膀胱无细胞基质在青紫蓝兔组织工程膀胱替代手术中的应用研究

研究膀胱无细胞基质（bladder acellular matrix graft,BAMG)在兔组织工程膀胱中的应用。按文献改进方法制作BAMG，从兔膀胱中分离出上皮细胞和平滑肌细胞，体外培养约4周，与无细胞基质材料复合成组织工程膀胱，对同一兔实施膀胱次全切术，用组织工程膀胱替代。术后进行膀胱造影，组织切片检查，提示组织工程膀胱功能良好。本方法获取的BAMG可用于兔的组织工程膀胱替代手术。     

弓形虫MIC3基因真核表达质粒的构建及在 IBRS-2细胞内的表达

采用PCR技术从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码MIC3的基因,克隆入pMD18-T载体,转化至E.coliDH5α感受态细胞,经抗性平板筛选、小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序鉴定后,亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1。然后筛选含有目的基因的重组质粒,并转染IBRS-2细胞,在G418压力下进行筛选,利用SDS-PAGE、Western blot和ELISA检测表达情况。结果显示,扩增的MIC3基因与GenBank上相应基因序列(AJ132530)的一致性达99.9%,构建的真核表达质粒pcMIC3能在转染的IBRS-2细胞中表达分子量约为39.2ku的MIC3,且表达的蛋白质具有良好的免疫活性,为进一步研究该质粒的动物免疫试验奠定了基础。     

重庆地区牛附红细胞体分子流行病学调查

根据重庆地区不同的地理条件以及不同的养殖模式,采用16S rRNA-PCR检测方法对重庆市进行了牛附红细胞体的分子流行病学调查。结果显示:重庆地区存在牛附红细胞体感染,平均感染率为11%。其中规模化养殖平均感染率(6%)低于散养(16.7%),丘陵地区平均感染率(2%)低于高山地区(25.6%)。     

蓝舌病16型病毒核心样颗粒的获取与鉴定

为了制备一种新型基因工程疫苗BTV-16 VLP疫苗,将蓝舌病病毒16型VP3与VP7基因片段插入杆状病毒双表达载体pFastBac Dual质粒中,通过转染Sf9细胞,同时表达VP3与VP7蛋白。经负染后电镜观察到有与蓝舌病病毒形态相似的核心样颗粒,表明蓝舌病VP3与VP7蛋白能自主组装形成核心样颗粒,并通过Western Blot试验验证该核心样颗粒与蓝舌病病毒具有相同的抗原性。因此本研究成功构建出16型蓝舌病病毒核心样颗粒,为病毒样颗粒装配打下了基础,为制备16血清型BTV VLP疫苗做好前期准备。     

牛疙瘩皮肤病病毒ORF132基因的克隆及其原核表达

为原核表达牛疙瘩皮肤病病毒(LDSV) ORF132并对该基因进行生物信息学分析,本研究采用PCR扩增LSDV的ORF132基因,将其亚克隆至pGEX-6p-1载体中,构建重组质粒pGEX-LSDV-ORF132.生物信息学分析表明,LSDV的ORF132与Neethling vaccine LW1959株LW132、NI-2490株LSDV132和NW-LW株LD132的相应推导氨基酸同源性分别为100％、100％和94.4％,与山羊痘病毒、绵羊痘病毒相应推导氨基酸的同源性为20.7 ％～36％.SDS-PAGE和western blot分析表明,pGEX-LSDV-ORF 132在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导主要以包涵体形式存在,其重组蛋白大小约为48.95ku,并且与特异性抗体具有抗原反应活性.     

基于激光诱导击穿光谱的地下水中Fe和Mn的检测

采用激光诱导击穿光谱(LIBS)技术并结合在锌基板上液固转换的样品处理方法,对标准水溶液样品中Fe、Mn进行检测,并根据标准曲线法建立Fe、Mn的定量模型;再利用所建立的LIBS定量模型,对洞庭湖区地下水实际水样中Fe、Mn含量进行检测,并与电感耦合等离子体质谱法(ICP–MS)的检测结果进行比较。结果表明：得到Fe、Mn的LIBS定标曲线的决定系数均大于0.98,相对标准偏差均为4.3%,留一交叉验证均方根误差分别为0.024、0.007 mg/L,Fe、Mn的检出限分别为0.028、0.008 mg/L;采用LIBS对洞庭湖地下水实际水样中Fe、Mn含量检测的结果与ICP–MS的检测结果基本一致,平均相对误差小于10%。     

一步法实时定量RT-PCR检测小反刍兽疫病毒方法的建立

建立了检测小反刍兽疫病毒的快速、特异的基于Taqman的一步法实时定量RT-PCR方法。通过对GenBank已公布的小反刍兽疫病毒N基因序列进行序列比较分析,设计了一对特异性引物和一条Taqman探针。利用这对引物和探针对来自不同疫源地的小反刍兽疫病毒RNA样本进行检测,都获得了特异性扩增,但是,不与牛瘟病毒、海豚麻疹病毒等其他种的麻疹病毒属病毒发生交叉反应。本方法具有高度灵敏性,最低可检测到810拷贝的RNA模板。在模板浓度为8.1×102到8.1×108拷贝范围内,都呈现良好的线性关系,而且无论是组内和或组间重复的变异系数都很低。     

杂交野猪适宜日粮磷水平与钙磷比例的研究

选用纯种野公猪与杜洛克母猪的杂交后代含50%野猪血缘的42日龄杂交野猪36头,随机分成9组,试验为双因子3水平(3×3)析因安排分组,完全随机区组设计,每个因子3个水平,共9个处理。结果显示,不同磷水平与钙磷比例对各处理组的平均日耗料量、平均日增重、料重比差异均不显著(P>0.05)。不同钙磷比例水平下对血清钙的影响差异极显著(P<0.01),日粮磷和钙磷比例互作效应对血清钙影响差异极显著(P<0.01)。不同日粮钙磷比例对血清磷水平差异显著(P<0.05),日粮磷和钙磷比例互作效应对血清磷影响显著(P<0.05);0.4%的日粮磷水平与0.6%的磷水平对血清AKP活性影响差异极显著(P<0.01)。     

味精蛋白对鸡代谢能和养分代谢率影响的研究

试验选用24只2kg左右的蛋公鸡,随机分为4个处理,每个处理6只鸡,前3个处理分别给每只鸡强饲占体重3%的待测原料,第4个处理作为内源对照组,测定内源排泄量,以评定味精蛋白对鸡代谢能和养分代谢率的影响。结果表明:味精蛋白的总能比豆粕高3.87%,而比玉米蛋白粉低15.56%;粗蛋白含量达到71.45%,分别比豆粕和玉米蛋白粉高64.03%和22.32%。味精蛋白的表观代谢能、真代谢能、粗蛋白表观消化率和真消化率、总氨基酸表观消化率和真消化率均极显著低于豆粕和玉米蛋白粉(P<0.01)。而干物质表观消化率和真消化率三者间无显著差异(P>0.05)。在已测定的17种氨基酸中,除甘氨酸外,味精蛋白粉其他氨基酸表观消化率和真消化率均极显著低于豆粕和玉米蛋白粉(P<0.01)。这表明味精蛋白的养分利用率低于豆粕和玉米蛋白粉。