海洋细菌QDC01的鉴定及其几丁质酶基因的克隆与分析

海洋微生物是几丁质酶的重要来源。本研究从青岛海域海蜇(Rhopilema esculenta)体中分离到一株产几丁质酶的细菌QDC01,通过形态、培养特征以及16S rDNA序列同源性分析,将该菌株鉴定为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)。根据已报道的嗜水气单胞菌几丁质酶基因相关序列设计引物,克隆了QDC01几丁质酶基因,命名为ahchi(GenBank:JX863407)。应用生物信息学软件对获得的基因序列及编码的蛋白序列进行分析,结果显示,ahchi开放阅读框(ORF)长2 100 bp,无内含子,其编码的蛋白由699个氨基酸组成,分子量为74.875 kD,等电点为5.81。序列比对和同源性分析结果表明,该基因与嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila subsp.hydrophila)ATCC 7966T几丁质酶基因(GenBank登录号:CP000462)的相似性最高,为98%;相应的氨基酸序列同源性为98%。系统进化分析以及Ahchi的保守结构域分析表明,Ahchi属于Ⅰ型几丁质酶,糖苷水解酶19家族。采用限制性内切酶(BamHⅠ和HindⅢ)双酶切法构建了原核表达载体pET-30a(+)-ahchi,并经IPTG诱导在大肠杆菌(Escherichia coli)中成功表达。在基础产酶发酵条件下,菌株QDC01所产粗酶液酶活力达0.21 U/mL,采用文献报道的优化产酶发酵条件,菌株QDC01所产粗酶液酶活力可达0.58 U/mL,是前人报道的产几丁质酶嗜水气单胞菌SWCH-6所产酶活力的1.49倍,同时也高于已报道的气单胞菌(Aeromonas sp.)CJ-5的酶活力(0.41 U/mL),为微生物源几丁质酶开发应用提供了又一优良种质资源。     

河南小麦主栽品种亲缘系数分析

为探讨河南省小麦遗传背景丰富度,追溯了河南省57份小麦主栽品种的系谱信息,计算并分析了品种亲本间及品种组合间的亲缘系数（coefficient of parentage,COP）。结果表明,供试品种中只有7个品种的父母本之间有亲缘关系。1 596对组合中,757对存在亲缘关系,所有组合的COP值变异范围为0.0000~0.7500,亲缘系数总和为65.8393,平均值为0.0413。聚类分析将57份品种分为7个类群。骨干亲本豫麦2号、豫麦18号、豫麦21号、豫麦25号与57份主栽品种的共祖先度分析表明,这几个品种的利用价值很高。由此判断,供试材料的遗传背景丰富,品种组合选育优良品种还有很大潜力。骨干亲本大都是早期培育品种,今后需加强对小麦种质资源的挖掘和利用。     

番茄果实成熟过程中不同部位类胡萝卜素和糖含量变化及其相关性

研究了番茄果实不同部位类胡萝卜素和糖含量的动态变化,并对其相关性进行了分析.结果表明:果实成熟时,果皮中番茄红素含量最高;β-胡萝卜素和叶黄素在胶质胎座中含量最高;3种糖在果皮中含量最高.番茄红素、β-胡萝卜素与果实各部位果糖、葡萄糖呈显著或极显著正相关关系,与果皮、隔壁、胶质胎座中蔗糖含量呈显著或极显著的负相关关系.叶黄素含量与果实各部位中糖相关性很低.     

人尿促性腺激素、雌二醇及表皮生长因子对牛卵母细胞体外成熟质量的影响

试验旨在研究不同激素配比及表皮生长因子(EGF)浓度对牛卵母细胞体外成熟及卵母细胞质量的影响。将随机分组的卵丘-卵母细胞复合体于添加FSH+LH、HMG、FSH+LH+E₂、HMG+E₂ 4种不同激素组合配比的成熟基础液中培养,对比其体外成熟率,比较了EGF对牛卵母细胞体外成熟率和孤雌胚胎体外发育的影响,并采用TUNEL法检测添加不同浓度EGF的牛孤雌激活囊胚细胞凋亡情况。结果表明,添加HMG的成熟试验结果稳定,E₂对牛卵母细胞成熟有一定的促进作用,HMG+E₂联合使用可以得到高效稳定的成熟结果;在此基础上,在成熟液中添加30 ng/mL EGF对牛卵母细胞的成熟质量、胚胎发育及降低胚胎细胞凋亡都有明显的促进作用。因此,在体外成熟培养液中添加0.075 IU/mL HMG、1 μg/mL E₂和30 ng/mL EGF对牛卵母细胞的成熟和质量较为有益。     

黄瓜根系蛋白质组分析的双向电泳技术条件优化

双向电泳(2-DE)是蛋白质组学研究的重要支撑技术之一。为建立适于黄瓜根系蛋白质组分析的双向电泳技术,对黄瓜根系蛋白质样品提取方法、裂解缓冲液配方及SDS-PAGE分离胶浓度等参数进行研究。结果表明:采用TCA/丙酮法提取黄瓜根系中的蛋白质,裂解缓冲液为8mol·L-1尿素、2mol·L-1硫脲、2%IPG Buffer、4%CHAPS、1%TBP、65mmol·L-1DTT、2mmol·L-1EDTA、0.001%溴酚蓝和1%鸡尾酒,SDS-PAGE分离胶浓度为11%时,可获得分离效果较好的双向电泳图谱。该技术条件为适合黄瓜根系蛋白分离的较优双向电泳体系。     

阳桃黄酮提取及纯化工艺研究

黄酮类化合物具有广谱的药理活性和较低毒性,为了开发阳桃(Averrhoa caranbola Linn)中黄酮类化合物的药用价值,本研究以阳桃为材料.采取有机溶剂提取与大孔树脂纯化的方法,对阳桃中的黄酮类化合物的提取与纯化工艺进行了研究.结果表明:以50%乙醇为提取液,料液比为1:10,80℃下提取2.5h,黄酮的提取效果最好,黄酮得率可达2.82%:最佳的纯化工艺为采用AB-8大孑L树脂,样品上样浓度为1.0mg·mL-1,pH值为4.1,上样流速为1.5mL·min-1,洗脱液流速为1.5mL·min-1,洗脱液为50%乙醇,洗脱液量为2.4倍柱体积.     

利用正交设计优化番茄SRAP-PCR反应体系

以番茄耐低温材料抗寒0号和不耐低温番青的F2为材料,利用正交试验设计对SRAP-PCR反应体系中的5因素(模板DNA、引物浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、Taq DNA聚合酶)在4个水平上进行正交优化试验.结果表明:各因素水平变化对反应体系影响的大小依次为:引物＞Taq DNA聚合酶＞dNTPs＞模板DNA＞Mg2+.建立番茄耐低温SRAP-PCR的20 μL最佳反应体系为:模板DNA为15 ng、引物浓度0.75 μmol·L-1、Mg2+浓度2.0 mmol·L-1、dNTPs浓度0.125 mmol·L-1、Taq DNA聚合酶1.0 U.     

番茄果实EST资源SSR信息分析

表达序列标签( Expressed sequence tags,EST)中存在广泛的微卫星或简单重复序列(Simple sequence repeats,SSR),为SSR标记的开发提供了宝贵的资源.以NCBI中与番茄(Solanum lycopersicum)果实性状相关EST序列为材料,对EST序列进行聚类去冗余、...     

黑芥与花椰菜体细胞杂种不同世代遗传变异的SRAP分析

本文利用SRAP标记对黑芥与花椰菜体细胞杂种回交一代到回交三代(BC1、BC2、BC3)及自交二代到自交四代(S2、S3、S4)的遗传变异进行了分析。20个引物组合共产生528条扩增带,其中多态性条带168条,平均每组引物产生8.4条多态性标记。结果表明,杂种后代各世代间都存在着不同程度的遗传变异,但变异的程度较小于预期值。在聚类图中,自交后代和回交后代被明显的区分成为两个类群。自交后代与黑芥的遗传距离较近,回交后代与花椰菜的遗传距离较近;自交后代的不同世代间变异程度要小于回交后代,但各世代间遗传距离的差异性并不显著(P0.05)。     

刺五加种子休眠解除过程中过氧化物酶和酯酶同工酶的变化

剌五加种子用100 mg/L赤霉素(gibberellin,GA)浸泡后进行变温层积(15～18℃14周,2～6℃14周)处理。层积16周后,种子开始萌发,GA处理种子的萌发率明显高于对照,在28周时,GA处理的萌发率达到69.33%,而对照只有50%。在实验期间,聚丙烯凝胶电泳始终能够检测到1条过氧化物酶(peroxidase,POD)和1条酯酶(esterase,EST)同工酶带,GA处理促进这两条同工酶带的表达。与对照相比,GA处理使层积16周出现的POD新条带更强,使EST新条带提前(第12周)出现(对照在第16周)。结果表明,外源GA处理促进层积打破刺五加种子休眠的效应,GA的这种效应与促进POD和EST同工酶的基因表达有关。