水稻黑条矮缩病病毒外壳蛋白基因S10的原核表达、多克隆抗体制备及应用

用RT-PCR方法从感染水稻黑条矮缩病毒(rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)水稻中克隆该病毒的外壳蛋白基因S10,然后将此外壳蛋白基因再亚克隆到原核表达载体PET-32a中构建成重组原核表达载体pET32a-CP。将重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,Ni+ NTA亲和柱纯化获得分子量约为76kD含硫氧还蛋白的融合蛋白。以纯化的重组蛋白为抗原免疫兔子制备RBSDV外壳蛋白的多克隆抗体,并用制备的多克隆抗体建立了可靠、灵敏、特异的检测RBSDV的免疫捕获RT-PCR及Dot-blot ELISA方法,为该水稻病毒病的诊断提供技术支持。     

用Flash8．0制作物体的旋转效果

利用Flash8．0的脚本语句制作了一个旋转塔,并能随鼠标进行移动,制作中重点运用了影片剪辑的制作、获取鼠标位置及设置对象位置等知识。     

NaCl胁迫对草莓不同叶龄叶片光合及生理指标的影响

以红颊草莓为材料,研究了NaCl胁迫处理对不同叶龄叶片光合及生理指标的影响,结果表明:叶绿素初始荧光中潜在荧光Fv/Fo对盐胁迫敏感,功能叶片潜在荧光参数显著降低。在光适应叶绿素荧光参数中,PSⅡ实际光化学效率、光化学猝灭、光化学速率等在新叶和老叶上均表现为明显降低。盐胁迫显著降低了草莓植株功能叶片的净光合速率、气孔导度和蒸腾速率等,但可提高草莓功能叶片的MDA含量以及抗氧化酶SOD、POD的活性。     

农户提供安全农产品影响因素分析——来自江苏葡萄专业农户的实证经验

近年来,国内外食品安全问题事件频发,引发了人们对农产品质量和安全的担忧.通过对江苏省葡萄专业农户的调查,运用二元逻辑回归（Binary Logistic Regression）分析了影响农户提供安全农产品的关键因素.研究结果表明,葡萄生产农户种植成本、家庭葡萄收入比重以及是否参加葡萄专业合作社对于他们提供安全农产品有显著影响,并据此提出相关政策建议.     

《农业环境科学学报》2020年刊出论文简评

本文对《农业环境科学学报》2020年全年发表的文章作了评述,总结分析了与2019年相比各栏目刊登内容上的一些变化,并按当前农业环境领域关注的热点研究对象：重金属、温室气体、面源污染、抗生素和抗生素抗性基因（AGRs）、微塑料等分别进行了其研究内容评述,指出了各方面未来研究中应重点关注的问题及《农业环境科学学报》的未来刊登重点。     

公共产品视角下乡镇政府回应的障碍及对策探析

乡镇政府对农村公共产品回应的过程实际上是从村民公共产品诉求到乡镇政府供给的过程,其现实困境主要表现为对村民需求的有效摄取不足和供给资源的贫乏。分析了造成这两种困境的障碍：农民参与的制度性渠道不完善,自上而下的公共产品供给决策程序,各级政府财权-事权不统一,社会力量引入不足,绩效评估异化;并针对问题所在提出了相应对策。     

森林火灾分区分类施治理论研讨

为了帮助人们正确理解森林足灾分区分类施治的理论，使这一新观念尽快服务于森林防火工作实践，笔者从森林火灾分区分类施治的主体、对象、主要内容、运行机制、手段等方面阐述了该理论的基本内涵。     

探索南京都市区“十二·五”期间发展高效设施农业的途径与对策

针对南京都市区发展高效设施农业过程中的制约因素,坚持以科学发展观为指导,积极拓展解决难题的思路,探索加快发展的举措,拓宽解决问题的办法,不断提升高效设施农业区域化布局、标准化生产、产业化经营、集约化增长水平,推动南京都市区高效设施农业又好又快地发展。一是稳步推进产业化经营,在提升产业层次上求突破;二是适度增加高效设施农业比重,在提高规模效益上求突破;三是充分发挥科技引领作用,在增强农产品竞争力上求突破;四是积极创新体制机制,在增强发展活力上求突破;五是强化统筹谋划,在培养造就新型农民上求突破。     

马尾松实生种子园花量分析

观测了福建省上杭县白沙林场马尾松实生种子园的21个家系花量,分析了家系内与家系间雌雄球花量、各家系雌雄球花量在不同冠层和方位的分布.结果表明:家系间与家系内球花量差异显著.马尾松球花花量在不同冠层的分布呈现显著差异.雌球花主要集中在上、中层,下层极少;雄球花则主要集中在中、下层.同时球花花量的分布在方位上差异不显著.可见,构建马尾松实生种子园过程中,在注重建园材料的生长、材性等重要经济性状的同时,还要注意雌雄球花量选择.此外,选择建园立地环境和加强人工管理也是提高马尾松开花量和保证雌雄球花比例,保证种子园稳产、高产的重要措施.     

灰飞虱原肌球蛋白的基因克隆、原核表达及多克隆抗体制备

【目的】通过筛选灰飞虱cDNA酵母表达文库发现原肌球蛋白（tropomyosin,Tm）能与水稻黑条矮缩病毒（Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV）P10蛋白发生互作。研究旨在克隆灰飞虱原肌球蛋白基因（Tm）,将其在原核细胞中进行表达,纯化Tm蛋白,免疫大白兔并制备其多克隆抗体,为进一步分析Tm在灰飞虱与RBSDV互作过程中的作用提供抗体条件。【方法】根据与之高度同源的Tm基因信息确定灰飞虱Tm的开放阅读框（open reading frame,ORF）。提取灰飞虱总RNA,采用RT-PCR方法从灰飞虱中克隆Tm的ORF,连接至pMD-18T载体后进行测序分析,利用DNAstar软件分析该基因序列及其编码的蛋白特性。将测序验证正确的Tm通过EcoR V和BamH I限制性内切酶酶切连接至原核表达载体pET-32a (+)。重组质粒转化大肠杆菌BL21 (DE3),经终浓度为0.4 mmol?L^-1的IPTG诱导表达4 h后检测Tm融合蛋白的表达情况。离心收集诱导表达的大肠杆菌菌液,进行超声波破碎处理,收集上清及沉淀,采用SDS-PAGE分析融合蛋白的表达。利用Ni-NTA Agarose纯化上清中的可溶性融合蛋白,经100 mmol?L^-1咪唑洗脱和0.01 mol?L^-1 PBST溶液透析后获取纯化的Tm融合蛋白,免疫大白兔,制备多克隆抗血清,并采用间接ELISA法检测抗血清效价。纯化的Tm融合蛋白及灰飞虱总蛋白经SDS-PAGE分离后,用制备的Tm多克隆抗体进行Western blotting检测,分析抗体的特异性。【结果】序列分析显示,灰飞虱Tm的ORF大小为852 bp。采用RT-PCR克隆获得此ORF并进行测序分析,结果表明扩增所得灰飞虱Tm的ORF长为852 bp,编码283个氨基酸,理论分子量大小为32.6 kD。序列比对结果发现所编码蛋白在不同物种间保守。将Tm ORF克隆入pET-32a (+)表达载体后在大肠杆菌BL21 (DE3)中进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析显示,融合蛋白大小约为55 kD,主要以可溶性蛋白形式表达,在包涵体中也有少量表达。纯化上清中的可溶性Tm融合蛋白,免疫大白兔,制备了多克隆抗体。抗体效价测定结果显示该抗体具有较好的灵敏度,效价大于1﹕409 600。采用制备的Tm多克隆抗体检测纯化的Tm融合蛋白及灰飞虱总蛋白,分别检测到1条约55 kD和约37 kD的特异性条带,表明该抗体有较强的特异性。【结论】克隆获得了灰飞虱Tm的ORF,并在大肠杆菌BL21 (DE3)中进行了诱导表达,纯化获得了Tm融合蛋白,制备了高效价的Tm多克隆抗体。