藏绵羊KLF7基因表达特征分析及其过表达对前脂肪细胞增殖分化的影响

【目的】分析藏绵羊Krüppel样因子7(Krüppel-like factor 7,KLF7)基因表达特征,研究过表达该基因对前脂肪细胞增殖及分化的影响。【方法】从藏绵羊脂肪组织中分离前脂肪细胞进行培养及成脂诱导,应用实时荧光定量PCR技术检测KLF7基因在藏绵羊7个组织(大脑、皮下脂肪、肾脏、背最长肌、瘤胃、睾丸和回肠)和前脂肪细胞不同分化阶段(第0、2、4和8天)的mRNA相对表达水平;应用RT-PCR方法从藏绵羊脂肪组织中扩增KLF7基因CDS区序列,并将其连接到pcDNA3.1(+)真核表达载体获得pcDNA3.1-KLF7过表达质粒,转染前脂肪细胞;应用实时荧光定量PCR方法检测脂肪细胞增殖及分化标志基因mRNA表达水平;采用EdU和CCK-8方法分别检测过表达KLF7基因对EdU阳性细胞数和细胞活力的影响;采用油红O染色检测过表达KLF7基因后脂肪细胞脂滴生成量。【结果】KLF7基因在藏绵羊7个组织中均有表达,其中在大脑中的表达量最高,其次为皮下脂肪和肾脏,均显著高于其他组织(P<0.05);诱导分化第2、4和8天脂肪细胞mRNA表达量均显著高于分化前(P＜0.05),且分化第2天表达量最高;pcDNA3.1-KLF7过表达质粒转染前脂肪细胞2 d后显著或极显著抑制增殖标志基因CDK4、CyclinB1和CyclinD1的表达水平(P＜0.05;P＜0.01),极显著降低细胞活力及EdU阳性细胞数量(P＜0.01);pcDNA3.1-KLF7过表达质粒转染前脂肪细胞,诱导分化8 d后,脂肪细胞分化标志基因PPARγ、Glut4和ELOVL6的mRNA相对表达水平显著或极显著下调(P＜0.05;P＜0.01),且脂质沉积极显著减少(P＜0.01),表明过表达KLF7基因可抑制藏绵羊前脂肪细胞增殖及分化。【结论】KLF7基因在藏绵羊多个组织中广泛表达,且大脑、皮下脂肪、肾脏中表达量较高;诱导分化后脂肪细胞表达量显著高于分化前,且分化第2天表达量最高;过表达KLF7基因可抑制藏绵羊前脂肪细胞的增殖及分化。试验结果为阐明藏绵羊脂肪沉积的分子调控机制提供了基础数据。     

柔嫩艾美耳球虫拉沙里菌素抗性虫株的实验室诱导

采用实验室建立抗性虫株的方法,用４０、６０、７５、１０５、１２５、１３５μｇ／ｇ梯度的拉沙里菌素作用于柔嫩艾美耳球虫盐霉素敏感株和盐霉素抗性株,经过１５次继代,诱导产生了对１３５μｇ／ｇ拉沙里菌素的抗药性虫株。在同一诱导条件下,盐霉素敏感株和盐霉素抗性株对拉沙里菌素产生抗药性的时值和强度没有差异。     

我国马铃薯帚顶病毒的分子检测

<正>马铃薯是我国第四大粮食作物,在生长过程中易受多种病毒侵染,其中马铃薯帚顶病毒(potato mop-top virus,PMTV)致病性强、危害严重,被我国列入进境植物检疫禁止进境物名录。该病毒于1966年在爱尔兰和北苏格兰被首次发现(CalvertHarriso,1966),随后扩散蔓延到世界诸多马铃薯主产区。感染该病毒的植株主要表现为帚顶,上部叶片出现褪绿V型环纹,基部叶片出现不规则黄色斑块、环纹和     

生物柴油Fe_2(SO_4)_3—Al_2O_3固体酸催化剂的制备

为了解决硫酸铁催化制备生物柴油过程中存在的回收难和部分溶于水等问题,制备了Fe2(SO4)3—Al2O3负载型固体酸催化剂。考察了负载量、焙烤温度、焙烤时间对催化剂活性的影响。结果表明,负载量20%的催化剂在300℃下,焙烤超过4h,活性最高,延长焙烤时间对催化剂活性没有显著影响。对不同焙烤温度下的催化剂进行了扫描电镜、能谱和X射线衍射分析,结果显示300℃下,焙烤的催化剂具有最小的晶粒;超过300℃,催化剂上的Fe2(SO4)3组分开始分解。     

多重PCR诊断猪细小病毒、伪狂犬病毒和圆环病毒Ⅱ型方法的建立和应用

根据GenBank中已发表的猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)和猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)等3种病毒基因序列,对各病毒基因区进行同源性分析,确定PPV VP2、PRV gB、PCV2 ORF1基因的保守区为各病毒的诊断靶序列.在建立各病毒单重PCR技术的基础上,优化多重PCR反应条件,建立了三种病毒的多重PCR技术.用78份临床病料对本研究多重PCR技术和单重PCR技术进行对比验证,结果显示,总符合率为97.4%以上.该方法特异性强、敏感性高,为PPV、PRV和PCV2临床诊断和流行病学调查等研究提供了新手段.     

利用游离小孢子培养育成早熟大白菜新品种‘豫新5号’

 ‘豫新5号’是采用游离小孢子培养双单倍体育种技术选育的一代杂种，该品种生育期60 d，单球质量23 kg，球形指数1.35，高抗病毒病、霜霉病和软腐病，净菜产量56.7 t·hm^-2，可兼作早熟、晚熟栽培。     

氟唑磺隆原药高效液相色谱分析方法研究

本文采用高效液相色谱法,以乙腈 水为流动相,使用以ZORBAX 80A Extend-C18、5μm为填料的不锈钢柱和二极管阵列检测器,在240nm波长下对氟唑磺隆原药进行分离和定量分析.结果表明氟唑磺隆的线性相关系数为1.0000;标准偏差为0.37;变异系数为0.41%;平均回收率为99.8%.     

乙烯利对干旱胁迫下草地早熟禾生理指标的影响

以草地早熟禾(Poa pratensis)‘Nuglade'品种为试验材料,研究叶片喷施乙烯利对草地早熟禾在水分充足、干旱及复水恢复3种处理下叶片电解质渗透率、叶绿素、可溶性蛋白、丙二醛(MDA)等生理指标的影响。结果表明,乙烯利与对照组(CK)相比,乙烯利在干旱胁迫下保持更高的叶片相对含水量23.5%(对照为11.5%)和更低的电解质渗透率68.1%(对照为90.7%)及MDA含量53.90μmol·g~(-1)(对照检查131.62μmol·g~(-1)),且复水后的电解质渗透率恢复程度更好;此外乙烯利处理提高了复水恢复过程草地早熟禾的可溶性蛋白含量;说明,叶片喷施乙烯利能够缓解草地早熟禾的干旱胁迫损伤,并促进干旱后的复水恢复。     

Molecular cloning and expression of kidney‐type glutaminase from common carp (Cyprinus carpio) and its up‐regulation by glutamine in primary culture enterocyte

Glutaminase (GLS) is the key enzyme of glutamine (Gln) metabolism and utilization. In this study, a cDNA encoding GLS protein was identified from common carp Cyprinus carpio intestine. The open reading frame of GLS cDNA encodes a polypeptide of 595 amino acids, which shows a high similarity with its zebrafish Danio rerio counterpart. Bioinformatic analysis showed the protein belongs to kidney‐type GLS. The putative protein has glutaminase domain and ankyrin repeats domain, which are highly conserved among vertebrate orthologues. Real‐time quantitative PCR analysis revealed that the abundance of GLS mRNA was the highest in the white muscle, followed by the brain, eyeball and pituitary. Glutaminase was ubiquitously expressed in all intestinal segments of common carp. The activity of GLS did not distribute uniformly along the entire length of the intestine. In primary culture enterocyte, and the expression of GLS mRNA is up‐regulated quickly and effectively by Gln.     

柞蚕肠液理化性质与饲料效率的相关性研究

对柞蚕肠液的理化性质与饲料效率的相关性进行研究的结果表明 :柞蚕肠液对促进蚕体抗病与消化吸收功能有着重要作用 ,平均每头蚕有肠液 1 76mL ,品种间开差为 0 78mL ,相对开差 5 7 80 % ,肠液量越多 ,饲料效率越高 ;柞蚕不同品种肠液pH平均值未发现明显差异 ,但强健好养饲料效率高的品种个体间开差小 ;柞蚕肠液缓冲力除与品种强健性有关外 ,还与品种的饲料效率呈正相关 ,在强健丰产与高饲料效率品种中 ,肠液恢复pH原值所需时间越短 ,饲料效率越高 ,电刺法取出肠液后 ,肠液恢复缓冲力所需时间是恢复其pH原值时间的 1 8倍多 ,同恢复肠液pH原值所需时间长短与品种强健性和饲料效率的关系完全一致。