鸭CYP7_α1基因克隆、序列分析及组织表达研究

旨在克隆鸭胆固醇7α羟化酶1(CYP7α1)基因,并进一步探讨该基因的结构与功能,揭示其组织特异性表达规律。本研究以樱桃谷鸭为材料,运用同源序列克隆结合RACE技术,对鸭CYP7α1基因的cDNA全长进行克隆,并对其进行生物信息学分析及组织表达的研究。结果表明:鸭CYP7α1基因cDNA全长2 351bp,最大开放阅读框(ORF)1 539bp(114～1 652bp),共编码512个氨基酸;鸭CYP7α1氨基酸与鹅的同源性最高(97.5%),其次是鸡(92.8%)、人(67.3%)、猪(66.5%)、兔(65.7%)、大鼠(65.5%)、小鼠(65.5%)和牛(65.1%);经预测鸭CYP7α1蛋白可能含有1个P450超家族结构域;鸭CYP7α1基因在肝脏中呈高丰度表达,在其他9个组织中均未检测到或检测到少量表达,表明该基因的表达具有组织特异性。     

SLA-DQA基因在F18大肠杆菌抗性和敏感性断奶仔猪间的差异表达分析

运用荧光定量PCR方法分析SLA-DQA基因在苏太猪F18大肠杆菌病抗性和敏感性资源群体中各个组织的分布和表达水平,以及在抗性组和敏感组中的表达差异,以探讨SLA-DQA基因在断奶仔猪抗大肠杆菌F18菌株感染中发挥的作用。试验结果显示,SLA-DQA基因在所检测的11个组织中均有表达,并呈现相似的表达规律,在肺、脾和淋巴结中的表达量较高,在空肠、十二指肠和胸腺中也有中度的表达。SLA-DQA基因在抗性组个体各个组织中的表达量普遍高于敏感性个体,而且在肺、脾、淋巴结、空肠和十二指肠5个组织中,SLA-DQA基因在抗性组个体中的表达量显著高于敏感性个体(P<0.05)。由此可见,当断奶仔猪受到大肠杆菌毒素侵扰后,SLA-DQA基因较高的表达量有利于SLA-II类抗原分子的合成,SLA-DQA基因虽然不是针对由大肠杆菌F18菌株造成的断奶仔猪腹泻和水肿病的直接免疫因子,但是在断奶仔猪受大肠杆菌F18菌株病原菌侵袭后引起的一系列生理变化和应答过程中发挥着重要的作用。     

徐淮山羊H-FABP基因克隆、表达产物亚细胞定位的研究及转基因小鼠的制备

旨在克隆徐淮山羊心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因的cDNA,探讨其生物信息学功能。通过EGFP融合蛋白对该基因亚细胞水平的表达定位,探究该基因在异种生物体内表达情况,探索制备异种转基因动物的可能性。采用反转录PCR(RT-PCR)方法克隆徐淮山羊H-FABP基因cDNA,进行生物信息学分析,构建其融合表达载体pEGFP-H-FABP。脂质体(LTX)介导基因转染山羊成纤维细胞(GEF),48h后进行荧光检测,RT-PCR检测mRNA在细胞内的表达。利用睾丸注射将目的基因转入小鼠体内,在DNA和蛋白水平上检测目的基因的表达情况。结果,徐淮山羊H-FABP基因完整编码区(CDS)大小为402bp,编码133个氨基酸,GenBank登录号为AY466498.1。徐淮山羊H-FABP序列与人、鸡、褐家鼠、奶牛、野猪、驴及斑马鱼相应编码区同源性为89%、76%、85%、84%、93%、91%、70%,氨基酸序列同源性为90%、79%、88%、97%、95%、94%、72%。成功构建融合表达载体pEGFP-H-FABP,目的基因在mRNA水平上成功表达。目的蛋白定位于细胞质中,与在线预测结果相同(无信号肽,定位于细胞质中)。通过尾静脉注射和睾丸注射,该基因可以在小鼠体内实现暂态表达和持续性表达。本研究成功克隆了徐淮山羊H-FABP基因cDNA,而且H-FABP基因在进化过程中是保守的。该蛋白无信号肽,在单细胞水平上可表达于细胞质中,在小鼠体内也可以成功表达。     

FSHR基因第1外显子多态性及其与小梅山猪产仔数的关系

本研究旨在检测猪FSHR基因第1外显子多态性,并分析其与产仔数之间的关系.采用PCR- SSCP和直接测序方法检测基因多态性,利用最小二乘法分析其与母猪产仔数的关系,同时对多态位点的方差组分进行分析,并预测选择反应.研究结果表明:猪FSHR基因第1外显子区域内检测到3个SNPs(C70T、C74G、C81T),其中C74G导致氨基酸的改变,同时,筛选出3个单倍型和5种基因型;FSHR基因单倍型与基因型分布在小梅山猪、枫泾猪与大白猪群体间差异达到极显著水平(P＜0.01);关联分析结果显示,2胎以上的小梅山母猪中,AA和CC基因型个体的TNB比BC基因型分别低0.64(P＞0.05)和0.36头(P＞0.05),所有胎次中,AA基因型个体的TNB 和NBA比AC基因型分别低0.80(P＜0.01)和0.67头(P＜0.01).对于FSHR基因第1外显子而言,小梅山猪TNB和NBA的遗传主要受到显性效应的影响.     

人工鸽乳对乳鸽非特异性免疫力的影响

研究人工鸽乳对乳鸽非特异性免疫力的影响。本研究选择120羽人工孵化同期出雏的乳鸽,随机分为四组,每组30羽。Ⅰ组为对照组,亲鸽自然哺育;Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ为试验组,从初生至28日龄,按高中低蛋能比的人工鸽乳进行人工哺喂。结果显示:14日龄前免疫器官指数随着蛋能比由高到低而逐渐增大,但人工哺育组显著低于对照组(P<0.05);28日龄Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组胸腺指数相近(P>0.05);法氏囊指数、血清抗体水平在各日龄间随蛋能比从高到低表现为逐渐升高,但均显著低于对照组(P<0.05);在14日龄时,Ⅱ组血清抗体水平低于Ⅲ、Ⅳ组,Ⅲ、Ⅳ组间差异不显著(P>0.05)。由此表明:人工鸽乳的蛋能比是影响乳鸽非特异性免疫的重要因素之一。     

Texel和乌珠穆沁绵羊妊娠中后期胎儿背最长肌中 AKT基因的发育表达模式

选择绵羊胎儿期骨骼肌中表达稳定性高的内参基因,探讨AKT基因在绵羊妊娠中后期背最长肌中的发育性表达模式。以Texel和乌珠穆沁绵羊为研究对象,采用荧光定量PCR技术检测SDHC、YWHAB、RPLPO、RPS18、B2M 5个内参基因的mRNA表达水平,同时检测AKT基因mRNA丰度在其胎儿期70、85、100、120和135 d间的表达变化,并分析其在品种间和不同生长阶段间的表达差异及其对肌肉生长发育的影响。5个内参基因的定量结果经GeNorm程序统计学分析处理,表达稳定性由高到低排序为RPS18＞RPLPO＞SDHC＞B2M＞YWHAB,确定用RPLPO、RPS18和SDHC 3个基因校正绵羊胎儿期不同生长阶段的目的基因表达量。在5个发育阶段中,两个品种绵羊胎儿AKT基因表达模式有一定差异,AKT表达量在Texel绵羊85和120 d时均有明显的增加,而在乌珠穆沁绵羊的100 d时出现1个表达峰,这与试验对两品种绵羊组织学分析的结果是一致的,进一步印证了Texel绵羊在85和120 d以及乌珠穆沁绵羊在100 d时存在肌发生波的推测。以上结果初步揭示绵羊妊娠中后期生长发育过程中AKT基因表达的发育性变化模式和品种差异,为深入研究AKT基因的作用机制提供了理论基础。     

Arginine Levels Affect Growth and CSN3 Gene Expression of Dairy Cows Mammary Epithelial Cells in Vitro

本试验旨在研究培养基中添加不同浓度的精氨酸( Arg)对乳腺上皮细胞体外增殖及κ-酪蛋白(CSN3)基因表达的影响.选用中国荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞进行体外培养,以无Arg的培养基(0.00 mg/L)为对照(0组),试验培养基分别添加69.50(0.25组)、139.00(0.50组)、278.00(1.00组)、556.00(2.00组)、1 112.00(4.00组)和2 224.00 mg/L(8.00组)的精氨酸.结果表明:Arg能促进乳腺上皮细胞的增殖,24 h时,0.25～4.00组与0组相比均差异显著(P＜0.05),8.00组与0组相比差异不显著(P＞0.05);48和72 h时,各试验组与0组相比均差异显著(P＜0.05).Arg能促进CSN3基因的表达,各试验组与0组相比均差异显著(P＜0.05),当Arg浓度为556.00 mg/L时,CSN3基因表达量最高.结果提示,Arg对乳腺上皮细胞增殖及CSN3基因表达均具有明显的促进作用,且在Arg浓度为69.50～1112.00 mg/L时促细胞增殖效果较佳,在Arg浓度为556.00 mg/L时促CSN3基因表达作用最强.     

半番鸭及其亲本生长曲线拟合与杂种优势分析

实验测定了樱桃谷鸭、白羽番鸭、苏牧麻鸭、白羽番鸭♂×樱桃谷鸭♀(樱番鸭)、白羽番鸭♂×苏牧麻鸭♀(苏番鸭)早期体重数据,发现樱番鸭杂种优势率为12.8%,苏番鸭为22.04%。用Logistic、Von Bertalanffy和Gompertz3种非线性生长模型拟合其生长曲线,通过比较拟合优度、复相关指数和进行适合性χ2检验,发现Gompertz模型拟合效果最好。比较5组鸭Gompertz模型拟合参数,结果表明:在亲本鸭组中白羽番鸭初始重较樱桃谷鸭和苏牧麻鸭高,初始生长速度、最大周增重较这2个亲本组低,拐点时间也比其晚。2个杂交组最大周增重、成熟速度、极限体重、拐点体重、初始重和拐点时间都有很大提高,存在明显的杂种优势。     

苏姜猪ESR基因和FSHβ基因多态性及其对部分生长性状的影响

研究157头苏姜3世代猪ESR和FSHβ基因型分布,并对基因型与6月龄体高、体长、胸围和体重作了相关分析。结果表明:两位点在苏姜猪中存在多态性;ESR基因BB基因型猪的体高、体长、胸围和体重显著(P<0.05)低于AA基因型的个体,体高、胸围、体重达到极显著水平;FSHβ基因BB基因型个体的体长显著(P<0.05)低于AA型的个体。合并基因型BBBB个体的体高和胸围显著(P<0.05)低于AAAB、AABB、ABAB和ABBB基因型个体,而体重则显著(P<0.05)低于其他合并基因型的,部分基因型之间达到极显著水平(P<0.01)。结果提示,两基因有利于产仔数的BB型体尺性状较小,生长速度较慢。苏姜猪选育时应进行ESR和FSHβ基因的分子标记辅助选择,可避免B等位基因的流失。     

日粮结构对羊瘤胃原虫种群及吞噬速率的影响

本文以4只瘤胃瘘管山羊为试验动物,研究碳水化合物结构对山羊瘤胃发酵、原虫种群结构及吞噬速率的影响。设置精粗比为10∶90、30∶70、50∶50、70∶30的4种日粮(A、B、C、D组),其干物质中中性洗涤纤维(NDF)分别为54.87%、44.23%、33.72%、23.23%。采用4×4拉丁方设计,使用荧光标记细菌技术测定原虫吞噬细菌的速率。结果表明:日粮结构影响瘤胃发酵,以B组微生物活力较强、NDF降解率较高、pH也相对稳定;原虫吞噬速率与日粮NDF含量间呈三次方曲线关系(Y=-0.183065X2-0.003092X3+467.117113,R2=0.86795)。吞噬速率与细菌(原虫)密度呈负(正)相关关系,方程为Y=445.514-3.078X1+1.864X(2R2=0.839、Y为吞噬速率;X1和X2为细菌和原虫密度)。日粮结构显著影响原虫种群结构,内毛虫和等毛虫随NDF含量降低而增高,而双毛虫和头毛虫则相反。内毛虫与双毛虫和头毛虫的吞噬速率分别为361.9、606.3个/h和607.5个/h,种属间差异显著,但不同种属吞噬速率随日粮结构变化的趋势基本一致。综上所述,日粮结构可以引起瘤胃发酵状态的改变,从而影响原虫种群结构和吞噬速率。