鹅p21基因克隆、启动子分析及转录调控研究

【目的】 分析鹅p21基因的结构和启动子活性,探讨p21基因的转录调控机制。【方法】 以泰州鹅为试验对象,通过同源克隆、RACE和生物信息学分析等方法获得鹅p21基因全长序列和5′-侧翼区序列特征;构建6个不同缺失片段的启动子区双荧光素酶报告载体并分析其荧光素酶活性,进而确定p21基因核心启动子区;对核心启动子区转录因子结合位点生肌决定因子(MyoD)(+25~+36 bp)进行定点突变,并构建突变报告基因载体,在C2C12细胞系内初步鉴定鹅p21基因核心转录调控因子。【结果】 鹅p21基因cDNA全长1 943 bp,CDS区大小为453 bp,编码151个氨基酸,蛋白序列包含高度保守的CDI家族结合位点。系统进化树分析表明,鹅p21基因与鸭亲缘关系最近,与鸡和火鸡有较强的进化关系。鹅p21基因5′-侧翼区包含启动子元件,—35~+37 bp是核心启动子区,发挥正向调控作用,结合定点突变技术初步鉴定MyoD是鹅p21基因核心转录调控元件。【结论】 本研究获得了鹅p21基因完整的cDNA序列和启动子区域,MyoD是p21基因核心转录调控因子,为探究p21基因在鹅胚胎期肌肉发育过程中的调控机制提供理论依据。     

转录组测序分析猪胚胎附植的中期和后期卵巢差异表达基因

胚胎附植是影响母猪产仔数的一个重要因素,本研究旨在找到猪胚胎附植的关键调控基因。选用5~7胎次梅山猪母猪4头,在其妊娠第18和24天分别屠宰2头,采集其卵巢组织进行转录组测序(RNA-seq)分析,GO功能富集分析及Pathway分析。结果表明:1)猪胚胎附植中期卵巢(卵_18d)和后期卵巢(卵_24d)两个组织样检测到的表达基因中最多的序列(reads)均为外显子序列;卵_18d测得reads最多的染色体依次为6、14、1和7号,卵_24d依次为1、7、14和M号;卵_24d相较于卵_18d有更多的基因表达,且表达量更高;两个时期卵巢组织中表达量前50位的基因中,线粒体基因占60%以上。2)卵_24d相较于卵_18d,有581个基因上调和103个基因下调,其中二者之间表达差异最大的基因为EN19684,位于线粒体中;表达差异最大的染色体基因为EN11278,位于14号染色体中。3)差异表达基因显著富集于内皮细胞活化等38个生物学过程,宿主细胞质等19个细胞学分区和FAD-AMP裂解酶活性等16个分子功能;差异表达基因在185条生物通路上存在差异,其中前3位极显著差异的生物通路依次为PI3K-Akt信号通路、Hippo信号通路和昼夜周期。综上表明,在卵巢组织表达的基因,重点参与了胚胎附植后期的调控,且高表达量基因多集中在细胞线粒体中,差异表达基因功能以内皮细胞活化为主,生物通路以PI3K-Akt信号通路为主。     

牛轮状病毒性腹泻的研究

从安徽、河南两地黄牛犊腹泻粪样中分离出了３株能在ＭＡ－１０４细胞上稳定繁殖、继代的轮状病毒（标号为ＢＲＶ００７、ＢＲＶ０１４及ＨＮ－７）。中和试验表明,该３株黄牛分离毒与北京奶牛毒ＢＲＶ６５５５及国外参考毒株ＮＣＤＶ之间抗原性无差异,同属轮状病毒血清６型（或牛轮状病毒血清１型）,在亚组抗原特异性上均为第Ⅰ亚组。用ＢＲＶ０１４高代次（５０代以上）细胞培养物（ＴＣＩＤ５０＝１０－６．５）于孕母牛产前３个月和１个月经肌肉免疫注射２次,可明显提高母牛初乳中的轮状病毒抗体,在产后２０ｄ,抗体滴度仍能维持在１∶６４;临床观察,免疫母牛所产犊牛的腹泻发生率较对照组降低８３．８％。     

光照在禽蛋孵化期的应用和研究进展

光照刺激具有改善禽蛋孵化性能的潜能。文章综述了光照对胚胎发育、孵化率、雏禽生长的影响,探讨了光色、光照周期对孵化效果的影响,以及生产中的优化选择,重点论述了光照影响胚胎认知能力、生物钟节律、生长轴基因表达和激素分泌三方面的研究成果,阐明了光照影响孵化的潜在作用机制,为光照在禽蛋孵化中的应用提供理论基础。     

自制微生态制剂在肉鸡中的应用

自制微生态制剂在肉鸡中的应用何家惠侯继波徐筠遐王继春刘冬霞邵春荣张顺珍胡来根（江苏省农业科学院畜牧兽医研究所南京２１００９５以往药物的应用在疫病防治中占有很重要的地位,长期使用的负面效应就是药物残留及病原菌抗药性的加剧。现代养禽业的管理方法阻断了雏鸡...     

脂肪细胞膜蛋白主动免疫对猪生长及胴体品质的影响

提高家畜瘦肉的方法很多,但药物均存在着残留量问题,脂肪细胞膜蛋白免疫作为一种安全、经济的方法来改善家畜胭体品质正受到广泛关注。80年代末,国外学者对其进行了广泛研究,结果表明,猪脂肪细胞膜蛋白主动免疫均能提高猪们作品质,降低脂肪含量,但主动免疫研究报道甚少。本试验在提取猪脂肪细胞膜蛋白的基础上,主动免疫仔猪,观察其对生长及胭体品质的影响Cl材料与方法1．l脂肪细胞膜蛋白的提取选50～80kg二元杂交猪（二花脸x长白猪）屠宰后剥皮,取皮下脂肪,置于对℃生理盐水后旋即转移到实验室,切成小块,在37℃生理盐水中清洗…     

中草药添加剂应用于生长猪的饲喂效果

为研究中草药添加剂对生长猪的饲喂效果,选择胎次、日龄和体重基本相近的杜长大三元杂种仔猪48头,平均体重20 kg左右,按体重和性别平分为4组,分别为自制中药1、2、3组和抗生素对照组,每组3个重复,每个重复4头,进行饲养对比试验,体重约60 kg结束。生长性能结果显示,中药1、2、3组的日增重分别较抗生素组高8.53%(P<0.05)、13.91%(P<0.01)和8.16%(P<0.05),中药1、2、3组的料重比分别较抗生素组低4.0%(P>0.05)、7.1%(P<0.05)和4.3%(P>0.05);试验开始后第30天免疫球蛋白和补体含量测定结果显示,中药1、2、3组和抗生素组IgA、IgG、IgM、C3和C4均较试验前有不同程度的提高,其中中药组提高比较明显,而抗生素组提高较不明显,而中药组中尤其以中药2组的各项指标提高幅度最为明显。综合比较日增重、料重比、免疫球蛋白和补体含量等各项指标,均以中药2组的配方效果最佳。     

鹅生长激素基因的克隆、原核表达及其重组蛋白质的离子交换纯化

为了克隆鹅生长激素基因并表达其重组蛋白质,采集生长期鹅垂体组织,并利用TRIzol快速提取的总RNA为模板,反转录为c DNA。根据鹅生长激素基因编码的成熟肽序列(Gen Bank号:AY149895.2)设计1对引物,分别在上、下游引物的5'端引入Nhe I和Hind III酶切位点。经反转录扩增获得鹅生长激素基因的编码的成熟肽全序列。通过双酶切和连接将鹅生长激素编码区插入原核表达载体pRSET-A的Nhe I和Hind III位点之间,构建重组表达质粒pRSET-g GH并转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)。转化的菌株经IPTG诱导后表达重组鹅生长激素蛋白质,分子量约为2.93×104。经过DEAE-650M弱阴离子交换树脂纯化获得较高纯度的重组鹅生长激素蛋白质。     

鹅催乳素受体基因cDNA5′端序列克隆

为寻找鹅就巢性相关基因,从洪泽湖性成熟公鹅睾丸组织分离并合成鹅cDNA第一链;利用RACE克隆了鹅催乳素受体基因(gPRLR)5′端序列。所克隆的499 bp 5′端序列可划分为348 bp的5′-UTR、151 bp的以ATG作为起始密码子的阅读开放框。与鸡催乳素受体基因(cPRLR)cDNA序列作比对,此499 bp序列可划分为238 bp的第1外显子、69 bp的第2外显子、114 bp的第3外显子及81 bp的部分第4外显子,起始密码子位于第3外显子45 bp处。阅读开放框核苷酸序列与cPRLR cDNA同源部位的阅读开放框同源性达到88%,推导的氨基酸序列同源性达到84%。