孵化期卵黄总IgY动态变化与鸡胚生长发育研究

卵黄总免疫球蛋白Y(IgY)含量可以作为鸡胚健康状态的一种标志。本试验旨在研究孵化期卵黄总IgY动态变化与鸡胚生长发育规律。选取正常孵化的2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、21日胚龄种蛋各20个,对胚蛋、胚体、心脏、肝脏、肌胃、肠道等进行分离和称重,构建鸡胚生长模型;采集卵黄并制备卵黄总IgY样品,使用鸡免疫球蛋白Y的ELISA试剂盒检测卵黄总IgY水平。结果表明:孵化期卵黄总IgY水平为47.928~1813.484μg,鸡胚健康状况良好;2~12日胚龄卵黄总IgY水平缓慢下降,12日胚龄后卵黄总IgY水平急剧下降,14~16日胚龄卵黄总IgY水平下降幅度最大,卵黄IgY动态变化与鸡胚生长发育规律吻合;二次、三次、S三种非线性生长模型都能较好描述白来航鸡胚生长规律,3种曲线的拟合度均在0.99以上,其中S模型的拟合度最高,达到0.998;胚体重、心脏重、肝脏重、肠道重和肌胃重随着胚龄的增大而增加,各器官在胚胎发育中期的相对生长强度大于后期,各个器官在孵化期生长发育存在不平衡性。     

鸡PPARα基因多态性与肉质性状关联的研究

为探究鸡过氧化物酶体激活增殖受体(PPARα)基因与其肉质性状的关系,采用PCR-SSCP对鸡PPARα基因编码区进行了SNPs检测,并通过测序验证.结果显示:PPARα因编码区的630bp处有一个C→T的突变,导致所编码的210位氨基酸由ATC(异亮氨酸)变成了ATT(异亮氨酸),发生同义突变,形成CC,CT和TT三种基因型.最小二乘方差分析显示,PPARα在多不饱和脂肪酸中的十六碳二烯酸含量上,TT型基因与CT型基因差异显著(P＜0.05);在失水率上,CC基因型显著高于TT基因型(P＜0.05);在系水力上,TT和CT基因型均显著高于CC基因型(P＜0.05);在肌内脂肪含量方面,TT型显著高于CC型(P＜0.05).提示PPARα基因的作用可能参与鸡的糖脂代谢和能量代谢,可作为筛选影响鸡肉质性状候选基因的依据.     

三株具有磷霉素抗性禽源大肠杆菌的分离鉴定及其MIC测定

本研究从疑似大肠杆菌感染的病死禽分离3株细菌JE1、IF7和CD11,糖发酵试验、IMViC试验、三糖铁试验等生化试验结果显示符合大肠杆菌生化鉴定指标,判定为大肠杆菌.玻板凝集和试管凝集试验鉴定显示3个分离菌株的血清型分另别为O87、O78、O9.药敏试验结果显示3个分离菌株均具有很强的耐药性,分别对试验的19种药物中的16、10、12种药物具有抵抗力,这3个菌株对兽医临床以前较少使用的磷霉素均表现出了不同程度的耐药性.对磷霉素的MIC测定结果显示,JE1和CD11分别为125 mg/mL和51.2 mg/mL,远高于IF7的1.28 mg/mL.研究结果提示,目前兽医临床已经出现了磷霉素耐药菌株,在药物使用过程中要注意合理用药,防止这种耐药性在细菌中传递.     

鸡Dazl基因的克隆及其亚细胞定位研究

为克隆鸡Dazl(Deleted in azoospermia-like,Dazl)基因CDS序列,通过构建eGFP标记的DAZL真核表达载体,实现该基因产物的亚细胞定位以探究其生物信息学功能.提取1日龄鸡睾丸总RNA,通过巢式PCR方法扩增出Dazl基因的CDS,构建真核表达载体pEGFP-C1-DAZL.采用LipofectaminTMLTX介导重组表达载体pEGFP-C1-DAZL转染CEF细胞,48 h后于荧光倒置显微镜下观察其表达定位,同时利用RT-PCR和Western-blot进一步鉴定eGFP-Dazl和蛋白水平的表达情况.结果表明:克隆出Dazl基因的完整CDS,长度870 bp,共编码289个氨基酸,与公布的鸡Dazl基因(GenBank登陆号:NM_204218)CDS区同源性达99％,编码氨基酸完全一致.酶切鉴定和序列分析均表明真核表达载体pEGFP-C1-DAZL构建成功.转染48 h后,RT-PCR和Western-blot分别检测到949 bp特异条带和59.7 ku的融合蛋白.荧光显微镜观察显示,融合蛋白(eGFP-Dazl)主要分布于细胞核.     

密码子优化的鸡白细胞介素-17在昆虫细胞中的表达研究

为了获得具有良好生物学活性且具有较高表达量的鸡白细胞介素-17(ChIL-17),本研究在前期研究工作基础上,将ChIL-17的编码基因按照真核细胞(昆虫细胞)偏爱的密码子进行优化改造,经全基因合成后插入到转座载体pFastBacTM Ⅰ中,构建重组转移质粒pfast-mod.ChIL-17并转化DH10Bac感受态细胞.通过位点特异性转座将mod.ChIL-17基因整合到穿梭质粒Bacmid中,获得重组穿梭质粒Bacmid-mod.ChIL-17.应用脂质体将重组穿梭质粒转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBac-mod.ChIL-17.重组病毒传代扩增感染Sf9细胞,通过间接免疫荧光检测目的蛋白的表达.结果表明,经过优化的ChIL-17在杆状病毒系统中获得表达.     

不同植物蛋白源日粮对山羊血液氮素代谢的影响

本试验旨在研究不同植物蛋白源日粮对山羊血液氮素代谢的影响。选择3头体况良好安装有颈动脉、门静脉和肠系膜静脉插管的徐淮白山羊,采用3×3拉丁方试验设计,以3种植物蛋白饲料-豆粕(A)、棉粕(B)和玉米干酒糟及其可溶物(C)作为蛋白源。结果表明:不同蛋白源日粮显著影响动脉和门静脉中尿素氮浓度(P<0.05);显著影响肠系膜静脉中总15N、蛋白态15N和氨基酸态15N丰度(P<0.05),且血液中15N丰度均为C组>A组>B组;各处理组间门静脉排流组织(PDV)和肠系膜排流组织(MDV)中总15N和蛋白态15N净流量差异均不显著(P>0.05),但不同蛋白源日粮显著影响PDV和MDV组织中游离氨基酸态15N净流量,且均以C组最高;各处理组中总游离氨基酸(TFAA)和总肽结合氨基酸(TPAA)浓度均存在显著差异(P<0.05)。综合上述,徐淮白山羊以玉米干酒糟及其可溶物作为植物蛋白源比豆粕和棉粕效果更好。     

安徽部分地区冬春季仔猪腹泻的流行病学调查与分析

2012年1-3月间,通过定点监测、问卷调查、实地调查和实验室检测等方式,对安徽省16个市、50个县的757个养猪场(户)的仔猪腹泻发病情况进行了流行病学调查,并采集74份发病或病死仔猪样品肠内容物进行实验室检测.结果表明,安徽省仔猪腹泻主要以流行性腹泻、猪传染性胃肠炎为主,其中猪流行性腹泻病毒阳性率为89.2％,猪传染性胃肠炎病毒样阳性率为10.8％,饲养管理条件差和环境气候多变等是冬春季仔猪腹泻多发的重要诱因.     

鹈鹕性别鉴定的分子标记方法

鹈鹕是一种雌雄同态鸟类,外观上难以区分。从鹈鹕血液中提取基因组DNA,参照近缘鸟类性染色体上的CHD基因和EE0.6序列,筛选了3对引物进行特异性扩增,其中2对引物组合成1个组(A/B)进行双重PCR扩增。结果表明,2组引物在雄性个体中均扩增出1条片段,在雌性中扩增出2条片段;待测群体中雄性个体2只,雌性个体8只。本试验首次确立了利用PCR技术对鹈鹕性别进行鉴定的分子标记方法。     

抗风湿药柳氮磺吡啶对柔嫩艾美耳球虫感染的防治作用

为了探讨常用抗风湿药柳氮磺吡啶对家禽柔嫩艾美耳球虫的防治作用,试验选用1日龄的黄羽肉鸡60只,平均分成6组,即空白组、3个预防给药组(剂量分别为50、75和100 mg/kg)、柳氮磺吡啶治疗组(150mg/kg)和感染不给药组.结果显示:柳氮磺吡啶治疗组的抗球虫指数(ACI)达到188.5,预防组则呈现明显的剂量效应关系,其中高剂量预防组的ACI为179.9,同时该2组的相对增重均略高于空白组,但显著高于感染不给药组(P＜0.05);血液生化指标的测定结果表明,高剂量预防组、治疗组与空白组无明显差异(P＞0.05).这说明柳氮磺吡啶对鸡球虫病有很好的防治作用,且无毒副作用,显示了较好的应用前景.     

镉对体外培养大鼠大脑皮质神经元钙稳态的影响

选用原代培养大鼠大脑皮质神经元为模型,用神经元特异性烯醇化酶(NSE)抗体经免疫组织化学染色技术鉴定神经元.用不同浓度(0、5、10、20 μmol/L)醋酸镉染毒大鼠大脑皮质神经元12h,利用流式细胞仪检测细胞内[Ca2-]i,ATPase酶试剂盒测定Na-K+ ATPase和Ca2-Mg2--ATPase活性的变化,荧光定量PCR法测定钙调蛋白(CaM) mRNA转录水平.结果表明,免疫组化染色证实培养细胞呈现NSE阳性染色,证明是神经元.与对照组相比,各镉染毒组细胞内[Ca2+]i显著或极显著升高(P＜0.05或P＜0.01),Na--K--ATPase和Ca2+-Mg2+-ATPase活性显著或极显著降低(P＜0.05或P＜0.01),20 μmol/L组CaM mRNA转录水平极显著降低(P＜0.01).说明镉可能通过影响CaM的转录水平与维持钙稳态相关的酶(Na+-K-ATPase和Ca2+-Mg2+-ATPase)活性,干扰神经元细胞内钙稳态,进而造成神经元细胞损伤.