一种新的检测牛种布鲁氏菌抗体的方法—荧光极化法（FPA）

目前检测牛种布鲁氏菌（Ｂｒｕｃｅｌａａｂｏｒｔｕｓ）抗体常用的血清学方法有缓冲平板抗原试验（ＢＰＡＴ）、补体结合试验（ＣＦＴ）、间接酶联免疫试验（Ｉ－ＥＬＩＳＡ）和竞争酶联免疫试验（Ｃ－ＥＬＩＳＡ）。本文介绍的荧光极化法（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｐｏ...     

驽巴贝斯虫病巢式PCR检测方法的研究

针对驽巴贝斯虫（Babesia caballi）rap—1基因序列设计内外两对引物，从实验室感染驽巴贝斯虫的马匹上采集全血提取DNA，采取两次扩增的方法，获得222bp基因片段，经测试此靶序列为驽巴贝斯虫特异性基因片段。采用本研究方法对已知的阳性马匹和阴性马匹进行检测，准确率为100％。     

建立A72细胞进行猪传染性胃肠炎血清中和试验的研究

引进了一株狗直肠瘤细胞系A72，将该细胞株进行培养传代，用于猪传染性胃肠炎中和试验研究，与用传统的猪肾细胞系PK15进行的猪传染性胃肠炎血清中和试验对比，用ELISA对这2株细胞的中和试验结果进行验证。结果表明，运用A72进行的病毒繁殖，其毒价明显高于PK15，A72在血清中和试验结果上优于PK15，且由TGEV导致A72发生的病理改变明显强于PK15，猪TGE血清中和试验与酶联免疫吸附检测结果试验的重复性较好。     

猪传染性胃肠炎病毒在组织细胞上增殖的研究

从组织细胞制备、不同试验细胞（ｐｋ１５,ＳＴ）及不同维持液组成成份三个方面对ＴＧＥＶ在组织细胞上增殖情况进行了比较。结果表明,用含１５％ＦＢＳ培养液进行ＳＴ或ｐｋ１５细胞传代并制备悬液,操作方便,能形成良好单层,利用ＴＧＥＶＣＰＥ判定;ＳＴ细胞在病毒增殖和检测毒价两方面均较ｐｋ１５细胞分别高２个滴度和１个滴度以上;维护液中提高血清含量（８％ＦＢＳ）或含一定量胰酶对ＴＧＥＶ增殖效果影响不大。     

尼帕病毒与猪流感病毒双重荧光定量RT-PCR方法的建立

根据尼帕病毒(NiV)M基因和猪流感病毒(SIV)M基因序列设计引物和TaqMan-MGB探针,通过优化反应条件建立了一种鉴别NiV和SIV的双重实时荧光定量RT-PCR检测方法,对该方法的定量线性范围、敏感性、重复性和特异性进行了评价及初步应用。结果显示,用该方法检测NiV M基因的RNA标准对照(NiV-M-RNA)和SIV M基因的RNA标准对照(SIV-M-RNA),定量线性范围分别为4.6×101copies/μL~4.6×108 copies/μL和5.8×101copies/μL~5.8×108 copies/μL,检出限分别为46个拷贝和58个拷贝。该方法的组内试验和组间试验的变异系数均小于1.6%,显示其良好的可重复性。该方法仅对NiV-M-RNA和SIV呈现特异性扩增曲线,不与猪瘟病毒(CSFV)、猪流行腹泻病毒(PEDV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)和伪狂犬病病毒(PRV)发生交叉反应。用该方法对236份猪的鼻拭子样品进行NiV和SIV的同时检测,所有样本的NiV检测结果均为阴性,有1份样本的SIV检测结果为阳性。本研究建立的方法可为猪临床样本中NiV和SIV的鉴别检测提供了一种快速、敏感和特异的技术手段。     

检测非洲猪瘟McAb-ELISA竞争试剂盒的建立及初步应用

用基因重组技术制备的非洲猪瘟蛋白P54免疫BALB/C小鼠,将免疫鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用有限稀释法进行克隆,获得能稳定分泌抗ASFV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。使用该单克隆抗体,建立了检测血清中非洲猪瘟抗体的竞争法ELISA。实验结果表明：ELISA竞争法特异性高,无交叉反应,灵敏度高于间接免疫荧光法,可用于猪血清的非洲猪瘟抗体检测。该法的建立对非洲猪瘟实验诊断的标准以及流行病学调查具有重要的现实意义。