禽流感病毒通用型及H5亚型套式荧光RT-PCR 检测方法研究

将套式PCR与荧光RT-PCR技术相结合,叠加这两种技术在敏感性和特异性方面的优势,建立敏感性高于常规荧光RT-PCR的套式荧光RT-PCR检测方法。从GenBank下载禽流感病毒NP基因和HA基因序列,通过比对选取较为保守的片段,设计AIV通用型及H5亚型套式荧光RT-PCR引物和TaqMan探针;利用体外转录技术制备阳性对照,构建目的片段重组质粒;经反应体系和反应条件的优化,建立套式荧光RT-PCR检测方法。试验结果表明,该方法可特异性地检测禽流感病毒及H5亚型AIV,在30份鱼类养殖水样中检测到19份阳性样品,具有较高的敏感性和良好的特异性;具有高通量、快速的特点,可对大批量样品同时进行检测,试验耗时仅需5 h,是自然环境样品中极微量禽流感病毒检测的好方法。     

外来假马鞭草的特征特性及控制

假马鞭草为马鞭草科假马鞭属多年生草本植物,原产中南美洲,19世纪末出现在中国香港,现在我国福建、广东、广西、云南南部、香港、海南和台湾有分布.文章在调查研究及查阅大量文献的基础上,归纳了外来杂草假马鞭草的形态特征、起源、入侵途径、在我国的分布、经济和生态影响、预防控制和管理措施等.     

基于CLIMEX与GARP的三叶草斑潜蝇在中国的潜在分布预测

运用适生性分析软件CLIMEX与GARP对三叶草斑潜蝇Liriomyza trifolii(Burgess)在我国的潜在分布区进行预测。CLIMEX预测结果显示,全国638个气候站点中有415个站点的生态气候指数Ei﹥0,分布于30个省(或地区),在这些地区三叶草斑潜蝇存在定殖的潜在性。同时,GARP预测认为三叶草斑潜蝇的适生区主要覆盖我国东北地区、华北地区、华中地区和华南地区。将两个软件预测结果进行叠加分析显示预测结果基本吻合。潜在适生区叠加区域位于东北地区、华北地区、华中地区以及华南的部分地区,这些地区属于三叶草斑潜蝇的高度危险区域。     

砂糖橘果实大小及产量规律的研究

根据砂糖橘果实生长发育、产量与品质形成规律,建立砂糖橘的养分综合管理体系,以四会优质砂糖橘试产树(4年生)和盛产树(8年生)为供试对象,研究了整个果实生长发育期果实大小(纵径、横径)变化、单果产量(质量)变化的规律。结果表明,在果实整个生长发育期,4年生树和8年生树单果纵径、横径、质量变化趋势一致,随着生长期的延长不断增大,并且横径逐渐大于纵径,成熟期时单果纵径为3.5～3.7 cm,横径为4.5～4.8 cm,单果质量为42～45 g。在果实生长发育的前2/3时期,果实的纵、横径已经达到收获期的85%、74%,而单果的质量仅为收获期的47%。而后1/3时期,果实要累积50%以上的质量。也就是说,果实生长发育的前2/3时期应通过肥水主要促进果实的膨大生长,而后1/3时期应通过肥水促进光合产物向果实的运输,促进果实累积干物质。     

超强马立克氏病病毒的鉴定及病毒Meq基因序列的比较

对1例感染超强马立克氏病病毒的病例进行确诊,对感染病毒的Meq基因进行比较分析。采用病理解剖、PCR检测、病毒分离、动物试验和Meq基因序列分析,对感染病毒进行研究。病理解剖结果为病死鸡的肝脏、脾脏、腺胃、肌胃、十二指肠表现为肿瘤病变。PCR检测结果为病死鸡的组织病料感染马立克氏病病毒。病毒分离和动物试验结果证明该感染病毒是1株马立克氏病超强毒株,该病毒可以引起免疫过CVI988疫苗的鸡发病。Meq基因序列分析表明该病毒与7株马立克氏病病毒参考毒株的同源性为98.8%~99.6%,该病毒在Meq的第115、119和176位氨基酸突变同国内流行株,该检测病毒在Meq的第217位氨基酸突变同超超强马立克氏病毒株。结果表明,通过病理解剖、PCR检测、基因序列分析、病毒分离和动物试验,确诊病鸡感染超强马立克氏病病毒。     

孔雀石绿等染料物质残留检测过程中实验室污染的来源分析

为了分析孔雀石绿等残留检测过程中实验室污染的来源,本研究应用超高效液相-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定了常用实验室用品中孔雀石绿、无色孔雀石绿、结晶紫、无色结晶紫、亚甲基蓝的含量.纸样品用乙腈直接提取;笔样品采用书写痕迹后再用乙腈提取,UPLC-MS/MS定量测定.结果表明:在纸样品中,除了实验滤纸外,其它纸样品(如A4打印纸、报纸、标签纸等)均含有一定水平的目标物;笔样品中,除了铅笔2H、中性笔135012蓝、中性笔2180蓝色外,其它笔样品(如圆珠笔、记号笔、签字笔、水笔等)含有一定水平的目标物.为了降低实验室目标物污染风险,本文还对样品处理前和处理中的各个环节需要注意的问题做了较为详细的分析.本研究结果将有利于建立有效预防体系从而尽量避免样品在该类物质残留检测中的实验室本底污染和假阳性结果.     

猪圆环病毒Ⅰ型荧光定量PCR检测方法的建立

以定量的10倍系列稀释的质量pMD-ORF2为标准品进行荧光定量PCR扩增,建立了PCV1检测的荧光定量PCR方法.结果表明该方法检测灵敏度可达1.0×104拷贝/μL,线性范围为1010～101;对起始浓度为1.0X107、1.0×106、1.0×106拷贝/μL的标准品的最终实际测得值分别为1.001×107、0.869×106和0.988×105拷贝/μL,变异系数分别为4.758%、1.865%和3.836%,说明此方法具有良好的准确性和重现性.对阳性组织病料的检测表明该方法的检测灵敏度高出常规PCR,与套式PCR(nPCR)具有相近的灵敏度.     

抗锰细菌的分离鉴定及其对生猪养殖粪水中锰的去除效果

为筛选对锰污染环境进行微生物治理的抗锰菌,从湘潭锰矿的矿石和锰尾矿坝采集土样,通过含Mn SO4的固体平板法分离、纯化抗锰细菌,依据形态学特性和16S rDNA序列的系统发育分析对抗锰菌株进行鉴定;抗锰菌株在含0.005、0.010、0.015 mol/L Mn SO4的培养液中生长后,用火焰原子吸收光谱法测定抗锰菌培养液的离心上清液中Mn2+的含量,计算Mn2+的去除率;通过正交试验,以生猪养殖粪污废水原液直接接种抗锰细菌液体菌种,检测抗锰菌的除锰能力。结果表明:1)筛选、分离出1株抗锰菌,将其定名为KM01,经鉴定,该菌为一种沙雷氏菌;2)在含0.005、0.010、0.015 mol/L MnSO4的培养液中,菌株KM01能吸附Mn2+,并以黑褐色沉淀形式沉降析出,28℃下培养液中Mn2+的沉降去除率分别为94.8%、95.8%和89.1%;3)在28℃、p H 7与接种量1%时,生猪养殖废水中Mn2+的沉降去除率分别为94.8%、95.8%和89.1%;3)在28℃、p H 7与接种量1%时,生猪养殖废水中Mn2+的吸附沉降去除率为80.5%,表明抗锰沙雷氏菌KM01在生猪养殖粪污废水的沉降除锰中具有应用潜力。     

我国口岸截获的软体动物及其检疫防控对策

对2011年全国口岸截获的软体动物进行了统计分析,全国口岸共截获软体动物10种,316批次,主要包括非洲大蜗牛(Achatina fulica Bowdich)、同型巴蜗牛(Bradybaena similaris Ferussac)、散大蜗牛(Helix aspersa Müller)、攻击茶蜗牛(Theba impugnata Mousson)、中国琥珀螺(Succinea chinensis Pfeiffer)、野蛞蝓(Agriolimax agrestisL.)6种有害生物,还有4种未鉴定到种,只鉴定到腹足纲、巴蜗牛科等,其中非洲大蜗牛、散大蜗牛是检疫性软体动物,需加强检疫,以防止其传播扩散.     

原子吸收光谱法测定野生樱桃李中微量元素

[目的]建立野生樱桃李中微量元素含量的测定方法.[方法]采用干灰化法对野生樱桃李进行样品前处理,原子吸收光谱法对野生樱桃李中Fe、Zn、Ca、Mg、K、Na、Cu和Mn等8种微量元素进行测定.[结果]用火焰原子吸收光谱法测定野生樱桃李中微量元素的含量,加标回收率为95.0;～102.5;,变异系数≤2.41;,检出限为0.009～0.052 μg/mL.不同类型的野生樱桃李微量元素含量有所不同,NO10的钾、钠、铁的含量最高,NO2的钙、镁的含量最高,NO9的铜、锌含量最高,NO13的锰含量最高.[结论]该方法操作简便、数据准确可靠,精密度高,适合于测定野生樱桃李中微量元素含量,可为进一步开发利用野生樱桃李奠定基础.