生殖营养素和中草药复方制剂对经产母猪繁殖性能影响的研究

为研究生殖营养素和中草药复方制剂(商品名"喜满圈")对经产母猪繁殖性能的影响,选择以往繁殖正常的分娩1周的长大二元经产母猪40头,随机等分成对照组和试验组。2组试验母猪在相同条件下进行饲养管理,试验组做添加饲喂"喜满圈"处理,跟踪测定其发情配种及后续繁殖性能。研究结果表明:(1)发情配种方面:试验组与对照组相比,经产母猪断奶后14 d内的发情率和受胎率均提高了10个百分点(PO.05)。(2)后续繁殖性能方面:与对照组相比,试验组母猪平均总产仔数和活产仔数分别提高1.18头和1.23头,仔猪平均初生个体重和初生窝重分别提高10.29%和26.00%,21日龄断奶窝重提高19.78%(P0.05)。(3)母猪及仔猪健康状况:试验组母猪分娩的早产率、滞产率、哺乳期三联症以及哺乳仔猪腹泻发病率分别降低12.5、12.5、25.0和4.71个百分点,断奶母猪和断奶仔猪的体况评分分别提高14.侣%和17.93%(P0.05)。(4)母猪生殖内分泌方面:试验组母猪空怀待配期雌激素的分泌水平提高21.39%(尸O.05),FsH和LH水平有增高之趋势。试验证明:"喜满圈"通过调理经产母猪生殖内分泌机能,能够有效促进断奶母猪的发情和配种受孕,改善经产母猪的健康状况和繁殖性能,并间接提高哺乳仔猪的生长发育性能。     

我国东北地区野生鸟类A亚群禽白血病病毒分子流行病学调查及env基因序列分析

为了解野生鸟类禽白血病病毒(ALV)的感染情况,本研究采集了300份野生鸟类样品,将样品处理后接种DF-1细胞,利用p27抗原ELISA、IFA、PCR等方法检测,其中两份样品为ALV阳性并对其env基因扩增.结果表明,其中gp85编码序列与已发表的A亚群ALV (ALV-A)的同源性最高,为91.1％～100％,而与已发表的鸡的B、C、D、E、J亚群ALV的gp85编码序列的同源性仅在28.0 ％～80.3％之间.遗传进化树分析也表明这两份ALV阳性样品的gp85编码序列属于ALV-A.本实验在我国野生鸟类群体中首次分离和鉴定出ALV-A,表明目前我国野生鸟类已经存在A亚群ALV的感染.     

鸭瘟病毒单抗的制备及胶体金试纸条检测方法的建立

【目的】鸭瘟（DP）是由鸭瘟病毒（DPV）引起的一种急性、败血性传染病,以头颈肿胀、食道黏膜和泄殖腔黏膜出血、黄白色溃疡,头颈部皮下有黄白色胶冻样渗出为特征。该病一旦发生,发病急、死亡快、死亡率高,对养鸭业危害严重。快速诊断是控制鸭瘟的重要措施之一,可以及时确定病原,以便采取有效的防制手段。试验旨在建立鸭瘟病毒（DPV）胶体金快速检测方法。【方法】利用生物学软件Protean分析,选择鸭瘟病毒抗原表位较多的一段序列设计引物,PCR扩增目的基因。连接到载体pMD-18T上,测序正确后再连接到原核表达载体pET-28a上。将获得的重组质粒转化至Rosetta感受态细胞中进行诱导表达。表达的蛋白经纯化后测其浓度并经Western blotting鉴定分析。以表达的DPV-gB蛋白作为抗原,免疫7周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA筛选及亚克隆,获得DPV-gB特异性单克隆抗体。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,以制备的 H6F6单抗作为标记抗体（标记的最适pH为8.0-8.5,最佳标记浓度为15倍原液稀释）,将纯化的A8D7单抗（浓度为2倍原液稀释）和羊抗鼠IgG（浓度为10倍稀释）包被在硝酸纤维素膜（NC）上,分别作为检测线和质控线,经条件优化建立了鸭瘟病毒胶体金试纸条检测方法。【结果】共获得4株能稳定分泌抗DPV-gB蛋白抗体的杂交瘤细胞株,命名为A8D7、E6C3、H11F8、H6F6。间接ELISA检测腹水效价分别为1:10³、1:10³、1:10⁵、1:10³。亚类鉴定结果分别为IgG2b、IgG2a、IgG2b、IgG1,轻链均为kappa链。Western blotting结果显示4株单抗均能与DPV-gB蛋白特异性结合。IFA结果显示制备的4株单抗是针对DPV产生的。建立的胶体金试纸条方法能够特异性地检测鸭瘟病毒,与鸭坦布苏病毒、H9N2亚型禽流感病毒、呼肠孤病毒、减蛋综合征病毒无反应。阳性尿囊液稀释50倍后用该试纸条检测依然为阳性;用不同批次的试纸条重复检测,结果无差异。利用制备的胶体金试纸条和PCR方法对38份临床样品进行检测比较,结果显示两者符合率为91.6 % 。【结论】本研究建立的试纸条检测方法具有良好的特异性、敏感性、重复性和稳定性,可用于DPV的快速检测。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒糖基化囊膜蛋白5原核表达载体的构建及免疫原性分析

为分析猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)糖基化囊膜蛋白5（GP5）的免疫原性,本研究通过提取PRRSV分离株（GenBank登录号：HQ701732.1）RNA和RT-PCR扩增得到开放阅读框5（ORF5）基因。根据ORF5的基因序列,设计2对引物,经PCR扩增分别获得不含信号肽和跨膜功能区的2段基因片段。利用酶切位点,将2段基因连接到原核表达载体pET-28a（+）上,获得重组表达质粒pET28a-GP5。将重组质粒导入BL21（DE3）感受态细胞,经IPTG诱导获得表达。经Western blotting鉴定,重组蛋白可被PRRSV阳性血清识别。将纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,ELISA方法检测,小鼠能产生针对蛋白的血清抗体。因此,该重组PRRSV GP5蛋白具有良好的生物学活性,为进一步研究GP5蛋白的结构和功能奠定基础。     

提高母猪产房管理效益的技术措施

产房是规模化养猪生产中的重要环节,其管理的对象包括分娩泌乳母猪和哺乳仔猪两个群体,产房管理的目的是既要给配种舍提供合格的断奶母猪,又要给保育舍提供合格的断奶仔猪。为此,本文结合养猪生产管理的实际,着重从母猪分娩前的准备工作、分娩接产技术、仔猪的寄养方法、产房母猪与仔猪的饲养管理、母猪和仔猪的断奶模式及技术等方面,探讨提高产房管理效益的技术措施。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒WF-1株的分离鉴定及NSP2和ORF5基因的变异分析

从山东某大型猪场患"猪高热病"的病料中分离到1株病毒,该病毒可在Marc-145细胞上增殖,产生细胞病变。经RT-PCR鉴定证明,该病毒为美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),将其命名为WF-1株。用RT-PCR法分别扩增该分离株的NSP2基因和ORF5基因,并进行核苷酸序列测定和分析。结果表明,PRRSV WF-1株的NSP2发生30个氨基酸的不连续缺失,缺失位置与PRRSV参考变异株JXA1相同;ORF5基因与JXA1、CH-1a、VR2332核苷酸同源性分别为98.0%、94.2%、86.4%,氨基酸同源性分别为97.5%、94.0%、87.5%。基因遗传进化树分析结果显示,WF-1株与2006～2008年期间分离的JXA1、SX-1等高致病性变异株的亲缘关系很近,与1996年分离的中等毒力毒株CH-1a亲缘关系较远,与VR2332、CC-1、MLV等弱毒株或疫苗株处于不同的分支。     

以奶山羊为实验动物模型治疗白色念珠菌性乳腺炎的研究

以健康泌乳奶山羊为实验动物模型,进行了白色念珠菌性乳腺炎的治疗试验。将30头奶山羊分为发病用药组,发病未用药组和健康对照组。给发病用药组和发病未用药组同时乳导管注射1mL的白色念珠菌的菌液,结果在48h后均出现不同程度的炎症反应。并从患羊乳汁中分离到白色念珠菌。给发病用药组用水煎的自拟中药方剂灌胃,5d后发病用药组症状明显减轻或消失,精神状况明显好转。分别于用药前后对30只奶山羊进行颈静脉采血用于血流变学分析和淋巴细胞转化试验,并分别于用药前后对30只奶山羊采集奶样进行乳成分分析,结果发病用药组的各项健康指标均接近或达到正常。但产奶量比健康对照组稍低。而未用药组的各项健康指标仍显著低于正常水平,证明本方剂对白色念珠菌性乳腺炎具有有效的治疗效果,为进一步研究由白色念珠菌引起的奶牛乳腺炎的治疗提供了试验依据。     

基于荧光显色的环介导等温扩增技术(LAMP)检测禽呼肠孤病毒

建立了一种基于荧光显色的禽呼肠孤病毒(ARV)环介导等温扩增(LAMP)检测方法.该检测方法使用针对ARV的p10基因8个区域的6条LAMP引物,能够在等温(63℃)条件下1h内完成反应,具有良好的敏感性和特异性,最低能够检出102个拷贝的病毒,敏感性比普通PCR高100倍,而对其他病毒检测结果为阴性.在荧光显色中分别应用SYBR Green Ⅰ和钙黄绿素作为显色剂,其结果与琼脂糖凝胶电泳一致.在对80份临床样本的检测中,使用LAMP和PCR检测出阳性样本的数量分别为68份和55份.因此,基于荧光显色的LAMP方法可以应用于ARV的快速检测,具有在科研机构、基层实验室特别是检测现场推广和应用的潜力.     

猪蓝耳病与猪瘟并发的诊治

猪蓝耳病 (即猪呼吸与繁殖障碍综合征 ,PRRS)和猪瘟(HC)是当前严重危害我国养猪业的两大传染性疾病。 2 0 0 2年 10月 ,山东菏泽某猪场发生了一起以急性、热性、出血性和呼吸困难、腹泻为主要特征的病例。经剖检、病理组织学检查、血清学和荧光抗体诊断 ,诊断为猪蓝耳病与猪瘟并发。现报告如下。1　发病情况及临床症状该猪场饲养育肥猪 10 0 0余头 ,于 2 0 0 2年 10月部分猪突然发病。病猪全身潮红 ,体温升高 40～ 41 5℃ ,食欲减退 ,有的腹泻 ,呼吸困难。发病率约为 2 0 % ,部分猪只死亡。据畜主说 ,仔猪自市场购进 ,未进行猪瘟疫苗免疫…