灰飞虱体内水稻条纹病毒的检测

为评价灰飞虱体内水稻条纹病毒检测方法的适用范围,利用已经制备的水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)的多克隆抗体SV21和单克隆抗体3B9,采用多孔板间接ELISA、DIBA和Western blotting等三种方法进行单头灰飞虱Laodelphax striatellus Fallén(SBPH)体内RSV检测。结果表明,检测灵敏度以多孔板间接ELISA最高,其次为DIBA,Western blotting最低;用单克隆抗体3B9检测灵敏度高于多克隆抗体SV21。RT-PCR、IC-RT-PCR和DB-RT-PCR三种方法中,RT-PCR对单头灰飞虱稀释到400倍可检测到病毒;IC-RT-PCR在多克隆抗体SV21稀释浓度大于500倍时检测不出RSV,单克隆抗体3B9稀释浓度大于800倍时检测不到RSV;DB-RT-PCR检测结果显示,单头灰飞虱在稀释400倍后均无阳性反应。     

稻田常用农药对四地区二化螟盘绒茧蜂雌成蜂的触杀毒性

为明确稻田常用农药对二化螟幼虫期优势寄生性天敌二化螟盘绒茧蜂Cotesia chilonis(Mat-sumura)的毒性,采用药膜法在室内测定了7种杀虫剂原药以及18种常用农药制剂对扬州、安吉、金华和乐清4个地区二化螟盘绒茧蜂雌成蜂的触杀毒性。结果表明,7种杀虫剂原药中氟虫腈、毒死蜱和三唑磷对该蜂毒性较高,杀虫单、吡虫啉和阿维菌素次之,氯虫苯甲酰胺则最低。12种杀虫剂制剂中20%氯虫苯甲酰胺悬浮剂和3种阿维菌素相关制剂对该蜂毒性相对较低,其余均具高毒性;4种杀菌剂中的异稻.三环唑对该蜂高毒,苯甲.丙环唑次之,井岗.蜡芽菌(井冈霉素)和盐酸吗啉胍.三氮唑核苷则毒性最低;2种除草剂中苄嘧.丙草胺毒性高于苄.二氯。此外,同一种药剂对不同地区雌蜂的毒性也有所不同。     

胶体金免疫层析法快速检测烟草环斑病毒

采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒 ,标记烟草环斑病毒的抗体 ,制成免疫层析检测试纸条。检测粗提纯病毒的灵敏度为 1 0 0 0ng/ml,病汁液稀释 1 0 0 0倍后仍可快速检出。对大豆病种子、烟草冻干病叶等不同材料进行检测也有良好的效果 ,1～ 2min即可出现结果。用 9种不同的病毒进行测试 ,未出现非特异性反应。     

Aggressiveness and other factors relating to displacement of populations of Phytophthora infestans in England and Wales

Mating type, in vitro sensitivity to the phenylamide fungicide metalaxyl, and mitochondrial (mtDNA) haplotype were determined in some or all of 618 isolates of Phytophthora infestans from the years between 1978 and 1995. A2 mating type occurred infrequently in most but not all years and insensitivity to metalaxyl increased over time. After 1982, the mtDNA Ib haplotype was largely replaced (except for one isolate in 1986 and one in 1995) by two new haplotypes, Ia and IIa. Type Ia was much more common than type IIa.Approximately one quarter of these isolates (165) were compared using two components of fitness associated with aggressiveness (infection frequency × number of sporangia per lesion) on detached leaves of cultivars Maris Piper, Cara and Stirling, which were chosen as exhibiting increasing levels of race non-specific resistance. Isolates were compared with three standard isolates of low, intermediate or high aggressiveness, and the data standardised for comparison between experiments. On cvs. Cara and Stirling, but not on Maris Piper, mtDNA Ia and IIa haplotypes were more aggressive than type Ib in several separate experiments. Similarly, metalaxyl sensitive phenotypes were more aggressive than insensitive phenotypes on Cara and Stirling but not on Maris Piper. The displacement of mtDNA type Ib by types Ia and IIa over this period may have been a result of the lower aggressiveness and lack of complete insensitivity to metalaxyl in type Ib isolates.     

重庆地区柑桔衰退病毒多态性研究

柑桔衰退病毒(CTV)存在着复杂的株系分化现象.在使用弱毒株交叉保护防治柑桔衰退病时需要对田间病毒株系组成进行分析,并对选用的株系进行单蚜分离纯化.作者运用限制性片段长度多态性和单链构象多态性对田间获得的168个CTV样品和2个蚜传毒株的外壳蛋白基因进行分析,了解重庆市田间CTV组群构成情况,发现田间CTV以多株系混合发生为主,其中主要是CP/HinfⅠRFLP第1、3和6组群,约占总数的90%,并以强毒株混合感染为主.甜橙中CP/HinfⅠRFLP的组群构成最为复杂.单头褐色桔蚜从柚类至甜橙传播CTV的效率低(不足1%),该蚜的取食可改变CTV的株系组成.     

抗A型禽流感病毒核蛋白特异性单克隆抗体研究

利用禽流感H9亚型病毒(AIV-H9)免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,经免疫荧光试验(IFA)检测,以研制抗禽流感病毒(AIV)单克隆抗体。结果获得了5株特异性抗AIV核蛋白(NP)的单克隆抗体细胞株,分别命名为AIV-NP-2C3、AIV-NP-6A5、AIV-NP-3H9、AIV-NP-7B4、AIV-NP-2H4。这5株单克隆抗体能与所有试验的AIV-H9病毒反应,Western blotting方法鉴定结果表明,单克隆抗体仅识别60 ku的蛋白抗原,而不与新城疫病毒、禽网状内皮组织增殖症病毒、传染性法氏囊病毒等反应。初步应用结果显示,以这些单克隆抗体建立的间接免疫荧光试验或ELISA方法可迅速检测出禽流感病毒,这些单克隆抗体在禽流感的预防监测中将发挥重要的作用。     

应用FA及PPA-ELISA技术对猪瘟的检测

用免疫荧光抗体诊断技术及单克隆抗体纯化酶联免疫吸附试验诊断技术对疑为猪瘟病毒感染猪进行了检测 ,重点阐述了 2种方法的技术原理和操作过程。通过用免疫荧光抗体诊断技术检测了 5份病料 ,其中有 2份为阳性 ,阳性率为 40 % ;用单克隆抗体纯化酶联免疫吸附试验诊断技术检测了猪瘟血清抗体 ,在 40头母猪血清样品中 ,猪瘟弱毒抗体效价 OD值较高 ,有 1 0 0 %的保护率 ,但是发现母猪群中有 1 0 %隐性猪瘟感染 ,其强毒抗体效价 OD值大于 0 .5,体内带有猪瘟病毒。结果及过程表明此两种诊断方法检测快速、鉴别准确、分辨率高     

羊痘病毒实时荧光定量TaqManPCR检测方法的建立

参照羊痘病毒（CaPV）P32的基因序列，设计合成了2套引物和1条探针，建立了实时荧光定量PCR技术，对细胞培养物、皮肤丘疹、痂皮等组织病料中的GPV进行了特异性检测和敏感性试验。结果显示，用300nmol／L引物浓度和200nmol／L探针浓度，获得的CT值较小，而△Rn最大；可检测到相当于0．1TCID50的病毒DNA；制作的标准曲线中各浓度范围内有极好的线性关系且线性范围宽，相关系数为0．9995以上；组内和组间试验重复性的变异系数分别为2．3％和3．4％；与常规的PCR相比较，该方法具有快速、特异、敏感、可定量，可同时检测大量样品等优点。表明，荧光TaqMan PCR是一种检测CaPV的良好方法，可对组织病料中低含量的CaPV或持续带毒宿主进行准确检测。     

O型口蹄疫病毒免疫层析试纸条检测方法的建立

为建立一种快速、准确检测O型口蹄疫病毒（FMDV）抗原的胶体金免疫层析方法,将兔、豚鼠抗O型FM-DV多抗用DEAE-Sephose层析柱纯化。胶体金标记O型豚鼠口蹄疫抗体,形成金标探针并将其喷涂于玻璃纤维上。兔抗O型FMDV抗体和羊抗豚鼠IgG分别标记于硝酸纤维素膜上作为检测带和质控带,各部件按顺序装配形成快速诊断试纸条。如果待检样品中含有O型FMDV,它将与玻璃纤维上的胶体金探针和兔抗O型FMDV抗体形成夹心复合物,并在检测带被固定,沉集反应形成肉眼可见的红色条带。在田间试验中,53份试验样本分别用试纸条和反向间接血凝试验进行检测,2种方法的阳性率分别为95.45%和90.91%。评价试验证实,本研究建立的胶体金免疫层析方法简便、快速,具有良好的特异性和敏感性,非常适于基层兽医实验室诊断时使用。     

旋毛虫53kuES重组蛋白单克隆抗体的制备及其免疫金标试纸条的研制

为建立一种简易、快速检测动物血清中的旋毛虫排泄分泌(Excretory-secretory,ES)抗原的胶体金免疫层析试纸法,本研究选用旋毛虫53 ku ES重组蛋白免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤细胞技术制备单克隆抗体(MAb).利用辛酸-饱和硫酸铵法和亲和层析柱联合法纯化MAb及兔抗旋毛虫53 ku ES多克隆抗体,利用枸橼酸三钠还原法制备的胶体金颗粒标记MAb,制备免疫金标试纸条.结果表明,获得的2株IgG1型杂交瘤细胞系4D10和5A2能够稳定分泌抗体,且效价高;胶体金标记MAb 4D10所制备的试纸条具有重复性好、灵敏性和特异性高的优点;该试纸条4℃条件下可密封保存6个月以上.