Application of PCR-HRM in the study of relationship between leptin gene promoter polymorphisms and liver cirrhosis

AIM: To analyze the feasibility of PCR-high-resolution melting curve analysis (HRM) for detecting the site mutations of C2549 and G2548 in leptin gene promoter from the patients with liver cirrhosis, and to explore the relevance between mutant genotypes and physiological and biochemical indexes in liver cirrhosis patients. METHODS: Compared with the method of PCR-restriction fragment length polymorphism (RFLP), the present research used the method of PCR-HRM to analyze the site mutations of C2549 and G2548 in leptin gene promoter in control group (n=100) and liver cirrhosis group (n=100). The physiological and biochemical indexes of the patients were also detected and compared. RESULTS: Leptin gene promoter polymorphism was detected using PCR-HRM with effectiveness, high flux and accuracy. Preliminary results showed that the main mutation of the patients with liver cirrhosis was in C2549 site, but not found in G2548 site. Leptin, free leptin index (FLI), fasting insulin (FINS) and insulin resistance index estimated by homeostatic model assessment (HOMA-IR) in liver cirrhosis group were higher than those in control group. Insulin sensitivity index (ISI) and soluble leptin receptor (sOB-R) in liver cirrhosis group were lower than those in control group with significant difference except leptin level. Meanwhile, FLI showed positively correlated with FINS and HOMA-IR (r=0.45, r=0.53, P<0.05), and negatively with ISI (r=-0.34, P<0.05). In the patients with liver cirrhosis, C2549A heterozygous mutation was predominant. The indexes of HOMI-IR, leptin, sOB-R and FLI of C2549A homozygotes and heterozygotes were higher than those of the wildtypes, which showed significant difference except leptin and sOB-R levels (P<0.05). CONCLUSION: PCR-HRM can be more accurate for identifying leptin promoter polymorphism. The increase in the frequency of C2549A mutation may be closely related with liver cirrhosis. Existence of hyperinsulinemia and insulin resistance may be correlated with leptin level in the patients with liver cirrhosis.     

人心果转录组De novo组装及奇可胶途径相关基因的分析

为了探索人心果(Manilkara zapota L.)的转录组及奇可胶合成相关的基因,使用Illumina测序平台,对人心果果实、树皮和叶片分别进行转录组测序,使用Trinity等软件进行De novo组装和注释以及计算表达量,采用实时荧光定量PCR对转录组数据进行验证。经过组装得到162 455条unigene,总长度达139 792 553 nt,平均长度达861 nt,N50达1 544 nt。通过与NR、NT、Swiss-Prot、KEGG、COG和GO等数据库比对,共计89 628条unigene得到注释。以组装出来的unigene作为参考序列,在人心果转录组中共鉴别出57 362个SSR位点,果实、叶片和树皮表达的基因中分别检测到99 925、65 989和129109个SNP位点。在人心果转录组中共鉴别出105个与奇可胶合成相关的unigene,参与甲羟戊酸(MVA)途径的基因在果实和树皮中表达量较高,磷酸盐(MEP)途径中的基因则在叶片中的表达量较高,实时荧光定量PCR结果与转录组计算得到的表达量一致。初步推测MVA途径可能是奇可胶合成的主要途径。     

遮荫处理及恢复光照对白菜生长及活性氧代谢的影响

 以白菜耐弱光品种‘矮王’和不耐弱光品种‘绿优’为材料,研究遮荫处理及恢复光照过程中植株生长、活性氧代谢和抗氧化酶活性的变化。结果表明,遮荫处理后‘矮王’品种生长减缓, ‘绿优’品种生长停滞;2品种的MDA含量、O₂-. 产生速率和H₂O₂含量呈现先下降后上升的趋势, POD活性呈上升趋势,而SOD、CAT、APX等酶活呈先下降后上升的趋势;恢复生长光照后,2品种的 MDA含量、O₂-. 产生速率和H₂O₂含量均迅速上升,几种酶活也呈加速上升趋势。遮荫处理后期与恢复光照后‘绿优’的膜脂过氧化现象较‘矮王’严重,‘矮王’通过增加抗氧化酶活性,有效地减轻了膜脂过氧化程度。     

种牛精液冷冻和保存效果研究进展

随着养牛业的高速发展,牛精液液体保存技术的研究也在逐步深入。人工授精技术降低了养殖成本,加速了肉牛的繁殖改良,同时还促进了育种工作的进程,合理有效的使用人工授精技术能够提高牛的饲养效益。与此同时,优良的种牛精液品质也是改良的关键,有实验结果表明：遗传、气候环境、饲养管理等因素会影响牛的精液品质[1],同时强制运动也是决定种牛精液品质的关键环节[2]。合理的精液冷冻与保存不仅能发挥优良的精液品质,同时也为人工授精技术的发展提供保障。本文从牛精液新型冷冻保护剂和损伤修复、牛精液冷冻保存添加剂、牛冷冻精在人工受精中的应用、冷冻保存的发展前景等方面总结了我国牛精液冷冻保存技术的研究和发展,以期对今后种牛精液冷冻和保存技术发展有所帮助、提供参考。     

钩纹皮蠹不同虫态过冷却点及结冰点的测定

为初步明确钩纹皮蠹Dermestes ater De Geer不同虫态的抗寒能力,本文运用智能昆虫过冷却点测定仪及配套软件测定钩纹皮蠹幼虫、蛹和成虫的过冷却点及结冰点,比较不同虫态过冷却点和结冰点的差异,以期为钩纹皮蠹的越冬区划分、发生期预测和虫害防控等提供理论依据。结果表明,钩纹皮蠹3日龄蛹的平均过冷却点最低,为-24.31℃,1龄幼虫平均过冷却点最高,为-16.34℃,其余虫态平均过冷却点依次为老熟幼虫(-24.04℃)5日龄蛹(-23.84℃)1日龄蛹(-23.01℃)7日龄蛹(-19.53℃)7龄幼虫(-19.16℃)5龄幼虫(-18.75℃)3龄幼虫(-18.43℃)成虫(-18.25℃);老熟幼虫的平均结冰点最低,为-18.41℃,5龄幼虫平均结冰点最高,为-10.84℃,其余虫态平均结冰点依次为3日龄蛹(-18.26℃)1日龄蛹(-17.13℃)5日龄蛹(-16.87℃)1龄幼虫(-14.66℃)成虫(-14.55℃)7日龄蛹(-13.20℃)3龄幼虫(-12.96℃)7龄幼虫(-12.38℃)。钩纹皮蠹蛹和老熟幼虫有较强的抗寒能力,但幼虫和成虫的抗寒能力较弱。     

基于近红外光谱的北京市全株玉米原料康奈尔净碳水化合物-蛋白质体系组分分析与预测

本试验旨在基于康奈尔净碳水化合物-蛋白质体系(CNCPS)建立北京市全株玉米原料营养成分数据库,并利用近红外光谱(NIRS)方法建立其营养价值预测模型。试验采集北京市18个牧场89份全株玉米原料样品,测定其营养成分,利用CNCPS 6.5计算各样品碳水化合物(CHO)和蛋白质组成。定标集和验证集根据4∶1的配比关系,分别选用71份和18份全株玉米原料样品作为定标集和验证集评价NIRS模型。结果显示:1) NIRS分析技术对全株玉米原料常规营养成分、CNCPS中蛋白质组成和CHO组成均具有较好的预测能力,且精确度较高。2)干物质(DM)、粗灰分(Ash)、粗蛋白质(CP)、粗脂肪(EE)、中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)、酸性洗涤木质素(ADL)、淀粉(Starch)、中性洗涤不溶蛋白质(NDIP)、酸性洗涤不溶蛋白质(ADIP)、可溶性蛋白质(SP)、CHO、非纤维性碳水化合物(NFC)、可溶性纤维(CB2)、可消化纤维(CB3)、不消化纤维(CC)、可溶性真蛋白质(PA2)、难溶性真蛋白质(PB1)、纤维结合蛋白质(PB2)和非降解蛋白质(PC)的定标决定系数(1-VR)均>0.80,验证决定系数(RSQv)均≥0.84,这些模型均可用于日常快速检测分析。DM、Ash、EE、NDF、ADF、ADL、Starch、NDIP、CHO、NFC、CB2、CB3、PC和PB1的NIRS模型参数均采用二阶导数处理,CP、SP、ADIP、CC、PA2和PB2的NIRS模型参数均采用标准正态变量+二阶导数处理。综上所述,本研究提供了全株玉米原料的基础化学分析数据,并通过NIRS分析技术建立了主要营养成分的快速预测模型,有利于养殖场青贮前对全株玉米原料质量的快速评估。     

兴隆山自然保护区华北珍珠梅物候期对水热条件的响应

华北珍珠梅(Sorbaria kirilowii)为蔷薇科珍珠梅属植物,具有抗病虫害等生态价值,是兴隆山自然保护区内主要的灌木种。本研究通过对甘肃省兴隆山国家级自然保护区内华北珍珠梅2004-2007年及2012-2015年9种物候特征的观察,分析了华北珍珠梅各物候期的变化趋势以及各物候期与月平均气温和月降水量的相关关系。结果表明,华北珍珠梅的春季物候期多数呈现推迟趋势,而秋季物候期主要呈现提前趋势,整个生长季的时间每年缩短达15.49d。华北珍珠梅物候期的变化趋势与月平均气温和月降水量具有密切的相关关系,其中开花期和果实膨大期与4月份的平均气温间呈显著的负相关关系(P0.05),发芽期与2月份降水量,抽枝期与5月份降水量以及果实膨大期与7月份降水量均呈显著负相关关系(P0.05),而果实成熟期与10月份降水量呈显著的正相关关系(P0.05)。因此,受水热条件影响的华北珍珠梅生长季的缩短不仅会降低其生长繁殖,也会减少灌木层的郁闭度,不利于生活在灌木层的动物,如濒危物种马麝(Moschus sifanicus)等的栖息。     

聚丙烯酸钠对黄土坡面产流产沙的影响研究

通过野外模拟降雨试验,研究了施用SP对黄土坡面产流、产沙的影响,并对实验数据进行数学模拟,建立了SP施用量与产流、产沙强度间的关系模型.结果表明:SP施用量与产流时间、平均产流强度呈二次函数相关关系,与产沙强度呈线性负相关关系.SP用量在0～2.42 g/m\+2之间时,能够延缓坡面产流,用量为1.21 g/m\+2时延缓产流效果最明显;用量介于0～3.31 g/m2之间时,能够增加土壤入渗,减少坡面产流量,用量1.65 g/m2的增渗减流效果最佳;施用SP后,能够减少坡面输沙强度,且用量越大,减沙效果越明显.SP可影响坡面产流过程,用量1.8 g/m2时,能够减小产流初期径流强度增幅,用量为3.6 g/m2时,其产流过程线与对照极接近,而施用量增加到5.4 g/m2时,产流强度明显增大.SP对坡面产沙过程的影响表现为:随施用量增大,产沙强度峰值呈逐步减小的变化趋势.     

Genetic analysis of ORF5 of recent Korean porcine reproductive and respiratory syndrome viruses (PRRSVs) in viremic sera collected from MLV-vaccinating or non-vaccinating farms

The 23 open reading frame (ORF) 5 sequences of Korean type II porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) were collected from viremic sera from the (modified live vaccine) MLV-vaccinating and non-vaccinating farms from 2007 to 2008. The samples were phylogenetically analyzed with previous ORF5 sequences, including type I Korean PRRSV, and previously reported or collected sequences from 1997 to 2008. A MN184-like subgroup of type II Korean PRRSV was newly identified in the viremic sera collected from 2007 to 2008. And of the type I PRRSVs, one subgroup had 87.2~88.9% similarity with the Lelystad virus, showing a close relationship with the 27~2003 strain of Spain. The maximum parsimony tree of type II PRRSV from 1997 to 2008 showed that they had evolved to four lineages, subgroups 1, 2, 3 and 4. Most of the recently collected type II PRRSVs belonged to subgroup 4 (48%). The region of three B-cell epitopes and two T-cell epitopes of ORF5 amino acids sequences was considerably different from the MLV in subgroups 3 and 4. In conclusion, the existence of type I PRRSV, which was genetically different from Lelystad virus (Prototype of type I PRRSV), and heterologous type II PRRSVs of viremic pigs detected even in the MLV-vaccinating farms indicated the need for new vaccine approaches for the control of PRRSV in Korea.     

陕西渭北旱原苹果种植区划与产业发展战略

通过生产典型调研、统计数据分析与ArcGIS数据处理,得出渭北旱原苹果业发展成就与存在问题,突出表现为果园土壤干燥化严重,水利设施发展不足,种植区域布局不够明确,品种结构不合理,果品加工贮销企业规模小,果业产业化水平偏低,苹果产业社会化服务体系尚不健全等问题。在现有地形、植被、气象等资料的基础上提出将渭北旱原苹果种植区可分为西部山地沟壑中晚熟苹果区(Ⅰ区)、中部残原沟壑中晚熟苹果区(Ⅱ区)、北部高原沟壑晚熟苹果区(Ⅲ区)和东部台原沟壑中晚熟苹果区(Ⅳ区)等4个功能区域。在功能划分的基础上,十二五期间渭北旱原苹果产业发展战略措施概况为:优化生产布局、调整品种结构,扩大绿色果品基地规模,高海拔地区以晚熟品种苹果为主,低海拔地区重点发展中早熟及加工鲜食兼用品种;通过树立可持续发展理念,加强新技术推广力度,推进果畜结合,培育加工和贮销龙头企业,组建专业合作组织,开拓国内国际销售市场等手段建立市场化长效机制,提升苹果产业化程度。