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为建立鸭巴泰病毒(Batai virus,BATV)SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测方法,研究根据鸭BATV非结构蛋白(NSs)基因特征,设计引物,经条件优化后建立检测BATV感染的qRT-PCR方法。用建立的qRT-PCR方法对临床72份疑似BATV感染的病料进行检测,并对阳性样品进行病毒分离,评价两种方法的符合率。结果表明,当病毒NS基因含量为3.59×10~2~3.59×10~7拷贝/μL时有良好的线性扩增,其扩增相关系数为0.9994,扩增效率为98%。最低检测限为3.59×10~2拷贝/μL;扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体,Tm值为(81.60±0.16)℃,对鸭源常见病毒(如鸭甲肝病毒、禽坦布苏病毒、禽Ⅰ型副黏病毒、H9N2亚型禽流感病毒、新型鸭呼肠孤病毒和番鸭呼肠孤病毒)检测均为阴性,组内变异系数和组间变异系数分别为0.49%~1.99%和0.58%~2.18%。临床送检的72份病料SYBRⅠ实时荧光定量PCR方法的阳性率为4.17%(3/72),并分离到2株鸭源BATV,2种方法的阳性符合率为66.67%(2/3)。建立的基于SYBRⅠ检测BATV的qRT-PCR方法、特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于BATV的分子流行病学研究。 相似文献
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为确定乌鳢幼鱼的赖氨酸需要量,选择体重为(5.96±0.36)g的乌鳢(Channa argus)幼鱼540尾,采用单因素浓度梯度法设计试验,即饲料中赖氨酸的添加水平分别为0.0%、0.4%、0.8%、1.2%、1.6%和2.0%,实测各饲料中赖氨酸水平分别为1.94%、2.34%、2.74%、3.14%、3.54%和3.94%等氮、等能饲料(粗蛋白质43.0%、能量18.5 MJ/kg),随机分为6组,每组3个重复,每个重复30尾,进行为期10周的养殖试验。结果表明:以特定生长率为指标,乌鳢对饲料中赖氨酸的适宜需要量为2.87%,占饲料蛋白质的6.65%。根据乌鳢肌肉必需氨基酸的模式,使用A/E法推算出乌鳢对饲料其它必需氨基酸的需要量,即精氨酸4.39%CP、亮氨酸3.10%CP、异亮氨酸3.21%CP、蛋氨酸+半胱氨酸2.77%CP、苯丙氨酸+酪氨酸6.29%CP、苏氨酸3.46%CP、缬氨酸3.34%CP、组氨酸1.76%CP。 相似文献
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根据已知的BLG序列设计引物,通过PCR技术克隆同源臂序列,5′端同源臂2 264bp,包括外显子1,3′端同源臂4 461bp,包括全部的外显子3、4、5、6、7,分别连入克隆载体pMD18-T Simple载体中并测序。然后以含有正负筛选标记基因的ploxpⅡ载体为基础,将5′端和3′端同源臂片段先后连入其中,进行酶切、PCR鉴定。将构建好的基因敲除载体转化组成型表达Cre重组酶的大肠杆菌BM25.8,验证Loxp位点的活性。结果表明,构建了奶山羊BLG基因第2外显子缺失的基因敲除载体pBLG2T,且pBLG2T载体中的正选neo基因可以被Cre重组酶去除。为获得BLG 1条等位基因缺失型细胞株以及培育高产优质奶山羊新品种奠定基础。 相似文献
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2.2.1有腹泻症状的疾病有:腺胃炎、鸡传染性发育障碍综合症、弧菌性肝炎、盲肠肝炎、绦虫病、蛔虫病、维生素B11缺乏、慢性黄曲霉毒素中毒、菜籽饼中毒。 相似文献
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