水果和蔬菜中维生素C的全量分析

本文提出一个具有简便、快速、准确等优点的步骤,应用紫外分光光度法测定水果蔬菜中的抗坏血酸(AA)和脱氢抗坏血酸(DHAA),用易配制、耐保存的三氯醋酸(TCA)溶液取代广泛使用、但难以配制和保存的偏磷酸溶液来提取样品中的维生素C(Vc);且在Cu~(2 )溶液里溶入1.0％的蔗糖,来增加Cu~(2 )催化氧化AA的能力,降低实际样品中AA进行氧化还原反应所需温度。     

植物样品中游离氨基酸总量测定方法的改进

本文根据氨基酸与茚三酮显色反应的原理,对传统测定植物鲜样游离氨基酸总量的方法作了改进。用沸水浴处理植物样品提取液可以破坏样品中抗坏血酸,使得样品提取液与制作氨基酸标准曲线反应液的抗坏血酸完全控制在同一水平上,避免了样品与标准曲线反应液由于抗坏血酸含量不同造成的误差。另外适当提高反应体系抗坏血酸的浓度可以提高反应灵敏度。     

含抗坏血酸保鲜剂对小苍兰切花几个衰老指标的影响

小苍兰切花采后花瓣中可溶性蛋白质含量前期上升，后期下降，丙二醛含量不断上升。细胞膜透性不断加大；随着瓶插期的延长超氧化物歧化酶活性不断下降。保鲜剂降低了ＭＤＡ在花瓣中的积累速度，减缓了ＳＯＤ酶活性下降速率，保护了细胞膜，并降低了蛋白质的降解速率，从而延长了切花寿命，并提高了小花开放率。     

水杨酸对葡萄幼苗叶片膜脂过氧化的影响

 以一年生京秀葡萄 (Vitisviniferacv .Jingxiu)扦插苗为试材 ,研究了外源水杨酸对葡萄叶片膜脂过氧化的影响。结果表明 ,喷施 1× 10 -4mol·L-1的水杨酸后 ,葡萄幼苗叶片的丙二醛含量下降 ,可溶性蛋白质含量升高 ,抗氧化酶抗坏血酸过氧化物酶、谷胱甘肽还原酶活性和抗氧化剂类胡萝卜素、谷胱甘肽、抗坏血酸含量显著升高。水杨酸可能通过提高葡萄叶片对膜脂过氧化的抗性来诱导其对胁迫的抗性。     

毛白杨抗坏血酸过氧化物酶启动子克隆与分析

[目的]研究毛白杨抗坏血酸过氧化物酶(APX)的基因启动子在转录调控中的作用,为进一步探讨抗坏血酸过氧化物酶启动子在植物抗逆中的应用奠定基础.[方法]依据毛白杨与毛果杨基因的高度同源性,以毛果杨LG-IX染色体上抗坏血酸过氧化物酶启动子序列为模板设计引物,从毛白杨总DNA中克隆一段启动子序列.[结果]克隆出的抗坏血酸过氧化物酶启动子序列长1234 bp,与毛果杨同源基因的同源性高达81.96%.该启动子包含多种可能与胁迫相关的顺式作用元件保守序列,这些顺式作用元件参与光调节转录、激素信号和植物防御信号的应答,PpAPX-IX基因在老叶叶肉和老叶叶脉中表达较多,老叶中表达较多,在新叶中表达较少;在生长旺盛的部分比如根和形成层表达量很低或不表达.[结论]该启动子能为组织特异性启动子,受多种逆境胁迫产生的化学信号的诱导在成熟细胞中特异性表达,可以构建该启动子连接PBI101的表达载体.     

外源抗坏血酸对盐胁迫下商麦1619生长生理的影响

通过不同质量浓度的外源抗坏血酸(AsA)浸种处理,对小麦种子发芽率及幼苗生理指标的测定,分析外源抗坏血酸对盐胁迫下商麦1619种子萌发及幼苗生长的影响。NaCl胁迫下小麦幼苗的发芽势和发芽率显著(P0.05)下降,各处理的小麦种子发芽率及幼苗的游离脯氨酸含量、可溶性糖含量、过氧化物酶(POD)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性均呈先升后降趋势,丙二醛(MDA)含量呈现先降后升的趋势。与对照相比,0.15 g/L AsA处理的小麦幼苗体内游离脯氨酸含量、可溶性糖含量、SOD的活性增幅分别为67.5%、70.6%、0.3%,小麦幼苗体内POD的活性是AsA0处理(0.05 g/L ASA)的1.18倍,小麦幼苗体内MDA含量比单独盐胁迫下降低了61.5%。结果表明,添加外源AsA能显著提高盐胁迫下小麦种子发芽率,外施适宜浓度的AsA能缓解盐胁迫对小麦的伤害,且0.15 g/L的AsA缓解效果最佳。     

苹果L-半乳糖-1-磷酸磷酸酶cDNA克隆及其表达

 【目的】了解苹果果实L-半乳糖-1-磷酸磷酸酶(L-galactose-1-phosphate phosphatase, GPP)基因的特性,探索苹果GPP基因表达特性及其与抗坏血酸(ascorbic acid,AsA)水平的关系。【方法】通过RT-PCR从苹果果实中克隆GPP 全长 cDNA,分析其序列特征,进行原核表达,制备GPP特异抗体,分析GPP mRNA及其蛋白表达水平与苹果不同组织AsA的关系。【结果】从‘嘎啦’苹果果实中克隆的GPP cDNA(GenBank登录号为 FJ752240)包含的最大开放阅读框(open reading frame,ORF)为813 bp,编码270个氨基酸残基,预测分子量为29 kD,该基因与其它植物报道的GPP基因具有较高的相似性,但与肌醇-1-磷酸磷酸酶基因差异较大。构建的pET-32a(＋)-GPP载体在大肠杆菌BL21(E. coli BL21)中异源表达后,获得主要以包涵体存在约50 kD的融合蛋白GPP-His(His约21 kD)。以该蛋白制备抗体,与重组蛋白的Western杂交表明该抗体能与GPP发生特异反应。对苹果可溶性蛋白杂交显示,苹果体内GPP蛋白约33 kD。在苹果不同组织中,GPP mRNA与蛋白质的相对表达水平与AsA含量存在明显的一致性。【结论】以单体形式存在的苹果GPP蛋白具有翻译后修饰特性,且该基因的表达在苹果AsA合成调控中可能起重要作用。     

水葫芦沼液对青菜抗坏血酸-谷胱甘肽循环的影响

探讨不同用量水葫芦沼液对青菜体内抗坏血酸(ASA)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量及其代谢相关酶活性的影响,进而阐明其与青菜体内ASA-GSH循环的关系.以青菜(Brassica chinensis L.)为材料,在25%沼液+75%霍格兰营养液、50%沼液+50%霍格兰营养液、75%沼液+25%霍格兰营养液和100%沼液处理下,测定幼苗内ASA-GSH循环各组分(ASA、脱氢抗坏血酸(DHA)、GSH、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)、抗坏血酸氧化酶(AAO)、单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)、脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)和谷胱甘肽还原酶(GR))含量或活性的变化.结果显示:25%沼液+75%营养液处理组与对照(营养液组)相比,对促进青菜生长和其体内ASA-GSH循环有显著影响,还可能对提高青菜抗氧化防御能力有一定作用.     

抗坏血酸预还原钯作基体改进剂GFAAS法测定贝类产品中铅的含量

在抗坏血酸预还原钯作为基体改进剂的条件下,确定了灰化温度及原子化温度,建立了一种石墨炉原子吸收光谱法测定贝类产品中铅的实验方法.结果表明,在抗坏血酸预还原钯为基体改进剂、灰化温度为800℃和原子化温度为1 900℃条件下,铅在0 ～ 50.0 μg/L的浓度范围内具有良好的相关性,相关系数为0.9 997.当取样量为0.250 g干样、定容体积为25 mL时,方法检出限为0.04 mg/kg,加标回收率为93.5％ ～ 103.0％,RSD为1.41％～4.35％.参考物质缢蛏的测定值在证书推荐值的允许误差范围内.该方法比其他方法的灵敏度高,准确可靠,适合贝类产品中铅的检测.并应用此方法测定了福建省中北部海域贝类中铅的含量,结果表明,福建省中北部海域中贝类均未超标,安全性良好.     

大豆脱氢抗坏血酸还原酶基因的电子克隆及进化分析

利用生物信息学和实验验证的技术路线,以拟南芥脱氢抗坏血酸还原酶基因cDNA序列为信息探针,对大豆EST数据库进行同源搜索,经同源性比对和序列组装,获得全长为955bp的大豆脱氢抗坏血酸还原酶基因的cDNA序列(GenBank登录号为DQ006810),经RT-PCR扩增,分子克隆和序列分析验证,结果表明与电子克隆完全一致.该cDNA序列具有完整的开放阅读框架(ORF,36bp-815bp),推测编码蛋白为259个氨基酸.通过与几种植物脱氢抗坏血酸还原酶蛋白序列的比较,发现该基因具有较高的保守性.结果表明根据物种问同源基因序列,对跨物种问EST数据库进行同源检索筛选,拼接,是新基因克隆的一条有效途径.