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71.
猪伪狂犬病病毒的分离鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
通过鸡胚接种和鸡胚成纤维单层细胞培养相结合的方法从江西省某猪场死亡仔猪的脑、肺脏中分离到一株病毒。该病毒接种家兔48 h后开始表现不安,呈奇痒为特征的神经症状并死亡。病毒能在鸡胚绒毛尿囊膜上形成痘斑,在鸡胚成纤维细胞中增殖并使细胞出现病变、死亡。电镜观察到病毒粒子呈圆形,囊膜清晰可见,直径130~170 nm。根据已发表的伪狂犬病病毒(PRV)gE基因的序列,设计并合成了一对引物,采用PCR方法可扩增特异性953 pb DNA片段。证实分离的病毒株为伪狂犬病病毒,命名为伪狂犬病病毒GN0605株。 相似文献
72.
73.
猪博卡病毒PCR检测方法的建立及其应用 总被引:2,自引:0,他引:2
猪博卡病毒是最新发现的一种DNA病毒,于2009年首次在瑞典患仔猪断奶后多系统衰竭综合征的猪体内被鉴定。为了及时地评估其在我国的流行情况,本研究根据GenBank上递交的唯一一条猪博卡病毒核苷酸序列设计了一对特异性引物,并首次建立了猪博卡病毒的PCR检测方法。该方法特异性强,敏感度高,重复性好,对2009年我国部分省市猪场的191份临床样品进行检测,结果75份为猪博卡病毒阳性,这表明我国猪群中猪博卡病毒相当流行。本研究建立的PCR方法可以作为猪博卡病毒在临床上的一种诊断技术。 相似文献
74.
传染性法氏囊病病毒超强毒株HLJ-0504全基因组克隆及其新特征分析 总被引:1,自引:0,他引:1
为了解传染性法氏囊病病毒(IBDV)HLJ-0504株的分子生物学特征,本研究利用融合PCR技术获得HLJ-0504株全基因组序列。核苷酸和推导氨基酸序列遗传演化分析发现,HLJ-0504A节段位于IBDV超强毒的分枝上,而B节段则介于超强毒株和减毒株之间,形成一个独立分枝,属于一株新的自然重组病毒。VP2抗原性预测分析表明,HLJ-0504株VP2第Ⅰ亲水区中的氨基酸发生突变(D212N),该突变可能导致了HLJ-0504株抗原性发生漂变。本实验结果为深入研究IBDV的分子特征奠定了基础。 相似文献
75.
禽流感病毒重组核蛋白ELISA诊断技术的研究 总被引:47,自引:1,他引:47
用表达禽流感病毒(AIV)核蛋白基因的杆状病毒感染Sf9昆虫细胞。以其表达产物制备抗原,建立了以杆状病毒系统表达的AIV核蛋白为抗原的禽流感间接酶联免疫吸附试验诊断技术(rNP-ELISA)。其抗原最适包被量为0.6μg/孔,等检血清最适稀释度为1:200,酶标抗体使用浓度为1:1000。根据对140份SPF鸡血清检测结果的统计分析,确定其判定标准为OD均为阴性;检测A型AIV15个不同亚型(H1 ̄H15)毒株的特异性血清均为阳性;对人工接种AIV的SPF鸡第3天即能检出抗体,到第162天试验结束时检测仍为阳性。其批内和批间重复试验的变异系数分别在2.9% ̄7.2%和3.4% ̄9.8%之间。对3138份鸡血清进行监测,rNP-ELISA与全病毒间接ELISA与全病毒间接ELISA(AIV-ELISA)、琼脂扩散 相似文献
76.
将在不同时间、地域从传染性法氏囊病 (IBD)发病鸡群中获得的 15个IBDV株分别用SPF鸡、鸡胚和鸡胚成纤维细胞增殖 ,经氯仿处理后 ,采用聚乙二醇沉淀、超速离心和不连续蔗糖密度梯度离心的方法纯化病毒 ,检测表明 ,病毒主要分布于 40 %蔗糖层。对纯化病毒进行SDS_PAGE分析 ,结果显示 ,病毒结构蛋白VP2 在不同毒株表达量有较大差异。本实验为IB DV主要保护性抗原VP2 高表达疫苗的研究奠定了基础 相似文献
77.
为建立一种快速检测番鸭细小病毒(MDPV)的方法,本研究根据GenBank中MDPV的REP基因序列,设计一对特异性引物和一条TaqMan探针。对反应条件和试剂浓度进行优化,建立了检测MDPV的荧光定量PCR方法。检测结果表明,该方法检测敏感性达到20 copies,比常规PCR灵敏度高100倍;而且该方法对鸭I型肝炎病毒、鸭圆环病毒、鹅细小病毒、鸭副粘病毒、鸭瘟病毒和禽流感病毒等的检测均为阴性,具有良好的特异性;该方法的批内和批间的检测变异系数均小于2%。对广西地区鸭群收集的118份病料进行检测,其MDPV阳性率为11.02%。结果提示广西地区的鸭群中MDPV的感染比较普遍,建立的荧光定量PCR方法可以用于MDPV的临床快速检测。 相似文献
79.
为建立一种特异、快速的媾疫锥虫检测方法,本研究通过PCR方法从马媾疫锥虫动基体基因组中扩增得到395 bp的特异的保守序列,将其克隆到pMD-18T载体中构建重组质粒标准品,以10倍倍比稀释的质粒标准品为模板,进行SYBR GreenⅠ荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立马媾疫锥虫荧光定量PCR的检测方法。结果表明:该方法的检测灵敏度可达到1拷贝/μL,并且与马属动物其他传染病无交叉反应。其组间及组内变异系数分别小于3.183%和3.842%。该方法的建立为快速及特异性检测马媾疫锥虫提供了有效的方法。 相似文献
80.