绵羊肺炎支原体黏附因子的定点突变及原核表达

本研究采用点突变PCR方法成功克隆并表达了绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoiae,M.O)内蒙古分离株(SZWQ株)的黏附因子基因(SZWQ-860)。表达产物经SDS-PAGE电泳检测,与预期目的蛋白的大小一致,将重组蛋白纯化后经Western blot检测,结果表明重组蛋白具有良好的免疫反应性。     

表达猪瘟兔化疫苗株E0蛋白的PK-15细胞系构建

将克隆到pGEM T-easy载体中的E0基因双酶切回收后，连接到增强型绿色荧光蛋白（EGFP）中，利用Lipofectamine^TM2000将重组子转染PK-15、BHK-21、VERO 3种细胞，直接在荧光显微镜下用蓝光激发进行观察，在3种细胞中都可以观察到绿色荧光，而且在转染后的24、48、72 h 3个时间点上，观察到的荧光细胞数量逐渐增多，在72 h时荧光细胞的数量在3种细胞中都达到最多，总的来看，在PK 15中荧光细胞的数量最多。通过对细胞荧光的定位发现，重组质粒的荧光主要分布在胞浆内，而且细胞核周围的荧光较强，胞核与胞浆的界限明显，尤其是在PK-15细胞和VERO细胞中这种现象尤为明显。未携带E0目的DNA的pEGFP-N1 Vector转染3种细胞后，都可以观察到绿色荧光，但是整个细胞中是均匀出现荧光的。经酶切、PCR、单抗间接免疫荧光检测，PK-E0细胞中有大量的HCLV的E0表达，单纯的PK-15细胞中没有E0的表达。HCLV株在PK-E0细胞中从48h开始到72h的滴度比在PK-15细胞中的滴度要高。证明PK-E0细胞中E0蛋白的大量表达增加了HCLV在细胞中的复制。     

甘肃省苜蓿种质资源遗传多样性RAPD分析

苜蓿(Medicago sativa L.)是世界上重要的豆科牧草,了解栽培品种的遗传关系和遗传距离对于育种工作具有重要意义。本研究利用RAPD标记技术对甘肃省11个苜蓿栽培品种(群)进行遗传多样性分析,以期为进一步开展苜蓿新品种选育奠定基础。结果表明:10个随机引物共检测到132条谱带,其中107条为多态性带,多态性条带比率(PPB)高达81.1%;天水苜蓿和定西苜蓿之间的Roger’s遗传距离较远(0.4610),而与陇中苜蓿之间的遗传距离较近(0.1406);进一步的AMOVA分析显示苜蓿种群大部分的遗传变异发生在种群内(61.25%),有38.75%的遗传变异发生在种群间,种群分化不明显。     

大豆异黄酮对高产奶牛泌乳后期乳腺肥大细胞分泌肿瘤坏死因子-α和表面型免疫球蛋白A水平的影响

本试验旨在研究大豆异黄酮对高产奶牛泌乳后期乳腺免疫功能的影响.选用12头胎次、体重和产奶量相近的泌乳后期中国荷斯坦奶牛,随机分为4组,每组3头.4个组中,D为对照组,饲喂全混合日粮,A、B和C组在全混合日粮的基础上分别添加10、20和30 mg/kg大豆异黄酮.为进一步探索大豆异黄酮对奶牛乳腺免疫细胞的作用,分离采自试...     

黑曲霉发酵酱油渣的研究

试验研究了黑曲霉的耐盐能力,试验结果表明:NaCl浓度在0-120 g/l以内,黑曲霉生长速率随NaCl浓度的增加先增加后减小,当NaCl浓度为40 g/l时黑曲霉生长速率达到最大值,为2.08 cm/d;并且以酱油渣为试验材料,研究了黑曲霉对酱油渣中粗纤维成分的降解能力,试验结果表明,黑曲霉能高效降解酱渣中半纤维素,30 d降解率达到了84.28%;同时对纤维素和木质素也有一定程度降解,30 d时降解率分别为23.86%和9.43%。本研究结果为酱油渣的饲料化利用提供了必要的数据支持。     

外源氮对紫花苜蓿固氮酶活性和酰脲含量的影响及其相关关系研究

以‘甘农3号’为研究材料,采用室外(防雨网室)盆栽营养液砂培法,模拟土壤中2种氮素形态(NO₃^--N和NH₄⁺-N)的存在形式,研究混合态氮(NO₃^--N:NH₄⁺-N为1:1)的5个供氮水平(0,105,210,315,420 mg·L^-1)对紫花苜蓿固氮酶活性和酰脲含量的影响并筛选出最佳氮浓度;在筛选出的最佳氮浓度下研究2种形态(NO₃^--N和NH₄⁺-N)氮的7种不同的配比NO₃^--N:NH₄⁺-N(1/7,1/3,3/5,5/5,5/3、3/1,7/1)对紫花苜蓿固氮酶活性和酰脲含量的影响;并对根瘤固氮酶活性和酰脲含量之间的相关关系进行了分析。研究表明:最能促进紫花苜蓿酰脲累积和根瘤固氮能力的外源氮浓度为210 mg·L^-1;最佳混合型态氮配比为NO₃^--N:NH₄⁺-N=1/3。2种试验处理下紫花苜蓿地上部分酰脲含量(y)与固氮酶活性(x)之间分别存在显著正相关关系(P < 0.01),可分别用y=0.0321x+0.4759(R=0.911)和y=0.0313x+0.5545(R=0.960)表示,且2模型高度相似,这为寻求生产中评估紫花苜蓿固氮能力的简便方法提供理论依据。     

高脂日粮对小鼠消化系统自由基水平与物质消化、吸收的影响

选取6周龄雄性昆明种小鼠40只,按体质量随机分成4组:即对照组(正常日粮),高脂日粮组(粗脂肪含量18%),LA组(高脂日粮+0.05%LA和高脂日粮+0.1%LA).小鼠预饲1周后正式饲喂,饲喂5周后进行代谢试验.6周后测定小鼠消化系统自由基水平和肠道黏膜脂肪酶、蛋白酶和淀粉酶活性.结果表明,长期饲喂高脂日粮可显著提高小鼠消化系统自由基水平(P<0.05),降低肠道淀粉酶和蛋白酶活性(P<0.05),但肠道脂肪酶活性显著提高(P<0.05);小鼠对粗脂肪和粗蛋白消化率降低(P<0.05),蛋白沉积率降低(P<0.05).添加0.05%LA后,能显著降低高脂饲喂小鼠消化系统自由基水平(P<0.05),提高小鼠对粗脂肪、粗蛋白消化率(P<0.05),和蛋白沉积率(P<0.05);添加0.1%LA可使小鼠全血及系统自由基水平恢复到接近正常水平.由此得出:高脂摄入,增加小鼠消化系统自由基生成,降低消化酶活性、降低机体对营养物质的消化吸收.适宜的LA添加可有效清除小鼠消化系统自由基,提高消化酶活性,提高营养物质的利用率,缓解营养性氧化应激.     

牛基因组DNA两种提取方法的比较研究

研究哺乳动物基因组DNA的水煮抽提法，并将传统的酚仿抽提法和水煮法进行比较，水煮法即通过对细胞的煮沸和冷却，使细胞破裂、蛋白变性，从而获得用于PCR扩增的模板DNA的方法。通过电泳分析和PCR扩增检测了所提取基因组DNA的完整性、可行性。检测时采用3对引物对2种方法提取的DNA进行了PCR扩增，同时对冷冻保存的基因组DNA也进行了扩增检测。结果表明：水煮法提取基因组DNA是一种快速、简便、经济、高效的方法。     

ST贴壁细胞悬浮驯化及应用

为将ST贴壁细胞通过自主驯化,使其能在ST-S细胞无血清培养基中悬浮生长且能稳定传代,在摇瓶中实现高密度生长,并应用于猪伪狂犬病毒(PRV)悬浮培养,经ST-A低血清培养基适应培养,对一株贴壁的ST细胞进行了无血清的全悬浮驯化,并将PRV在悬浮细胞中连续盲传培养。结果显示:ST悬浮细胞能在无血清培养基中传代,培养48 h至第3代后,所能达到的最终细胞密度为3.00×10^(6 )cells/mL以上;PRV连续培养至第5代,毒价可达到109.0 TCID50/mL。结果表明,用专用培养基可使ST贴壁细胞实现悬浮驯化,并可应用于PRV悬浮培养。本研究为获得高密度ST悬浮细胞和提高PRV增殖效率奠定了技术基础。