抗菌肽Thanatin转基因小鼠建立的初步研究

人工合成抗菌肽Thanatin基因的3条片段,利用重叠延伸PCR扩增技术得到完整的Thanatin基因,通过分子克隆方法构建出pIRES2-EGFP-Thanatin重组表达载体。然后与脂质体混合,采用睾丸打点注射将新构建的抗菌肽基因注入小鼠睾丸内,共注射公鼠5只。6周后与雌鼠交配,对新生仔鼠进行断尾,提取尾尖基因组DNA,利用PCR和Southern印迹方法对其进行检测。结果显示,得到的52只新生仔鼠中PCR检测阳性率为38.46%,Southern印迹检测阳性率为30.77%;在活体荧光成像系统下转基因小鼠呈现绿色荧光表达。通过睾丸注射法使Thanatin基因在小鼠的基因组中得到整合,为进一步研究抗菌肽的作用机理、培育抗病动物品种以及通过建立转基因动物生物反应器进行抗菌肽的大量生产奠定了基础。     

鸟氨酸脱羧酶抗酶1基因的结构和功能

鸟氨酸脱羧酶抗酶1(OAZ1)基因可通过特殊的+1移码机制翻译全长的功能蛋白。研究发现,OAZ1能与鸟氨酸脱羧酶(ODC)结合并降解ODC,负调控细胞内多胺的水平;OAZ1还能降解Cyclin D1、Cyclin E1和Smad1周期蛋白,阻滞细胞周期;此外,近年来研究表明,OAZ1还具有抗肿瘤效应和调控动物繁殖的功能。抗酶抑制因子能竞争性结合ODC-OAZ1复合体中的OAZ1,从而阻止ODC降解;天门冬酰胺也能通过抑制OAZ1的翻译来调节ODC的活性。本文就OAZ1基因结构和功能的研究现状作一综述。     

重组质粒pACYC184-hok/sok的构建及稳定性研究

以低拷贝质粒pACYC184为载体,将hok/sok基因插入到载体BamH Ⅰ位点,构建重组质粒pACYC184-hok/sok稳定系统,同时构建hok/sok基因缺失突变重组质粒pACYC184-hok/sok(M).通过对构建的重组菌进行连续传代和对不同代次的重组质粒进行SphⅠ酶切,分析hok/sok基因的引入对宿主细胞生长的影响.结果表明,重组质粒pACYC184-hok/sok在无抗生素筛选压力下连续传代,传至第135代时质粒稳定率仍是100%,且传代前后的质粒SphⅠ酶切图谱没有发生变化,DNA序列测定表明,插入的hok/sok基因没有发生任何突变.突变重组质粒pACYC184-hok/sok(M)传代前后的质粒SphⅠ酶切结果虽没有发生变化,但其相应的重组菌传至第15代,质粒几乎完全丢失.生长曲线的测定结果表明,与舍pACYC184重组菌生长曲线相似,pACYC184-hok/sok重组菌生长较快,而pACYC184-hok/sok(M)重组菌生长缓慢.以上结果表明,含hok/sok稳定系统,其稳定性明显高于无hok/sok稳定系统的质粒pACYC184以及突变质粒pACYC084-hok/sok(M).重组质粒pAqCYC184-hok/sok具有良好的结构稳定性和分离稳定性.     

玛曲高寒湿地植物群落特征及多样性分析

采用样带法研究了玛曲高寒湿地的植物群落特征及生物多样性,结果表明,出现在样地内的主要植物有24种,隶属于14科22属,优势种为高山嵩草（Kobresia pygmaea）,次优势种为珠牙蓼（Polygonum viviparnm）、鹅绒委陵菜（Potentilla anserina）、矮藨草（Scirpus triquete）等。群落生活型组成中地面芽植物占优势,占总数的83%;群落垂直结构明显,大体分3层;通过对4条样带上生物多样性指数进行单因素方差分析,其中丰富度指数（R1、R2）、多样性指数（Simpson多样性指数D、Shannon Wiener多样性指数H）、均匀度指数(E1、E2)分别为17.75、1.50、1.34、0.39、0.23和0.09。     

大米糖浆替代乳糖对早期断奶仔猪生长性能及胰岛素样生长因子轴的影响

本文旨在研究大米糖浆取代乳糖后对早期断奶仔猪生产性能及胰岛素样生长因子轴的影响.选用7 d断奶的二元杂交仔猪(长白×大白)32头,随机分为2个处理组,每组设16个重复,每个重复1只.日粮成分除乳糖水平外(乳糖组和大米糖浆组分别为43.5%和0),其他成分均一致.试验期14 d,在试验第7天、第14天和第21天对试验猪进行空腹8 h称重,计算试验期日增重及日耗料,并分别于试验第7天和第14天每组随机抽取5头,颈静脉采血,屠宰速取肝脏和背最长肌组织.结果表明,大米糖浆取代乳糖后对仔猪的日增重及肉料比均没有显著影响(P>0.05),14 d大米糖浆组血清GH水平与乳糖组差异不显著(P>0.05),21 d大米糖浆组血清GH水平极显著低于乳糖组(P<0.01);但大米糖浆组14 d和21 d血清IGF-Ⅰ的水平,及肝脏和背最长肌IGF-Ⅰ mRNA相对表达量与乳糖组差异均不显著(P>0.05).综合分析认为,大米糖浆替代乳糖后对早期断奶仔猪的生长性能和胰岛素样生长因子轴没有影响.     

紫花苜蓿MsZFN基因超表达载体的构建及对烟草的转化

对紫花苜蓿一种新的CCCH类型锌指蛋白基因进行克隆及转化到烟草中,为研究该基因的功能提供依据。将紫花苜蓿锌指蛋白MsZFN基因(EU624138)连接到载体pBI121上,构建成植物表达载体pBI-ZFN。将表达载体转化到感受态农杆菌株LBA4404中,利用农杆菌介导的方法,以烟草无菌苗叶片为外植体,转化烟草,经卡那霉素筛选获得十几个烟草再生植株。对其中四个再生植株进行PCR和Southern检测,证明目的基因已经整合到烟草基因组中,通过RT-PCR检测,初步证明目的基因在烟草中可以表达。     

贺兰山高山草甸的群落生态学研究

在群落调查的基础上，对贺兰山高山草甸进行数量分析。主要的结果如下：（1）贺兰山高山草甸可分为三个群系，分别为珠芽蓼群系、高山嵩草群系和矮嵩草群系，而高山嵩草群系和矮嵩草群系可进一步划分为两个亚群系，不同群系（或亚群系）的群落结构和环境特征之间存在显著的差异；（2）高山嵩草群系和矮嵩草群系之间的界限约为海拔3200m，而珠芽蓼群系主要分布于研究区的偏阴坡，与海拔关系不大；（3）14个频次大于50％的物种在排序图上的空间分布反映了这些物种最适宜生境的位置，而且与群落类型的空间分布一致。     

欧亚温带草原东缘生态样带研究探讨

为揭示全球变化与欧亚温带草原东缘生态系统的关系,提出沿着从中国长城至俄罗斯贝加尔湖设置一条经向样带,主要表征欧亚大陆东缘经向热量梯度,反映受大陆性气候控制下的草原地带的生态系列.沿样带开展生物地球化学过程、能量交换、植被结构动态、气候—植被、放牧—草地—牧草驯化、土地利用格局与管理、模型模拟等研究工作,对于加深气候变化和人为影响对草原生态系统的发生、发展、利用及演变规律的影响的认识,增强对气候变化的减缓和适应能力,具有非常重要的意义.     

被膜态与浮游态猪源乳杆菌上清液抑菌活性比较分析

试验旨在比较分析猪源约氏乳杆菌L-76和嗜淀粉乳杆菌L-102被膜态和浮游态下其上清液对病原菌的抑菌活性。采用结晶紫染色法测定L-76和L-102的生物被膜形成能力,研究其被膜态和浮游态乳杆菌上清液及上清液与不同影响因素作用后的抑菌活性,并利用扫描电镜观察其两种状态下的上清液对指示菌形态的影响。结果显示,L-76、L-102乳酸菌具有较强的生物被膜形成能力,被膜态和浮游态乳杆菌L-76、L-102具有良好的抑菌活性,其上清液经蛋白酶作用后,被膜态L-76和L-102上清液的抑菌圈直径比浮游态明显变小;经过氧化氢酶和不同温度作用后,两种状态的乳杆菌上清液的抑菌活性无明显变化（P>0.05）,但在pH 3.0作用下,两种状态的乳杆菌上清液的抑菌效果最好;扫描电镜结果显示,被膜态乳杆菌上清液对金黄色葡萄球菌的形态影响略大。综上所述,两种状态下乳酸杆菌上清液中均含有抑菌物质,且被膜态乳酸杆菌上清液中的抑菌物质含量略多或活性略高。     

过表达IL-6对山羊毛囊干细胞增殖和迁移的影响

旨在通过在山羊毛囊干细胞(HFSCs)中过表达炎症因子白细胞介素6(IL-6),探讨其对山羊HFSCs增殖和迁移的影响,阐明MAPK/ERK信号通路在山羊HFSCs增殖和迁移过程中发挥的作用。本试验通过构建pXJ40-myc-IL-6过表达载体,瞬时转染到山羊HFSCs中,以空载体细胞为空白对照组。利用Western blot定量检测IL-6蛋白的表达,MTT法检测山羊HFSCs的增殖活力,划痕试验判定山羊HFSCs的迁移能力,最后采用Westernblot检测山羊HFSCs中MAPK/ERK和P38信号通路中关键激酶的表达水平。结果表明,将获得的IL-6过表达载体转染至山羊HFSCs3d后,与对照组比较,山羊HFSCs的增殖活力出现抑制,且抑制效果持续至第7天(P<0.05)。IL-6过表达载体转染至山羊HFSCs24h后,处理组划痕部位的愈合率达到84.2%,显著低于对照组的98.5%(P<0.01)。与对照组相比,MAPK/ERK信号通路中的关键激酶ERK1/2的磷酸化水平(p-ERK1/2)显著下调(P<0.01),P38信号通路中的关键激酶p38的磷酸化水平(p-p38)表达量上调,但差异无统计学意义(P>0.05)。综上所述,过表达IL-6基因对山羊HFSCs的增殖和迁移能力具有抑制作用,且过表达IL-6可能是通过MAPK/REK信号通路对山羊HFSCs增殖和迁移发挥负性调控作用,以上结果为揭示山羊HFSCs的迁移及组织修复机制的研究提供依据。