非洲猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

非洲猪瘟病毒p54蛋白在病毒感染与增殖过程中起重要作用.根据p54基因的核苷酸序列,设计并合成引物和用6-carboxy-fluorescein (6-FAM) 和tetramethyl-6-carboxyrhodamine (TAMRA) 荧光素标记Taq Man双水解探针,以构建的含p54基因的pET-p54重组质粒作为阳性模板,建立了ASFV检测的荧光定量PCR方法(已申请专利,专利号200910067620.6).结果表明,所建立的方法与含p54基因的模板质粒数呈现很好的相关性(R2=0.991),可检测出低于15个拷贝/μL的样品,灵敏度和特异性高,可作为出入境检验检疫部门对非洲猪瘟病毒的快速检测方法.     

驽巴贝斯虫病巢式POR检测方法的研究

针对驽巴贝斯虫(Babesia caballi)rap-1基因序列设计内外两对引物,从实验室感染驽巴贝斯虫的马匹上采集全血提取DNA,采取两次扩增的方法,获得222bp基因片段,经测试此靶序列为驽巴贝斯虫特异性基因片段.采用本研究方法对已知的阳性马匹和阴性马匹进行检测,准确率为100%.     

用竞争酶联免疫吸附试验检测蓝舌病病毒抗体的研究

对加拿大动物疾病研究所（ＡＤＲＩ）现行的检测ＢＴＶ群特异性抗体的竞争酶联免疫吸附试验（下称标准程序）进行改良，建立新的适合国内实验条件易于推广的试验方法（下称改良程序）。对１５份实验感染ＢＴＶ的参照牛血清和３６０份样品牛血清进行比较检测，结果表明改良程序与标准程序特异性和敏感性基本一致。用琼凝胶免疫扩散试验（ＡＧＩＤ）对上述参照血清和样品血清进行检测，表明改良程序与标准程序均较ＡＧＩＤ试验敏感。本研究进一步验证改良后的Ｃ－ＥＬＩＳＡ可取代传统的ＡＧＩＤ方法成为ＢＴＶ群特异性抗体的检测标准方法，且它还具备操作简便，作用时间短等特点     

用竞争酶联免疫吸附试验检测蓝舌病病毒抗体的研究

对加拿大动物疾病研究所（ＡＤＲＩ）现行的检测ＢＴＶ群特异性抗体的竞争酶联免疫吸附试验（下称标准程序）进行改良，建立新适合国内实验条件易于推广的试验方法（下称改良程序）对１５份实验感染ＢＴＶ的参照牛血清和３６０份样品牛血清进行比较检测，结果表明改良程序与标准程序特异性和敏感性基本一致。用琼凝胶免疫扩散试验（ＡＧＩＤ）对上述参照血清和样品血清进行检测，表明改良程序与标准程序均较ＡＧＩＤ试验敏感，本研究     

一种新的检测牛种布鲁氏菌抗体的方法—荧光极化法（FPA）

目前检测牛种布鲁氏菌（Ｂｒｕｃｅｌａａｂｏｒｔｕｓ）抗体常用的血清学方法有缓冲平板抗原试验（ＢＰＡＴ）、补体结合试验（ＣＦＴ）、间接酶联免疫试验（Ｉ－ＥＬＩＳＡ）和竞争酶联免疫试验（Ｃ－ＥＬＩＳＡ）。本文介绍的荧光极化法（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｐｏ...     

鸽痘病毒DNA限制性内切酶分析

利用蔗糖密度梯度离心纯化鸽痘病毒 ,以蛋白酶 K法抽提病毒 DNA,提取到高分子量病毒 DN、病毒 DN　经 Eco R 、Sal ,Pst 酶切后各产生 17、8和 13个片段 ,病毒 DNA的大小约为 2 89.32 kb。     

检测非洲猪瘟McAb—ELISA竞争试剂盒的建立及初步应用

用基因重组技术制备的非洲猪瘟蛋白P54免疫BALB/C小鼠,将免疫鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用有限稀释法进行克隆,获得能稳定分泌抗ASFV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。使用该单克隆抗体,建立了检测血清中非洲猪瘟抗体的竞争法ELISA。实验结果表明:ELISA竞争法特异性高,无交叉反应,灵敏度高于间接免疫荧光法,可用于猪血清的非洲猪瘟抗体检测。该法的建立对非洲猪瘟实验诊断的标准以及流行病学调查具有重要的现实意义。     

驽巴贝斯虫病巢式PCR检测方法的研究

针对驽巴贝斯虫（Babesia caballi）rap—1基因序列设计内外两对引物，从实验室感染驽巴贝斯虫的马匹上采集全血提取DNA，采取两次扩增的方法，获得222bp基因片段，经测试此靶序列为驽巴贝斯虫特异性基因片段。采用本研究方法对已知的阳性马匹和阴性马匹进行检测，准确率为100％。