全文获取类型
收费全文 | 2076篇 |
免费 | 62篇 |
国内免费 | 137篇 |
专业分类
林业 | 47篇 |
农学 | 74篇 |
基础科学 | 31篇 |
94篇 | |
综合类 | 659篇 |
农作物 | 54篇 |
水产渔业 | 88篇 |
畜牧兽医 | 1062篇 |
园艺 | 65篇 |
植物保护 | 101篇 |
出版年
2024年 | 20篇 |
2023年 | 47篇 |
2022年 | 65篇 |
2021年 | 70篇 |
2020年 | 47篇 |
2019年 | 51篇 |
2018年 | 24篇 |
2017年 | 47篇 |
2016年 | 67篇 |
2015年 | 53篇 |
2014年 | 63篇 |
2013年 | 65篇 |
2012年 | 98篇 |
2011年 | 110篇 |
2010年 | 92篇 |
2009年 | 142篇 |
2008年 | 134篇 |
2007年 | 86篇 |
2006年 | 90篇 |
2005年 | 87篇 |
2004年 | 69篇 |
2003年 | 76篇 |
2002年 | 60篇 |
2001年 | 62篇 |
2000年 | 52篇 |
1999年 | 44篇 |
1998年 | 52篇 |
1997年 | 48篇 |
1996年 | 40篇 |
1995年 | 45篇 |
1994年 | 51篇 |
1993年 | 47篇 |
1992年 | 36篇 |
1991年 | 59篇 |
1990年 | 32篇 |
1989年 | 24篇 |
1988年 | 9篇 |
1987年 | 2篇 |
1986年 | 3篇 |
1984年 | 2篇 |
1981年 | 1篇 |
1955年 | 2篇 |
1953年 | 1篇 |
排序方式: 共有2275条查询结果,搜索用时 15 毫秒
21.
22.
23.
Sato等报道,在质粒载体上引入大肠杆菌Amp^ 抗性基因(内含有6核苷酸片段的ISS免疫增强序列),真皮免疫小鼠后ISS增强CTL和Th1细胞的免疫反应。有人提出利用含有病毒免疫原性基因的基因大片段进行基因免疫,以弥补单基因免疫活性的不足。将协同因子如IL-2、IL-12、TCA等的表达质粒与抗原表达质粒混合注射可使Th1型细胞免疫增强,而GMcsf能明显加强体液免疫, 相似文献
24.
25.
由于化学合成长链开环探针面临许多困难,因此需要开发一种长链开环探针的生物合成方法.该研究利用生物合成的146 bp长链开环探针进行单核苷酸多态性(SNP)分型,以验证长链开环探针生物合成的可行性.结果表明:长链开环探针能够特异地与目的DNA结合,完美配对的长链开环探针能够被DNA连接酶连接,形成环状单链DNA分子,不能... 相似文献
26.
为建立特异性强、灵敏度高、重复性好的产气荚膜梭菌荧光定量PCR检测方法,本试验根据产气荚膜梭菌的plc基因保守序列设计合成特异性引物探针,摸索其最佳反应条件,进行灵敏性、特异性、重复性以及临床样本验证。结果表明:建立的方法具有较好的灵敏性、特异性及重复性,最低检出限度为8.26×101拷贝/μL,在8.26×103~8.26×108拷贝/μL的范围内具有良好的线性关系,同时不与其他致病菌发生交叉反应,组间及组内的变异系数均小于4%,应用比方法在采集的300份临床样品中检出24份阳性样品,与常规细菌分离鉴定方法结果符合率为94.12%。说明试验成功建立了牛产气荚膜梭菌荧光定量PCR检测方法,这将为牛产气荚膜梭菌的快速诊断提供技术支持。 相似文献
27.
采用逆转录-重组酶介导等温核酸扩增技术(RT-RAA)和成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)检测系统,建立一种快速、高灵敏度和高特异性的禽流感病毒(AIV)H5亚型核酸检测新方法。通过分析342条禽流感病毒H5亚型的HA基因序列,选取保守性区域设计具有强特异性的CRISPR RNA(crRNA)序列以及RT-RAA引物,并对检测体系中的主要成分LwaCas13a蛋白、crRNA、TaqMan探针、T7 RNA Polymerase、NTP Buffer Mix含量进行优化,建立了基于RT-RAA的AIV H5亚型核酸CRISPR-Cas13a检测方法。取105~1 copies·μL-1含有目的基因的质粒标准品和其他亚型禽流感病毒以及其他禽病病毒分别验证和评价该方法的灵敏性和特异性。结果表明,本文设计的RT-RAA引物与crRNA特异且灵敏,其最佳反应体系中主要成分用量分别为LwaCas13a蛋白(60μg·mL-1)2.0μL、crRNA(100μmol·L-1)3.2μL、TaqMan... 相似文献
28.
核酸探针技术通过分析病原生物的遗传结构。根据这段基因结构的序列,就可以设计可与其互补的DNA探针,与病原生物的DNA进行杂交,以此来确定病原携带者和传播者的分子生物学技术。该技术具有灵敏度高、特异性强等优点,近年来在对虾病毒病的检测中倍受青睐。 相似文献
29.
赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)普遍存在于谷物等粮食和动物饲料中,是一种可以引起癌症的霉菌毒素。为了快速检测OTA,利用荧光染料PicoGreen识别双链DNA原理,建立了一种基于核酸适体与PicoGreen检测毒素OTA的方法。在10 mmol/L Tris,120 mmol/L Na Cl,5 mmol/L KCl,20 mmol/L CaCl2(pH8.5)缓冲液中,PicoGreen与双链DNA结合后,释放的荧光在3 min内达到峰值(激发波长为480 nm,发射波长为520 nm)。从加样到荧光检测,整个流程可在40 min内完成。检测OTA的灵敏度为1μg/L;检测范围为1μg/L~200μg/L。特异性实验表明:OTA核酸适体-Pico Green方法与黄曲霉毒素B1、伏马毒素B1、桔毒素和玉米赤霉烯酮等霉菌毒素无交叉反应。本方法在检测敏感性和特异性方面与传统抗体ELISA方法相当(Kappa值为:0.857)。由于核酸适体成本比抗体低,因此本方法比抗体ELISA方法更具实用价值。 相似文献
30.
《(《农业科学与技术》)编辑部》2015,(8)
[目的]考察LAMP方法检测乳制品中单核细胞增生李斯特氏菌的可靠性。[方法]使用恒温环介导技术,以单核细胞增生李斯特氏菌编码的李氏溶血素O的hly A基因为研究对象设计引物,建立单核细胞增生李斯特氏菌的LAMP快速检测方法。[结果]LAMP法特异性强,灵敏度与荧光定量PCR相当。使用LAMP方法检测各种乳制品中的单核细胞增生李斯特氏菌结果与细菌分离方法检测结果完全一致。[结论]LAMP检测结果可以通过肉眼直接加以鉴别,适合乳制品突发事件情况中的检测。 相似文献