黑曲霉糖化酶基因在毕赤酵母X33中的高效表达

为高效表达黑曲霉糖化酶基因,根据GenBank中糖化酶的氨基酸序列(登录号:AY652617),选用毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子偏嗜性,全基因合成新的cDNA序列。改造后的基因克隆到pGAPZαA质粒中,获得重组分泌型酵母表达质粒pGAPZαA-EC,经限制性内切酶Bln Ⅰ酶切线性化后,电击转化入毕赤酵母细胞X33内。经高浓度博莱霉素抗性筛选,得到高拷贝转化子,PCR检测结果显示,糖化酶基因与毕赤酵母染色体稳定结合。糖化酶蛋白获得分泌表达,SDS-PAGE分析其分子质量约为80 ku,其表达量约为180 mg/L。表达产物经Starch-PAGE活性染色,显示其具有酶学活性。     

混菌发酵苹果渣生产饲料蛋白的研究

试验利用太空诱变获得的优良菌种黑曲霉ZM-8和酿酒酵母、热带假丝酵母以及白地霉复配制成复合菌剂固体发酵苹果渣。通过正交试验获得了最适的培养基配方和复合菌剂的最佳配方。试验确定的最适培养基配方为硫铵7g、白糖4g、尿素2g、食盐4g,产物中粗蛋白的含量达26.4%,提高了312.50%。复合菌剂的最佳配方为黑曲霉突变株ZM-80.5g、酿酒酵母1.5g、白地霉1.0g、热带假丝酵母1.5g,产物中粗蛋白的含量达27.9%,提高了335.94%。     

1株犬源致病性黑曲霉菌的分子鉴定及生物学特性研究

从患皮肤病犬患病部位分离出1株真菌,对其培养特性、形态特征、致病性等生物学特性以及核糖体转录间隔区(rDNA-ITS)的分子特征进行研究.结果表明,该分离株具有曲霉菌的典型菌落和形态特征;经皮肤和腹腔接种途径感染免疫抑制小鼠,均出现与自然感染病例相似的皮肤病变;基于rDNA-ITS序列的分子鉴定证实该分离株为黑曲霉菌.     

片烟黑曲霉菌株产纤维素酶的条件优化及酶的分离纯化

为降低烟叶燃吸的刺激味、改善口感、增加香气、提高烟叶品质,从烟叶表面筛选到一株产纤维素酶活性较高的黑曲霉,应用Plackett Burman试验确定4种显著因子,RSM法对4种显著因子进行了优化和分析,并对酶蛋白的分离纯化作了初步研究。结果显示：发酵产酶的最适碳源为玉米芯,氮源为NH4NO3,当玉米芯用量为13.4%,NH4NO3为0.4%,温度为30.4℃,pH为5.6时产酶比活力最高,可达40.02 U·mL-1。纤维素酶酶蛋白的硫酸铵盐析最佳饱和度为60%,经Sephadex G100凝胶柱层析纯化后的比活力提高了3.5倍,回收率为32.6%,达到较高水平。     

黑曲霉变异株AU 55发酵菊芋汁产菊粉酶的研究

为提高菊粉酶活力,以菊芋汁为主要培养基成分,对一株产菊粉酶的黑曲霉(Aspergillus niger)变异株AU-55发酵产酶历程和发酵工艺条件进行研究。结果表明,菊芋汁中还原糖的含量为3.4 g.L-1,菊糖含量约为121.3 g.L-1;黑曲霉AU-55在基础发酵培养基中培养,发酵液中菊粉酶活力、糖度、酸度、菌体生物量随着发酵时间的不断延长而变化,96 h菊粉酶活力达到最大;菊芋汁添加量、玉米浆添加量、初始pH、接种量对黑曲霉AU-55菊粉酶活力的影响均显著,优化后的发酵工艺参数为:菊芋汁250.0 mL.L-1,玉米浆20.0 g.L-1,NH4H2PO45.0 g.L-1,MgSO4.7H2O 0.5 g.L-1,NaCl 3.0 g.L-1,初始pH 6.5,接种量35.0 g.L-1,30℃,200 r/min下,培养4 d,所得菊粉酶活力最高达42.3 U.mL-1。     

一株植物内生菌的化感作用测定

采用培养皿培育法,检测加拿大一枝黄花内生黑曲霉CHH-S1发酵菌液对4种作物种子萌发及幼苗生长的影响。结果表明,内生黑曲霉的发酵液能降低油菜、油麦菜和芝麻种子的发芽率,不同浓度的菌液可显著抑制4种受体植物籽苗的鲜重、根长和可溶性蛋白含量的增长,并表现出一定的浓度依赖性。油麦菜和芝麻籽苗内可溶性多糖含量受菌液刺激而增高,苋菜和油菜幼苗中的多糖含量则受到明显抑制作用。以上结果表明,加拿大一枝黄花的内生菌具有良好的化感作用。     

航天诱变混菌固态发酵玉米秸秆生产单细胞蛋白条件的优化

通过正交试验对啤酒酵母YB-6的接种时间、接种量和黑曲霉ZM-8与啤酒酵母YB-6共生发酵时间等因素的参数进行了优化。结果表明,啤酒酵母YB-6的接种时间(A)、接种量(B)和共生发酵时间(C)对CMC酶、FPU酶和SCP含量的影响大小顺序均为ACB,且产CMC酶和SCP的最优组合为A3C2B2,即酵母菌的接种时间为黑曲霉ZM-8发酵24h后、共生发酵时间为48h、接种量为10%;产FPU酶的最优组合为A4C3B3,即酵母菌的接种时间为黑曲霉ZM-8发酵36h后、共生发酵时间为60h、接种量为15%。最后,综合各因素将发酵条件的最优组合确定为A3C2B2。优化后的FPU酶、CMC酶和SCP含量分别为6.83、28.12U/g和26.73%,比优化前测定各指标值均有不同程度的提高。     

杀菌剂对剑麻茎腐病病原菌的室内毒力测定

由黑曲霉引起的剑麻茎腐病是一种毁灭性病害,对我国的剑麻产业造成极大的威胁.鉴于此,本研究在室内采用菌丝生长速率法测定了14种杀菌剂对黑曲霉病原菌的抑菌效果,同时进行药剂成本分析,结果表明:50%咪鲜胺锰盐WP的EC50最小,病原菌对它的敏感性最高,抑菌效果最好;3%甲基多抗霉素WP和40%五硝基多菌灵WP的EC50较小,病菌对它们的敏感性也较高,抑菌效果也较好;70%甲基托布津WP的EC50最大,病菌对它们的敏感性最低,抑菌效果最差.通过对药剂抑制效果和使用成本分析,建议生产上可使用50%咪鲜胺锰盐WP、40%五硝基多菌灵WP和3%甲基多抗霉素WP来防治剑麻茎腐病.     

石河子地区鲜食葡萄烂果病病原鉴定

[目的]明确石河子地区鲜食葡萄果实烂果病的主要病原.[方法]通过田间调查及对具有典型烂果症状的病样进行分离纯化和培养,对病原进行常规形态学和分子生物学鉴定.[结果]通过鉴定查明引起石河子地区葡萄烂果的病原菌主要有三种:灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea .Pers),黑曲霉(Aspergillus niger)和黑根霉(Rhizopus nigricans).[结论]石河子葡萄烂果的主要病原有3种,其诱因主要与8月上旬久旱遇雨和膨大剂用量较多有关.     

米曲霉和黑曲霉双菌种制曲对豆酱酶系影响的研究

以黄豆和面粉为主要原料,以淀粉酶、蛋白酶、β-葡萄糖苷酶和纤维素酶的活性为指标,采用单因素试验方法,研究米曲霉和黑曲霉(质量比为1:1)对豆酱制曲酶系的影响,优化制曲工艺参数。试验结果表明,采用添加熟面粉的方式,制曲时间为36h,制曲温度为29～32℃,接种量0.04%,双菌种曲中酶的活性高于单一米曲霉曲。