烟草环斑病毒RT-Realtime PCR检测方法

烟草环斑病毒(Tobacco ringspotvirus,TRSV)是我国公布的二类检疫危险性有害生物,对农业生产危害较大。受该病毒侵染的一些寄主植物出现隐症,并伴随病毒浓度降低,给检测工作造成困难。根据TRSV外壳蛋白基因序列设计合成了一对引物及一条MGB探针,优化了反应条件,建立了TRSV实时荧光RT-PCR检测方法。该方法与常规的DAS-ELISA方法和RT-PCR方法相比,灵敏度分别提高了200倍和4倍,并且对不同寄主上的TRSV均有较好的检测效果。     

大豆茎溃疡病菌的生物学特性及其传入我国的风险

大豆南北方茎溃疡病菌是为害大豆的重要病原菌,是我国的检疫性有害生物.本文通过对这两种病菌生物学特性的了解,根据我国的作物种植特点及气候条件,对其传入我国的风险进行了评估,结果认为这两种病菌传入中国并在中国定殖、定殖后扩散等的可能性极大,风险为高.     

李痘病毒适生区预测及模型选择

李痘病毒是危害核果类果树的重要病原物,具有传播迅速的特点,已被多个国家列为检疫性有害生物.本文尝试利用Dymex模型和Maxent模型预测李痘病毒在中国的潜在适生区,通过试验验证和对预测模型技术参数AUC的比较分析,认定利用Maxent模型预测的李痘病毒在中国的潜在适生区具有一定的科学性,对我国制定植物检疫法规具有一定的参考价值,同时也为今后其它植物病毒的定量风险分析工作提供有益的借鉴.     

应用PCR技术检测饲料中的转基因成分

成功地从成品饲料中提取DNA，并采用PCR检测技术从中检出35S启动子，NOS终止子，EPSPS耐除草剂基因和CryLA(b)抗虫基因等转基因成分，同时通过扩增玉米（Zea mays)自身zein蛋白基因及大豆（Glycine max)自身lectin基因的引物和阴阳性对照，阴阳性质控，避免产生假阳性，假阴性结果。该方法已在口岸进口饲料转基因检测中得到初步应用。     

刺桐姬小蜂检疫与防控技术

刺桐姬小蜂（Quadrastichus erythrinae Kim）是2005年7月在中国大陆发现的重要外来入侵物种，对刺桐属植物造成严重为害，已被列为中华人民共和国进境植物检疫性有害生物和全国林业检疫性有害生物。本文观察了该虫的羽化、取食、寿命、产卵、越冬等生物学习性；研究了该虫检疫处理和田间防治技术。     

从盐田局送检的百合种球中检出百合斑驳病毒

2004年4月27日，深圳检疫局盐田分局从荷兰进口的百合种球中抽取样品送动植中心进行病毒检测。经隔离种植后，发现有一株百合叶片上出现斑驳、条纹、扭曲等症状，疑是百合斑驳病毒侵染。随后，采用百合无症病毒RT-PCR检测方法，特异性扩增得到一条大约500bp左右的特异性条带，这与期望结果一致。为了保证检测结果准确无误，又将RT-PCR扩增产物进行测序，测序结果与GenBank上已登录的百合斑驳病毒多聚蛋白基因保守区序列一致，也与预先设计的基因片断完全一致。从而表明，从荷兰进口的百合种球中确实携带有百合斑驳病毒（Uly mottle virus）。     

麦麸中小麦矮腥黑穗病菌孢子的提取方法

 对麦麸中小麦矮腥黑穗病菌孢子的提取方法进行了研究。通过建立的"过筛-α-淀粉酶降解"、"过筛-密度梯度离心"和"过筛-α-淀粉酶降解-密度梯度离心"等方法能从麦麸中提取TCK孢子。提取的TCK孢子数量与网筛、α-淀粉酶和密度梯度离心的应用情况有关,而提取的TCK孢子纯度则主要与密度梯度离心有关。选用双层纱布和5种不同规格的网筛或网筛组合进行过筛能弃除83.88%~94.09%的麦麸,应用"过筛-α-淀粉酶降解"方法能弃除95.01%~99.00%的麦麸,并能提取19.2%~51.7%的TCK孢子。在"过筛-密度梯度离心"实验中,只有60目+200目+300目+30μm+11μm该网筛组合处理能获取7.2%的纯孢子,密度梯度离心对孢子的网嵴高度、自发荧光和萌发没有影响;在"过筛-α-淀粉酶降解-密度梯度离心"实验中,60目+200目+300目和60目+200目+300目+30μm+11μm这2组网筛处理可分别得到18.8%和12.2%的纯孢子,该处理对孢子网嵴高度没有影响。     

PCR应用技术进展简介

 虽然PCR技术自1985年诞生以来已广泛应用于生物学、分子生物学、遗传学、遗传工程学等领域。     

基于ITS序列大豆茎褐腐病菌的PCR鉴定

提取了分别来自11个种共13株真菌(都是大豆上的常见病害的病原菌)的DNA.采用ITS序列扩增通用引物对其进行PCR扩增,并对大豆茎褐腐病菌的PCR产物进行测序.根据所得大豆茎褐腐病菌与其常见易混淆品所在属在ITS区的基因序列比较分析,设计并合成了1对特异性引物.采用此对引物,只有大豆茎褐腐病菌能扩增出500 bp条带,检测的灵敏度达到4.2 pg/μL.将此对引物应用于人工接种大豆茎褐腐病菌大豆的检测,结果表明,此方法能够成功区分大豆茎褐腐病菌及其近似种.     

李痘病毒及其风险分析

李痘病毒是危害核果类果树的重要病原物,具有传播迅速的特点,已被多个国家列为检疫性有害生物。本文对李痘病毒生物学特性等方面进行综述,通过分析该病毒的传播和定殖规律,并根据我国的具体生态情况,对其传入的可能性进行风险分析,结果认定其传入的可能性较大,需要制定严格的检疫措施,严防传入中国。