芽孢杆菌中新型非核糖体肽类抗菌活性物质的发掘、分离鉴定及特性研究

本研究旨在基于对细菌次级代谢产物的筛选,寻找新型非核糖体肽类抗菌物质。通过对烟台沿海地区的土壤、海水及近海常见海洋生物中的细菌进行培养,分离纯化得到细菌的单克隆,以大肠杆菌（E.coli）ATCC 25922和金黄色葡萄球菌ATCC 29213为指示菌进行初步筛选,以耐多黏菌素和碳青霉烯E.coli B2（bla_NDM-5+mcr-1）和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA） T144作为指示菌对有活性的细菌进行二次筛选。通过提取基因组进行PCR扩增产物测序比对,确定活性菌种属。采用有机萃取法对细菌的次级代谢产物进行萃取,通过凝胶层析和制备液相色谱进行纯化,利用分析型液相色谱进行纯度检测,进—步利用质谱对纯化后的抗菌活性物质进行结构鉴定。测序结果表明,活性菌属于解淀粉酶芽孢杆菌种,将其命名为解淀粉酶芽孢杆菌9-14（活性菌9-14）。抑菌试验结果表明,活性菌9-14的代谢产物对金黄色葡萄球菌ATCC 29213、MRSA T144、E.coli ATCC 25922和E.coli B2均具有高效抑制作用。活性菌9-14代谢产物是由氨基酸链组成的环状脂肽,属于伊枯草菌素的衍生物。对活性菌9-14代谢产物的生物学特性及其抑菌谱研究发现,活性菌9-14的代谢产物具有良好的热稳定性和酸碱稳定性,该抗菌物质经胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K和木瓜蛋白酶处理后抗菌活性没有明显减弱,具有较好的稳定性;该抗菌物质对所用金黄色葡萄球菌和大肠杆菌同样具有抑制作用,对绿脓杆菌、肺炎克雷伯杆菌、粪肠球菌和蜡样芽孢杆菌均不表现活性。本研究得到一种新型的抗菌物质,以该抗菌物质为抗菌药物的前体,可为食品安全和疾病控制提供一定的参考依据。     

我国出口食品过敏原成分管理亟待规范的思考

食品过敏原成分的检测和标注已经成为欧美等发达国家限制我国食品出口的新技术性壁垒。列出了不同发达国家对过敏原成分相关法规及要求,为保护消费者的健康和安全,建议我国食品加工出口企业、检验检疫部门和国家应该采取的相应措施。     

仙客来体细胞胚发生和发育过程中淀粉粒的动态变化

以仙客来(Cyclamen persicum Mill.)开花植株的新生叶片为外植体,诱导筛选胚性愈伤组织,并使其进一步发育成体细胞胚.组织切片观察结果表明:胚性愈伤组织由胚性和非胚性细胞组成,胚性细胞多以胚性细胞团的形式存在,胚性细胞团起源于诱导的胚性决定细胞.体细胞胚起源于单个胚性细胞,经多细胞原胚、球形胚、心形胚和鱼雷胚等时期发育成完整植株.在体细胞胚的发生发育过程中,淀粉粒出现4次积累高峰,分别为胚性细胞、球形胚、早期鱼雷胚和成熟胚发育成完整的小植株时期,淀粉代谢与体细胞胚发生、发育及小植株的形态建成密切相关.     

苹果砧木YUCCA10a基因的克隆及其在嫁接树体的定量表达分析

为了研究M9矮化砧和八棱海棠砧YUCCA10a基因的结构特征及其嫁接树体的表达特征,从M9矮化砧和八棱海棠砧中克隆了YUCCA10a基因,并对该基因进行了序列分析以及不同时期2种砧木嫁接"烟富3"的定量表达分析。通过分析表明,该基因的编码序列为1 149 bp,推导编码382个氨基酸,预测蛋白质分子量为94 285.29 Da,理论等电点为5.08。实时荧光定量PCR结果表明,5月和10月份的M9矮化砧嫁接"烟富3"中YUCCA10a基因相对表达量明显低于八棱海棠砧,2种砧木嫁接的"烟富3"中YUCCA10a基因在10月份的相对表达量略高于5月份。本试验结果为研究M9矮化砧和八棱海棠砧YUCCA10a基因的结构特征和砧木对嫁接"烟富3"影响的机理方面提供理论依据。     

玉米成熟子粒RNA提取方法的改良与优化

玉米成熟子粒含有较多的多糖、蛋白质和脂类,传统的RNA提取方法难以提取到高质量的RNA。以授粉后28 d灌浆后期的玉米子粒为试材,以授粉后7 d的玉米子粒为对照,对目前国内外常用的Trizol法、Biozol法、RNAiso Plus法、三种硅胶柱商业试剂盒总RNA提取方法以及本研究建立的改良提取方法进行比较。结果表明,以授粉后7 d的玉米子粒为材料时,各种方法都能获得较好提取效果;以灌浆后期接近成熟玉米子粒为试材时,采用本研究改良或新建立的提取法,可以大幅降低提取成本,快速提取高质量和高得率的RNA。     

黄河三角洲滨海棉田土壤盐分特征研究

采用相关分析和主成分分析方法对黄河三角洲棉田试验区土壤盐分特征进行研究,结果表明,试验区土壤为中度盐渍化,且盐分呈现一定的表聚现象;土壤各层盐基离子中,阳离子以Na⁺为主,阴离子以Cl^-为主,这两种离子对棉花生长的毒害作用尤为突出;土壤盐分含量与Na⁺、SO₄^2-、Cl^-、Mg²⁺、Ca²⁺、NO₃^2-、HCO₃^2-离子含量均呈极显著正相关;Na⁺、Cl^- 及SO₄^2-是影响试验区棉田盐渍化的主要特征因子。本研究结果可为黄河三角洲地区盐渍化土地科学管理和农业可持续发展提供理论基础和实践依据。     

罗非鱼鳃霉样真菌的显微观察

2014年5月在云南省养殖罗非鱼的鳃组织中发现一种鳃霉样真菌,经水浸片镜检和组织学观察,结果发现:低倍镜下,鳃丝可见大量鳃霉样真菌菌丝体,菌丝体分布于鳃丝表面及鳃小片内;高倍镜下,可见菌丝体内的孢子。菌丝体主要位于鳃上皮组织及鳃小片的血管中,菌丝体内可见多核原生质体、双核体、单核体以及成熟孢子,有的单核体内有大量嗜酸性颗粒,成熟孢子呈圆形、胞质致密、染色深,位于血管中的孢子为多核、厚壁单体孢子。由于大量菌丝体的存在,鳃组织结构杂乱,鳃小片间大量细胞的增生使相邻的鳃小片粘连在一起,鳃丝呈棒状;鳃组织上皮层大多坏死,有轻微淤血,含有大量成熟孢子的鳃组织坏死严重。     

滤纸壳聚糖膜固定乙酰胆碱酯酶的研究

[目的]探索滤纸壳聚糖膜固定乙酰胆碱酯酶(AChE)的最佳条件。[方法]以滤纸壳聚糖膜为载体,戊二醛为交联剂,牛血清白蛋白(BSA)为保护剂,进行AChE的固定。并对固定化酶的理化性质进行研究。[结果]固定AChE的最佳条件为将50μl 150 U/mlAChE液,50μl 5%(V/V)戊二醛溶液,100μl 1%(W/W)BSA,pH 8.0的0.2 mol/L的PBS缓冲液配制成1 ml酶液,滤纸壳聚糖膜浸于该酶液4℃固定8 h。固定化酶的最适反应温度为37℃,最适pH为8.0,能够重复利用4次以上。[结论]该研究为利用AChE快速检测蔬菜水果中有机磷农药残留提供了理论依据。     

‘火焰’品种彩色马蹄莲组培快繁体系的建立及优化

[目的]建立并优化‘火焰’品种彩色马蹄莲组培快繁体系。[方法]以‘火焰’品种彩色马蹄莲的球茎嫩芽为试验材料,对其组织培养无性繁殖体系进行研究。[结果]最佳诱导培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/LNAA;最佳增殖培养基为MS+2.0 mg/L6-BA+0.2 mg/L NAA;植株再生最适合培养基为1/2MS+0.2 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA;最适生根培养基为1/2MS+0.2 mg/L NAA+2.0 g/L活性炭。[结论]该研究建立了‘火焰’品种彩色马蹄莲的组培快繁体系,为其快速繁殖及产业化生产提供了技术和理论依据。