水牛徒手克隆胚胎培养及冷冻条件的优化

本试验利用微滴、微穴和平板培养系统对徒手克隆(hand-made clone,HMC)重组胚进行体外培养;采用了40% EG(ethylene glycol,EG)、25% EG＋25% DMSO(dimethylsulphoxide,DMSO) 和20% EG＋20% DMSO＋0.5 mol/L蔗糖作为玻璃化冷冻液对HMC囊胚进行了超低温冷冻;并且比较了HMC与传统核移植的胚胎生产效率及囊胚冷冻存活率。结果表明,微穴系统的卵裂率要显著高于平板系统(P<0.05),极显著高于微滴系统(P<0.01);且微穴系统的囊胚率(40.0%)极显著高于平板(19.8%)和微滴系统(8.3%)(P<0.01)。采用20% EG＋20% DMSO＋0.5 mol/L蔗糖作为冷冻保护剂时HMC囊胚存活率极显著高于40% EG(P<0.01);HMC重组胚的融合率和囊胚率均高于传统核移植法(P<0.05;P<0.01),而HMC囊胚的冷冻存活率与传统核移植生产的囊胚没有显著差异。以上结果说明水牛HMC可以替代传统核移植法生产克隆胚胎,微穴体系最适合水牛HMC胚胎的体外培养,且采用20% EG＋20% DMSO＋0.5 mol/L蔗糖对HMC囊胚进行玻璃化冷冻可以取得良好的冷冻效果。     

免疫调控技术在畜禽采食量调控中的应用

采食量是限制动物生产性能及遗传潜力发挥的最重要因素之一,但采食量的调节是一个涉及中枢和外周食欲调节网络中诸多环节因素的复杂生理过程,其中负反馈饱食因子在确保机体摄食及代谢平衡方面发挥着重要的作用。免疫调控技术是一种新兴的生物调控技术,利用抗原抗体免疫中和原理削弱或消除抑食信号的作用,同时通过这种免疫介导手段又不会产生像脂多糖或其他病原因素导致的免疫应激,从而实现对畜禽采食量的有效调控。本文主要综述了免疫调控技术在畜禽采食量方面的应用,以期为免疫调控技术在畜禽采食量上的进一步研究提供参考。     

基于路网的石羊河流域乡镇空间测度

道路交通的通达性是城市空间相互作用和经济联系的重要前提。本研究利用ArcGIS的网络分析和空间分析功能在对石羊河流域公路交通网络通达性定量评价的基础上,采用引力、潜力和场强模型对区域内7个县（区）的空间相互作用程度、城市潜力值和城市的辐射场强进行定量测度和比较分析。研究发现,凉州区对区域内城市作用力最强,城市对外相互作用潜力大,辐射带动作用强度高。区域整体上形成了以金川区、凉州区为中心的辐射中心,其对区域内其他县、区的辐射强度随交通距离增加和道路通达性降低而不断减小。     

环境内分泌干扰物对睾丸间质细胞功能的影响

近年来,环境内分泌干扰物(environmental endocrine disrupting chemicals,EDCs)对雄性动物的生殖毒性引起了广泛的关注。大量资料显示EDCs可引起雄性生殖发育障碍,如隐睾、尿道下裂、睾丸癌、精液品质不良等。作者就几种典型的EDCs对睾丸间质细胞分泌睾酮的影响机制作一综述。     

生物活性肽的研究进展

生物活性肽属于多功能因子。随着各种生物活性的不断发现,对其生理功能的不断探究,生物活性肽越来越受到人们的关注。作者对不同来源的生物活性肽,依其不同的生理功能进行了综述,以期为生物活性肽的研发提供参考。     

5株H9N2亚型禽流感病毒血凝素蛋白分子特征分析和豚鼠间传播能力的评估

为研究H9N2亚型禽流感病毒(AIV)在哺乳动物间的传播能力,本研究以豚鼠为模型评价了5株H9N2亚型AIV在豚鼠体内的复制能力和水平传播能力,并分析了5株病毒血凝素(HA)蛋白的分子特征。结果表明,5株病毒均属于CK/Beijing谱系,其中2株病毒的HA具有人样受体特征(Lys226),2株病毒具有禽样受体特征(Gln226),而A/Chicken/JN/Li-2/2010(H9N2)株在该位点的氨基酸残基为苯丙氨酸(Phe226)。裂解位点分析表明,5株病毒均具有低致病性AIV特征。个别病毒的潜在糖基化位点存在增加或缺失现象。感染试验表明,5株病毒均能够在豚鼠呼吸道复制。并且在鼻甲骨处复制稳定,平均病毒滴度为2.01 Log EID50/mL～4.5 Log EID50/mL。传播试验表明,所有病毒株的人工接种豚鼠的鼻洗液中均能够检测到病毒,最长排毒期为接毒后第8 d,而接触组豚鼠鼻洗液中未检测到病毒。本研究表明,5株H9N2亚型AIV均属于CK/Beijing谱系,部分病毒株的HA蛋白已具备人样受体结合特征,并且关键氨基酸位点(226位)处出现新的突变。5株病毒均能够在豚鼠呼吸道复制并通过上呼吸道排毒,但不能在豚鼠间同群传播。     

天山北坡草地遥感分类及其精度分析

基于遥感资料的植被类型划分能快速获得大尺度的植被覆盖变化数据。采用遥感和GIS技术,利用天山北坡典型草地2008年Landsat 5 TM遥感影像和1999年Landsat 7 ETM+全色波段数据,在对遥感影像预处理的基础上,进行了数据融合处理。根据融合影像的纹理特征进行监督分类,将研究区域的植被初步分为8种主要覆盖类型,在监督分类的基础上借助专家知识系统构建决策树,进一步将草地分为5类,包括平原荒漠、平原沙漠、低山荒漠、温性草甸和高寒草甸,最后对分类结果进行精度评价,总精度在95%以上,总Kappa系数为0.939 6,间隔9年的影像融合和决策树分类方法在研究区植被分类中具有较高的可行性。     

饲草玉米不同生育期的产量、品质和青贮利用研究

对墨西哥大刍草、玉草3号和玉草6号3种不同类型饲草玉米在孕穗期、抽雄期和吐丝期的产量、青贮品质及其营养价值进行了分析。结果表明:品种和生育期对鲜、干草产量有显著影响,而二者之间的交互作用对鲜、干草产量影响不显著;3个品种鲜、干草产量均在吐丝期最高,其中,玉草6号鲜、干草产量极显著高于玉草3号和墨西哥大刍草。从抽雄期及以后,所有饲草玉米干物质(DM)含量均达20%以上,符合青贮对水分的要求。粗蛋白(CP)含量从孕穗期到吐丝期逐渐降低,变幅为8.19%DM~12.80%DM;各时期CP含量均以玉草6号最高,玉草3号和墨西哥大刍草CP含量差异较小。可溶性糖(WSC)含量在孕穗期最高,纤维含量随生育期延长均呈上升趋势。青贮发酵品质在不同生育期差异显著,孕穗期pH值为3.69,乳酸(LA)含量为7.00%DM,发酵品质最优。品种主效应分析表明,玉草6号发酵品质最好,玉草3号和墨西哥大刍草差异不显著。综合分析品种和生育期对青贮发酵品质和营养成分的影响,玉草6号在孕穗期青贮,相对饲用价值达103.28,发酵品质和营养价值最好;玉草3号和墨西哥大刍草在抽雄期青贮发酵品质和营养价值最佳。     

对碘量法测定日粮、肠道食糜及排泄物中半胱胺盐酸盐含量的改进研究

试验旨在探讨碘量法测定日粮、食糜及排泄物中半胱胺盐酸盐(cysteamine hydrochloride,CSH)含量的改进方法,为评估包膜CSH在动物胃肠道内释放过程中CSH的定量提供参考。试验分3部分:试验一:检验包膜CSH的上样量对碘标准液消耗量的线性关系,以确定碘量法检验包膜产品的准确度,采用单因素完全随机设计,CSH的上样量设6个水平,分别为28.28、113.12、226.24、339.36、452.48和565.61mg;试验二:考察H2SO4预处理对消除日粮、食糜和排泄物对碘量法测定CSH含量的影响,采用单因素完全随机设计,日粮、十二指肠食糜、空肠食糜、回肠食糜及排泄物样品中CSH(试剂级)的含量均设3个水平,即30、100和300mg/2g,形成15个含有CSH的样品,H2SO4溶液(6mol/L)设3个水平,即0.1、0.5和1mL,每个处理设3个重复;试验三:考察传统碘量法与试验二建立的改进方法在测定日粮、食糜及排泄物中包膜CSH含量的差异,采用两样本试验设计,日粮、十二指肠食糜、空肠食糜、回肠食糜及排泄物中CSH的含量均设28.73、84.84、141.47和200.56mg/2g。结果表明:①CSH的上样量对碘标准液消耗量及CSH测定值均呈显著的线性关系(P<0.01,R2=0.9999)。②在含有CSH的日粮中,H2SO4溶液处理后由碘量法测定的CSH质量对实际质量的回归均符合Y=X(P>0.05)。在含有CSH的十二指肠食糜和回肠食糜中,所有H2SO4溶液处理下CSH质量对实际质量的回归均不符合Y=X(P<0.05),但0.5和1.0mL比0.1mL H2SO4溶液处理使测定值更接近实际值。在含有CSH的空肠食糜及排泄物中,0.5和1.0mL H2SO4溶液处理使测定值对实际值的回归符合Y=X(P>0.05),而0.1mL H2SO4溶液处理下CSH测定值显著低于实际值(P<0.01)。③在含有CSH的日粮、十二指肠食糜、空肠食糜、回肠食糜及排泄物样品中,常规方法测定的CSH对实际质量均偏离Y=X(P<0.05),而1.0mL H2SO4溶液处理后的测值对实际质量均符合Y=X(P>0.05)。由此可见,采用适量H2SO4溶液进行处理后,可以排除日粮、食糜及排泄物对CSH测定的干扰。     

多杀性巴氏杆菌中recN基因的克隆、原核表达及生物信息学分析

试验旨在对多杀性巴氏杆菌recN基因进行克隆和原核表达,并对其表达蛋白进行生物信息学分析。参照GenBank中recN基因序列（登录号：CP003313.1）设计1对引物,通过PCR扩增获得目的基因片段,构建pET-28a（+）-recN重组质粒并转化E.coliDH5α感受态细胞,提取质粒进行酶切鉴定,将鉴定正确的重组质粒转化E.coliBL21（DE3）感受态细胞,经IPTG诱导表达,对融合蛋白进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定。结果表明,试验成功克隆了大小约为1 677 bp的recN基因序列,通过诱导表达的His-Tag融合蛋白大小约为66.94 ku,主要以包涵体形式存在。经生物信息学分析,recN蛋白的分子式为C₂₇₃₅H₄₄₂₈N₇₈₆O₈₅₅S₁₆,消光系数为24 785,不稳定系数为43.99,属于不稳定蛋白;理论等电点（pI）为5.62,为酸性蛋白;总平均亲水性为-0.316,与试验表达的包涵体蛋白性质相同,即同为疏水性蛋白;recN蛋白在哺乳动物网织红细胞的半衰期为30 h,在酵母（体内）中的半衰期>20 h,在大肠杆菌（体内）中的半衰期>10 h;二级结构主要以α-螺旋（64.87%）及无规则卷曲（21.00%）为主;经疏水性分析,预测该蛋白有3个高疏水性区域和9个高亲水性区域。本试验结果为进一步探究多杀性巴氏杆菌recN基因的功能提供了参考依据。