于小鼠精子整个尾部区域和顶体反应后的头部质膜,2mg／mlPHA预处理有抑制顶体反应的作用;卵母细胞透明带和细胞膜都有PHA受体的存在。不同浓度PHA处理卵母细胞对其透明带阿FTIC—PHA染色影响不大,但对其细胞膜染色有较大影响,且不同浓度之间差异明显。[结论]芸豆凝集素受体是小鼠精子和卵母细胞受体的重要组成部分,且在精卵质膜融合过程中发挥重要作用。     

大豆凝集素和脂肪氧化酶双价RNAi表达载体的构建及其遗传转化

【目的】应用RNA干扰技术,同时抑制大豆凝集素(Soybean agglutinin,SBA)和脂肪氧化酶(Lipoxygenase,Lox)基因在种子中的表达,改良大豆营养品质,为培育优质大豆材料奠定基础。【方法】根据RNAi原理,酶切获得Lox目的片段,构建以除草剂Bar基因为筛选标记、种子特异性启动子P7αP启动SBA和Lox双干扰的pCAMBIA3301-SBA-Lox(pSBA-Lox)干扰表达载体,并通过农杆菌介导法转化大豆(品种为吉农28),采用PCR、Southern杂交和实时荧光定量PCR对转基因植株进行检测。【结果】质粒PCR和酶切鉴定结果表明,双价RNAi植物表达载体pSBA-Lox构建成功。将其转入到大豆中,对转化植株进行PCR、Southern杂交检测,结果显示,外源基因以单拷贝形式整合到植物基因组中,并能遗传给后代。T1代转基因植株的实时荧光定量PCR分析显示,转基因植株中SBA基因和Lox基因在籽粒中的表达量比未转化受体植株均明显降低,SBA基因表达量降低了35.9%~47.2%,Lox基因表达量降低了32.8%~56.1%,而在幼嫩叶片中的表达量相比对照植株变化不大。【结论】获得了大豆凝集素和脂肪氧化酶表达量均明显降低的T1代转基因大豆。     

人及兔醛化红细胞的制备和应用

[目的]用4种血型的人醛化红细胞测定植物凝集素(PHA)的活性,并用标准抗血清对血型进行复查。同时初步探讨兔醛化红细胞对植物凝集素(PHA)凝集活性的测定效果。[方法]将新鲜的人A、B、O、AB型血以及兔血进行红细胞的提取并醛化,然后用抗A和抗B血清测定醛化后的人红细胞的血型,并用醛化的人的4种血型的红细胞悬液以及兔的醛化红细胞悬液对植物凝集素进行效价的测定。[结果]醛化后的人的4种血型的红细胞仍保持原血型不变,并且可以与植物凝集素发生凝集反应,结果与用新鲜血浆测定的效价一致。用兔醛化红细胞悬液也测定出同样的植物凝集素效价,且灵敏度与用人的醛化红细胞悬液测定相同。[结论]醛化的人的4种血型的红细胞以及兔醛化红细胞不仅未改变其表面的抗原,而且均可用于对植物凝集素的效价测定,同时具有保存时间长的优点。从降低成本的角度考虑,也可采用兔的醛化红细胞血液对植物凝集素进行效价测定。     

双孢蘑菇2796凝集素的提取及其部分理化性质研究

双孢蘑菇2796的子实体经PBS浸提、40％～60％饱和度的硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析和Sephadex G-100分子筛柱层析纯化得到双孢蘑菇2796凝集素.双孢蘑菇2796凝集素经SDS-PAGE检测为单一条带,测得亚基相对分子质量为15.7 kD,通过Sephadex...