H9亚型禽流感病毒钦州株HA基因的克隆与遗传进化

采集钦州活禽交易市场的鸡气管和泄殖腔的棉拭予样品,用H9亚型分型引物进行PCR初步筛选,阳性样品经SPF鸡胚尿囊腔接种分离病毒,通过RT-PCR方法扩增HA基因,并将其克隆到pMD—18T载体后进行序列测定和分析。结果表明,获得1株H9亚型禽流感病毒命名为：A／Chicken／Guangxi／qz40／2009（简称qz40）。测序结果表明qz40的HA基因片段全长1683bp,编码560个氨基酸;序列同源性比较结果表明,该毒株与参考毒株的核苷酸序列同源性为82．8％．99．9％,推导氨基酸同源性为87．5％．99．6％;HA基因的裂解位点氨基酸顺序为RSSRIGLF,为低致病性毒株;含有7个潜在的N-糖基化位点,其中5个位于HAl部分、2个位于HA2部分;基于H9亚型HA基因的进化树分析表明,qz40株属于欧亚种系的A／Chicken／Beijing／1／94（Ck／Bei—like）群系。     

Development and characterization of monoclonal antibodies to subgroup A avian leukosis virus

Avian leukosis virus subgroup A (ALV‐A) is a retrovirus which infects egg‐type chickens and is the main pathogen of lymphoid leukosis (LL) and myeloid leukosis (ML). In order to greatly enhance the diagnosis and treatment of clinical avian leukemia, two monoclonal antibodies (MAbs) to ALV‐A were developed by fusion between SP2/0 and spleen cells from mice immunized with expressed ALV‐A env‐gp85 protein. Using immunofluorescence assay (IFA), two MAbs reacted with ALV‐A, but not with subgroups B and J of ALV. Western blot tests showed that molecular weight of ALV‐A envelope glycoprotein recognized by MAbs was about 53 kD. Isotyping test revealed that two MAbs (A5C1 and A4C8) were IgG1 isotypes. These MAbs can be used for diagnosis and epidemiology of ALV‐A.     

鸡白细胞介素-18对H9亚型禽流感灭活油乳苗的免疫增强作用

[目的]探索鸡白细胞介素-18（IL-18）在H9禽流感（AI）灭活油乳苗免疫中的免疫佐剂作用.[方法]从鸡脾淋巴细胞中克隆鸡IL-18基因,亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1（＋）中,构建真核表达质粒pIL-18.将重组真核表达质粒pIL-18、H9亚型AI灭活油乳苗及其二者联合分别免疫14日龄SPF鸡,检测其细胞免疫和体液免疫水平,评价鸡IL-18在H9亚型禽流感灭活油乳苗中的免疫增强作用.[结果]成功克隆了鸡IL-18全基因,大小为597 bp.质粒pIL-18和H9亚型AI灭活油乳苗联合免疫的SPF鸡所产生的HI抗体效价在接种第4周后明显高于H9亚型AI灭活油乳苗免疫组;其T淋巴细胞的增殖反应也强于H9亚型AI灭活油乳苗免疫组.[结论]质粒pIL-18能提高H9亚型禽流感灭活油乳苗诱发的免疫应答,为研究防制禽流感的新型疫苗提供了新思路.     

PCR／PFLP鉴别伉禽白血病病毒

用PCR方法从禽白血病病毒（avian leukosis virus,ALY）亚群毒株RAV－1、RAV－2感染或未感染的SPF鸡胚成纤维细胞（CEF）分别扩增出1．2kb基因手段。RAV－1囊膜基因可初BglⅡ分为2条相近的600bp片段，RAV－2囊膜基因被BamHI分为2条约600bp片段，对照组基因片段（内源性病毒）不被BglⅡ和BamHI切割。结果显示，ALV囊膜基因PCR／RFLP可用于诊断禽白血病和鉴别不同的AVL毒株。     

不同H_5亚型禽流感灭活苗对鸡H_5N_1株的免疫效力试验

采用H5N2和H5N1两种类型的禽流感(A I)油乳灭活疫苗免疫鸡群对高致病性A I流行株H5N1A IV的攻毒保护效力进行了比较。结果表明:在同等免疫剂量条件下,H5N2和H5N1油乳灭活苗对鸡群具有相似或同等的免疫效力,均能抵抗对高致病性A IH5N1流行株的攻击;A I母源抗体对灭活苗免疫具有一定的干扰作用。     

一步法复合RT-PCR鉴别ND强毒与AI病毒的研究

根据新城疫病毒（NDV）融合蛋白和禽流感病毒（AIV）核蛋白的核酸序列设计2对引物,对NDV和AIV的特异扩增片段分别为156bp和219bp,建立了同时检测强毒力NDV和AIV核酸的一步法复合RT—PCR。试验中未能检出弱毒力NDV,IBV,IBDV,REV,REOV及SPF鸡肌肉组织的RNA,从不同年代分离的16个NDV强毒株全为阳性而NDV弱毒株全为阴性。经验证,复合引物与单一引物的扩增效率一致,能够检出NDV和H;亚型AIV的最低病毒量分别为10^3.7EID。和10^3.9EID50。试验结果表明,此次建立的一步法复合RT—PCR特异、敏感,适用于强毒力NDV和AIV．感染的快速鉴别。     

H5亚型禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗的免疫效力

利用表达H5亚型禽流感病毒血凝素基因的重组鸡痘病毒疫苗免疫SPF鸡和无母源抗体的商品鸡，通过比较免疫后血凝抑制(HI)抗体应答水平、攻毒后发病率和死亡率等指标评价其免疫保护作用。免疫后21d，重组鸡痘病毒免疫组仅有13％～20％鸡的HI抗体检测呈阳性。在同亚型禽流感病毒攻击后，重组鸡痘病毒疫苗免疫组产生了100％的保护率，而未免疫组全部死亡。结果表明：重组鸡痘病毒疫苗不能激发高滴度HI抗体应答，但可抵御同亚型禽流感病毒致死性攻击，保护效果达到或优于目前应用的灭活苗，显示出良好的应用前景。     

禽流感病毒表面抗原HA基因转化小麦的初步研究

为了建立利用小麦生产禽流感口服疫苗的方法,选择禽流感病毒H5N1亚型表面抗原HA基因,与谷类作物启动子构建小麦表达载体,经基因枪法转入我国小麦栽培品种郑9023幼胚,在含5 mg/L草铵膦愈伤诱导培养基和分化培养基及含4 mg/L草铵膦生根培养基上筛选后,PCR鉴定获得转HA基因植株,Southern杂交分析转基因T1...     

IBV陕西分离株人工感染雏鸡的临床病理学研究

用ＩＢＶ陕西分离株Ｘ，Ｆｕ，Ｗ和Ｈ株人工感染４０日龄和１９日龄的雏鸡复制人工病例，对其临床症状、大体病变和病理组织学变化进行了较详细的研究。结果表明，ＩＢＶ陕西分离株具有较强的致病力，不仅能引起雏鸡发生呼吸道症状，而且可致严重的肾脏损伤，对１９日龄鸡引起的临床症状和病理损害均比４０日龄鸡更为严重。感染４０日龄和１９日龄鸡后，潜伏期、致死雏鸡的时间与病程分别为３８～７２ｈ和３２～４０ｈ，９６ｈ和４８ｈ及２５ｄ和７ｄ．     

H9N2亚型禽流感病毒血凝素基因的遗传变异

连续3年对某鸡场禽流感感染鸡群进行跟踪监测,对使用疫苗前与使用疫苗后不同时段分离的H9N2亚型禽流感病毒的血凝素(HA)基因进行全序列分析,研究其H9N2亚型禽流感病毒在同亚型灭活疫苗的选择压力下的遗传变异。结果表明:在使用第1次分离的病毒株制备的疫苗后8个月分离该病毒株,其HA基因仅有1个氨基酸发生变异;继续使用该疫苗第2年分离的该病毒株,其HA基因有20个氨基酸发生变异。