四价抗病虫除草剂RNAi植物表达载体构建与转化甘蔗研究

甘蔗是重要的能源作物和糖料作物,面临病虫害日益严重问题。由于甘蔗遗传背景非常复杂,且缺乏必要种质,难以通过杂交培育抗病虫、除草剂聚合品种。基因工程技术提供了新方法。本研究利用BLAST比对获得甘蔗花叶病毒ScMV-CP基因和黄叶病毒ScYLV-CP基因的保守序列作为干扰序列,通过设计内切酶位点、生物合成和连接,获得全长687 bp的两个保守序列融合片段（MYCP）。并将其正向和反向插入中间载体pHANNIBAL上,形成双价病毒干扰结构。再通过在pHANNIBAL上添加SmaⅠ内切酶位点,将双价病毒干扰结构表达框和Cry1AC基因表达框结合;利用NotⅠ酶切,回收双价病毒干扰结构和Cry1AC基因表达框片段,连接到添加Bar基因表达框的表达载体pART27-Z上,构建了抗病虫及除草剂四价植物表达载体（pART27-MYCP-Cry1AC）。采用基因枪法将构建好的四价植物表达载体转入甘蔗品种FN15的胚性愈伤组织中,通过PPT（草丁膦）筛选获得了抗性再生甘蔗植株,经过PCR、定量以及Bt蛋白试纸检测,获得同时整合四种目的基因并表达的四价转基因甘蔗植株,为培育多抗甘蔗新品种提供了材料。     

甘蔗引进新品种的稳定性分析及其利用价值评判

利用AMMI模型和回归模型对国家区试中的"948"项目引进的9个甘蔗新品系的蔗茎产量、甘蔗糖分和含糖量进行稳定性分析,并以这3个性状的表型值,品种稳定性参数、抗性鉴定结果对品种进行综合评价.结果表明,HoCP93-746、RB72-454、CP85-1308、HoCP91-555、"ROC"25、CP89-1509等品种综合性状表现较好,可根据生产需要选择推广应用,并进行合理布局."ROC"26在产量和品质方面表现良好,但中感黑穗病,不宜在黑穗病高发区推广.本研究中的"CP"、"HoCP"系列品种早熟、高糖,且黑穗病、花叶病的抗性强.耐旱性较强,可尝试用作亲本与我国的高产大茎品种杂交选育新品种.     

影响籼稻成熟胚愈伤组织植株再生频率的几个因素

以优良籼稻品种的成熟胚为材料,探讨不同浓度ABA、愈伤组织继代次数、培养时间以及干燥处理等因素对籼稻成熟胚愈伤组织再生能力的影响。结果表明：（1）在分化培养基上添加3.0～5.0 mg/L ABA对促进胚性愈伤组织的形成及胚状体发生,提高植株再生能力有显著作用。（2）继代3次、培养20～30 d的成熟胚愈伤组织,质量较好,分     

甘蔗杂交后代主要荧光性状的遗传力及配合力分析

以6×3不完全双列杂交NCⅡ）衍生的18个家系实生苗为材料,对主要荧光性状PSIⅡ原初光能转换率（FvFo）、PS Ⅱ潜在活性（FvFm）、光合量子产额（Y）、光化学猝灭系数（qP）、非光化学猝灭系数（qN）的遗传力和配合力进行分析。结果表明∶FvFo,FvFm、Y、qN、qP的遗传主要受基因的非加性效应所制约,这些荧光性状的广义遗传力（h?）变幅为27.46%个44.38%;亲本赣75-65和崖84-153各荧光性状一般配合力为正值且较大,是配合力较好的高光效亲本;根据配合力总效应,综合表现较好的高光效组合有赣75-65崖84-153,,,桂69-156×崖84-153、CP81-1254崖 84-153,CP65-357崖82-96。     

甘蔗有性世代单叶净光合速率的遗传变异性

研究了甘蔗F1代10个家系单叶净光合速率（Pn）的遗传趋势．结果表明，Pn的表型分布近似正态分布．属于数量性状遗传，受微效多基因控制．广义遗传力（h2B）较低，为21．58％～30．68％，因此在低世代对Pn的选择应适当降低选择强度并根据与Pn密切相关的性状进行筛选．不同家系遗传标准差和遗传变异系数有所差异，家系选15×崖90／31、粤农85／177×崖90／31和CP72／1210×崖90／31的Pn平均值较高且遗传变异系数较大，从这些家系中选择高光效基因型的效果好，可获得较高的遗传进展．     

果蔗高产高效综合栽培技术

果蔗是一种专供鲜食的甘蔗品种 ,近年来我国南北方果蔗种植面积有逐年增加的趋势。本文主要从蔗地准备、播种、水肥管理、病虫草害防治、蔗田立体种植及收获贮藏等 6个方面 ,探讨果蔗高产高效的栽培技术 ,以期能为广大蔗农提供借鉴。     

CI-301PS光合测定系统的时间间隔和空气流速参数在甘蔗上的选择

本文对ＣＩ—３０１ＰＳ光合测定系统的时间间隔和空气流速与净光合速率（Ｐｎ）和蒸腾速率（Ｅ）变异系数的关系进行回归分析，结果表明，ＣＩ—３０１ＰＳ光合测定系统测定Ｐｎ和Ｅ较理想的时间间隔为２４．０～２８．０Ｓ，空气流速为０．５１～０．６６ＬＰＭ。综合分析建议测定甘蔗光合作用时采用０．６０ＬＰＭ的空气流速和２５．０Ｓ的时间间隔。     

甘蔗黄叶病毒的RT-PCR检测技术

以甘蔗黄叶病毒(ScYLV)特异性引物YLSF111和YLSR462为引物,对福建蔗区8个罹病品种的疑似病株进行RT-PCR检测,扩增出352 bp特异性片段.将PCR产物克隆后测序,序列分析表明,该片段是ScYLV外壳蛋白(CP)基因的一部分,核苷酸和氨基酸序列同源性达95%以上,与美国、印度、巴西等国家ScYLV分离物(GeneBank登录号分别为AF157029、AY236971、AF141385)CP基因同源性达100%,证实我国福建地区甘蔗黄叶综合症的病原体为ScYLV.本研究同时建立了ScYLV的RT-PCR检测技术.     

福州地区甘蔗黄叶病病原分子鉴定及电镜检测

电镜观察表明，感病甘蔗叶片的韧皮部伴胞内存在着大量类似甘蔗黄叶病毒（SCYLV）的病毒粒子；利用RT-PCR扩增出556 bp的目的片段，氨基酸和核苷酸序列分析表明，该片段是SCYLV外壳蛋白基因的一部分，与其他国家SCYLV分离物同源性达95%以上；应用组织印迹杂交免疫检测技术，在YLS病症的叶片中脉韧皮部出现紫红色斑块，呈阳性反应。综合分析认为福州地区甘蔗黄叶病的病原体为SCYLV。