落叶松－杨栅锈菌 MKK基因的克隆与生物信息学分析1）

利用同源克隆技术，从落叶松－杨栅锈菌（ Melampsora larici-populina Kleb．）菌株Wh03中克隆得到酿酒酵母MKK1和MKK2的同源基因，命名为MlpMK K1／2－WH。测序结果显示，MlpMKK1／2－WH基因的开放阅读框长度为1218 bp，编码405个氨基酸。 MlpMKK1／2－WH蛋白具有保守的PKc＿Pek1＿like和Pkinase结构域。系统进化树分析表明，MlpMKK12／－WH与柄锈菌属3种锈菌中的同源蛋白亲缘关系最近。     

杨树基因启动子的克隆及功能研究进展

启动子是基因调控的重要元件，研究启动子的功能对于基因的表达调控有重要意义。本文从杨树启动子的克隆方法入手，着重介绍了杨树启动子的功能研究进展，并展望了今后的研究前景。     

龙眼体胚Myb转录因子基因的克隆及序列分析

以龙眼同步化调控的鱼雷形胚为材料,设计特异上下游引物,采用RT-PCR法,获得了797 bp的基因序列。通过NC-BI的BLAST软件进行核苷酸序列和氨基酸序列的同源性搜索及相似度分析,结果表明,所获得的核苷酸序列和翻译的氨基酸序列与其他物种的Myb转录因子有较高的同源性,推断该基因序列属于龙眼Myb转录因子基因。已在GenBank登录,登录号为HQ661039。     

Ralstonia eutropha菌株镉抗性调节基因CzcR的克隆与序列测定

G细菌镉抗性决定子是一个编码4个蛋白的CzcCBAD操纵子,参照GenBank已登录Czc基因序列进行引物设计,利用PCR技术,从可在含350mg/LCdCl2的培养基上生长的抗镉菌株Ralstoniaeutropha质粒中,扩增出长度约为1200bp的革兰氏阴性细菌镉抗性系统中的抗性调节基因CzcR,然后将其亚克隆到pGEM-T-easy载体上,并转化至受体菌中,构建重组质粒,采用碱性裂解法提取质粒DNA后,经EcoRI酶切分析和核苷酸序列分析,其与GenBank中登录的CzcR基因序列相似性高达98%,显示其具有正确的CzcR基因核苷酸序列。镉抗性基因的获得将大大推动对微生物抗重金属机理的研究,并为进一步构建耐镉基因工程菌,高效净化重金属污染环境打下坚实的基础。     

番鸭呼肠孤病毒MW9710株S1基因片段的克隆及序列分析

参考GenBank番鸭呼肠孤病毒(muscovy duck reovirus,MDRV)S1基因序列设计合成一对引物,对番鸭呼肠孤病毒MW9710株S1基因进行RT-PCR扩增,并对PCR产物进行了克隆和测序.结果显示扩增产物为300bp,与预期的目的片段大小一致,经PCR、酶切反应鉴定后克隆到pGEM-Teasy载体中,核苷酸序列经BLAST软件分析表明:番鸭呼肠孤病毒MW9170株S1基因的目的片段与番鸭呼肠孤病毒法国89026株同源性为91.7%,与鸡关节炎病毒S2基因同源性为68.7%,结果提示番鸭呼肠孤病毒MW9710株与鸡关节炎病毒亲缘距离较远.     

禽流感病毒A/Chicken/Mudanjiang/0823/00(H9N2) 株NS1基因的克隆及序列分析

用PCR方法,成功扩增出国内分离株禽流感病毒H9N2型非结构蛋白(NS1)基因cDNA,并将该片段连接到pMD 18-T载体上,转化TGI感受态细胞,在含氨苄青霉素的LB平板上筛选阳性克隆,提取质粒,经限制性内切酶鉴定,对目的片段进行测序,结果获得了NS1基因全长,约700bp.该片段的核酸序列与已知A/Chick/HongKong/1074/99(H9N2)、A/Chick/HongKong/1073/99(H9N2)毒株序列进行同源性比较,同源性皆为94.37%,氨基酸序列同源性分别为93.91%和93.48%.     

禽流感病毒N3亚型神经氨酸酶基因的克隆

本研究应用11日龄SPF鸡胚增殖禽流感病毒标准株A/Duck/Germany/1215(H2N3),用LSTRIAZOLL试剂盒提取病毒RNA,应用自行设计的NA基因半特异性引物进行RT-PCR扩增,得到NA基因的全长DNA片段,克隆到PMD18-T载体上,并进行鉴定和序列测定.测定结果表明所获得的NA基因DNA片段长1451bp,编码469个氨基酸残基,与其他亚型的NA基因编码的氨基酸长度相一致.根据推导的氨基酸序列进行预测,该蛋白具有6个潜在的糖基化位点和19个半胱氨酸残基.与其他亚型的NA基因相比较发现克隆的NA基因符合神经氨酸的分子结构特征,本研究首次获得N3亚型NA基因全序列.     

Cloning and expression of mouse canstatin cDNA in E.coli

AIM: To clone and express mouse canstatin (m canstatin) cDNA and provide a basis for the further research on its anti-angiogenic activity and potential application for cancer therapy. METHODS: Total RNA was extracted from mouse liver tissue by Trizol Reagent, and mouse canstatin cDNA was amplified by RT- PCR, then cloned into vector pMD18-T for sequencing. pET30a(+)-m canstatin recombinant plasmid was constructed and expressed in E.coli BL21 with induction of IPTG. RESULTS: Mouse canstatin cDNA is 684 bp coding 227 amino acids. The sequences of both cDNA and amino acid share high homology with human canstatin, with cDNA identity at 89% and amino acids identity at 96% to human canstatin. In the present study, pET30a(+)-m canstatin recombinant plasmid was expressed in E.coli BL21. CONCLUSION: Mouse canstatin cDNA has been cloned for the first time. Constructed pET30a(+)-m canstatin recombinant plasmid is highly expressed in E.coli BL21.     

松鼠12S rRNA基因的克隆及序列分析

为探讨松鼠的系统发育关系,对东北松鼠的12S rRNA基因进行了克隆测序,序列长度为453 bp。分析表明,东北松鼠的12S rRNA基因与欧亚红松鼠的同源性为99%,与日本松鼠的同源性为98%,与日本小鼯鼠的同源性为91%,与西伯利亚花栗鼠的同源性为88%。