蝉拟青霉菌株间营养亲和性的初步研究

从云南、贵州两地采集的7个蝉拟青霉Paecilomyces cicadae(Miquel)Samson菌株上分离出32个单孢子菌株,在含质量浓度20g · L-1氯酸盐的培养基上25℃左右培养5d,结果表明,菌落的多个角度出现不同形态特征的角变,可以分成3种类型.从这3种类型中选取了110个角变转接到MM培养基上观察其营养利用情况,最后共获得了抗氯酸盐的不利用硝酸盐突变菌株(nit突变体)60株,没有角变类型的专一对应关系.然后把这60株nit突变体在MM培养基上,25℃左右经配对组合培养21d进行营养亲和分析,结果显示,只有来自北回归线站云南墨江哈尼族自治县的7个nit菌株有营养亲和现象,其他菌株内或菌株间皆不亲和.菌落融合区菌丝经荧光染色观察,大量存在双核和多核细胞菌丝以及"H"型菌丝接合现象,未发现存在双核或多核分生孢子.     

牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的表达及多克隆抗体制备

为高效表达牛病毒性腹泻病毒E2蛋白并制备多克隆抗体,参考牛病毒性腹泻病毒(BVDV)基因组序列设计一对引物,利用RT-PCR扩增出822 bp的E2基因片段,经测序鉴定正确后,将其定向克隆至原核表达载体pET32a(+)中,鉴定正确后,在大肠埃希菌BL21(DE3)细胞内得到了以包涵体表达形式存在的重组融合蛋白,重组蛋白亲和层析纯化后,免疫印迹鉴定表明重组蛋白能够被牛病毒性腹泻病毒阳性血清特异性识别,具有良好的反应活性.将纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,间接ELISA测定其抗体效价达1∶25 600.本研究所表达的E2蛋白及制备的多克隆抗体,为E2蛋白结构、功能的研究以及抗原表位的鉴定奠定了基础,为进一步开发牛病毒性腹泻病毒快速检测试剂提供了条件.     

维生素E的生物学功能及在养鸡生产中的应用

1．饲料中的维生素E 维生素E又称为生育维生素或抗不育因子，按结构可分为生育酚和生育醇两类。每类又可分为Ot、B、1和84种，其中以a-生育酚活性最高，鲜绿植物如青草和青苜蓿中含很高的a-生育酚。王和民(1997)综述认为a-生育酚受晾晒和贮存以及加工条件的影响，长期在大气中晾晒和贮存使得生育酚活性大大降低。有人研究认为玉米一豆粕粉日粮中a-生育酚以0．015mg／d的速率呈线性降低。美国营养标准中收获后立即人仓的玉米含a-生育酚22mg／kg，豆粕为     

一起绵羊伪狂犬病的发生及病毒gE基因的序列变异分析

为了确诊一起绵羊伪狂犬病的发生,采集送检病羊的皮肤、脾脏、淋巴结、脑等组织器官进行实验室病毒分离和PCR检测。结果显示,病料中扩增出了伪狂犬病病毒的特异性g E基因片段。结合流行病学调查、病理剖检和实验室诊断,确定引起此次疫情的病原为伪狂犬病病毒。为了进一步了解此次疫情中PRV g E基因的分子特征,特对PCR扩增产物进行了连接、转化和测序分析。遗传进化分析表明,该分离株与亚洲各分离株处于同一分支,基因同源性高达98.4%-99.4%,与欧洲、美洲分离株同源性相对较远,分别为97.0%-97.2%、97.2%-97.3%;g E蛋白氨基酸序列分析显示,该分离株在g E蛋白的第48位和第492位各存在1个天冬氨酸的插入,与我国当前流行的伪狂犬变异株相同,同时在当前猪伪狂犬病病毒变异株基础上又出现了新氨基酸位点的变异,如L49P、P160T、V406G、G445R,其分子生物学特性有待进一步的研究。本文通过综合诊断确定该病由伪狂犬病病毒引起,为我国绵羊伪狂犬病的流行病学分析及防控提供了重要的理论依据。     

牛病毒性腹泻病毒E2蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立及临床效果评价

旨在建立一种检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗体的间接ELISA方法。将BVDV的囊膜蛋白E2基因克隆到原核表达载体pET-32a中进行表达,将纯化后的蛋白作为包被抗原,优化ELISA条件,建立了BVDV抗体间接E2-ELISA检测方法,证实该方法的特异性、敏感性和重复性均较好。用所建立的E2-ELISA方法检测从广西各牛场采集的475份血清样品,检出率为24.8%;与商品化试剂合作比较,符合率为95%。结果表明,建立的E2-ELISA方法简便易行,适用大量样本检测,可用于BVDV的抗体水平监测及牛病毒性腹泻的流行病学调查。     

嗜水气单胞菌gyrA氟喹诺酮抗性决定区的克隆与分析

研究了从病鱼体内分离的嗜水气单胞菌对氟喹诺酮类药物耐药性的分子机理。以4株对诺氟沙星等氟喹诺酮类药物耐药菌株及2株敏感菌株为模板，参照杀鲑气单胞菌gyrA基因序列，设计了1对引物，进行gyrA基因氟喹诺酮抗性决定区PCR扩增，将扩增产物克隆入pMD18-T载体，转化入大肠埃希氏菌DH5α中，小提质粒，酶切鉴定，测序并分析比较耐药菌和敏感菌的氨基酸残基序列。发现耐药菌有5个氨基酸突变位点，分别是83位点的Ser→Ile,92位点的Leu→Met,174位点的Ile→Phe,202位点的Asn→Asp,203位点的Leu→Arg，耐药菌突变后的氨基酸残基均比敏感菌正常的相对应氨基酸残基分子量大。83位点的突变与大肠埃希氏菌的耐药性突变一致。122位点具有保守的Try。     

作物无融合生殖胚、胚囊发育及遗传规律研究(综述)

本文对作物无融合生殖胚、胚囊发育、分化细胞学基础,胚发生特点,无融合生殖特性遗传规律以及无融合生殖与环境因子的关系进行了分析研究。     

乙型脑炎病毒贵州分离株E基因原核表达及其免疫原性的研究

收集某猪场1例发病种公猪的睾丸病料,处理后采用细胞培养与乳鼠脑内接毒相结合的方法盲传并结合RT-PCR方法分离鉴定,命名为乙型脑炎病毒(JEV)贵州分离株(GZ株),然后根据GenBank登录的日本乙型脑炎病毒SA14和SA14-14-2株全基因序列设计并合成1对扩增E基因的特异性引物,用RT-PCR方法扩增出JEV贵州分离株E基因,并将E基因克隆到pMD19-T载体上,构建重组质粒pMD19-T-E,经双酶切鉴定、测序及序列分析鉴定后,再将E基因亚克隆到pET-32a(+)原核表达载体上,成功构建乙脑病毒E基因原核表达质粒pET-32a-E,将构建好的原核表达质粒pET-32a-E转化至宿主菌BL21(DH3)中,诱导表达目的蛋白,表达产物经SDS-PAGE电泳和Western blot分析,得到了约59ku条带,与预期大小相符,进一步提取、纯化和浓缩目的蛋白,并将其加入弗氏佐剂后免疫小鼠,免疫后采血检测抗体。结果显示:乙型脑炎病毒贵州分离株E基因原核表达目的蛋白能诱导小鼠产生一定抗体水平,该研究为乙型脑炎亚单位疫苗的研究奠定了基础。     

补饲硒 维生素E对奶牛激素水平的影响

为进一步研究硒、维生素E对奶牛繁殖性能的影响,在某奶牛场选择临床健康、年龄、体重相近的荷斯坦奶牛50头。随机分为对照组、试验A组和试验B组,对试验A组补饲维生素E,试验B组补饲亚硒酸钠维生素E,每5 d采血1次,用高效液相色谱法测定血清中的雌三醇、4-壬基酚、17α-乙烃基雌二醇、17α-雌二醇、17β-雌二醇、双酚A的含量。结果显示,补饲维生素E、亚硒酸钠维生素E后血液中雌三醇、4-壬基酚、17α-雌二醇、17β-雌二醇、双酚A的含量均有所增加,补亚硒酸钠维生素E后各激素含量的变化明显优于补饲维生素E的变化。