马铃薯Y病毒CP基因的原核表达及免疫金标试纸条的研制

选取马铃薯Y病毒（potato virus Y,PVY）代表株（NC＿001616.1）外壳蛋白基因37～281区间,采用化学合成方法合成目标序列,将其连接到原核表达载体pET-32a（+）,并转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达出45 kDa融合蛋白,回收后免疫日本大耳白兔制备抗血清。Western Blot分析多克隆抗体特异性良好,后制备25 nm胶体金,标记PVY CP37-281多克隆抗体,制备胶体金免疫层析试纸条。结果表明,试纸条能在15 min内检出PVY,PVY病株汁液检测稀释限度可达106倍（W/V）,使用常见复合侵染烟草检测,未出现交叉反应。由此可知,该试纸条操作简便,反应灵敏特异,适用于田间一线及种薯生产中马铃薯Y病毒的检测。     

三叶青两个受体蛋白基因的克隆及功能分析

植物细胞受体类蛋白是一类重要的结构蛋白,在环境信号感知及细胞间信息传递中起重要作用。本研究克隆了三叶青(Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg)的两个受体蛋白基因ThRLP1与ThRLK1,并对其进行了生物信息学分析、器官特异性表达分析和在块根发育不同时期的表达分析,以明确两基因与三叶青芽发育和块根形成的相关性。生物信息学分析表明,所克隆的两个基因中一个为细胞外受体类蛋白基因(ThRLP1),其氨基酸序列具有特征的亮氨酸重复序列,亚细胞定位推测在细胞壁;另一个为质膜受体类蛋白激酶基因(ThRLK1),推测氨基酸序列中具有特征的丝氨酸/苏氨酸激酶的催化结构域,亚细胞定位推测在细胞核。器官特异性表达分析发现ThRLP1在块根中的表达量显著低于其他器官,ThRLK1在块根中的表达量显著低于枝蔓但高于其他器官,两个基因的表达水平并没有显示出与芽发育有相关性;块根发育不同时期表达量分析表明,ThRLP1在块根初始膨大期的表达量显著低于其他时期,ThRLK1表达量随块根发育进程而提高,ThRLK1基因的表达与块根发育进程呈现出一定的正相关性。所克隆的两个受体蛋白...     

惠满丰活性液肥施用技术

惠满丰有机腐殖酸活性液肥是美国Ｏ、Ｅ、、Ｉ、Ｓ公司采用当前国际上最先进的科技手段，经过四十多年研制成的高新科技产品，具有物理能、化学能和生物能，是一种高浓缩多元素有机腐殖酸复合肥。它含有腐殖酸、腐殖胺、腐殖钾、腐殖胶体和多种生物活性物质以及植物必需的...     

应用TaqMan探针实时荧光定量PCR技术早期检测稻瘟病

 稻瘟病是一种严重危害水稻生产的真菌病害,早期监测和防治是关键。温室接种大田主栽品种合系39和感病水稻蒙古稻,定时观察发病症状。提取水稻病样总DNA,根据稻瘟菌28S rDNA基因序列,设计特异引物和TaqMan探针,进行荧光定量PCR检测。结果表明稻瘟菌在蒙古稻和大田主栽品种合系39上症状最初出现时间为接种后72 h,蒙古稻典型症状出现时间为接种后168 h,在合系39上出现典型症状的时间为接种后190 h以后。利用TaqMan探针荧光定量PCR技术,在接种12 h的蒙古稻和合系39上均能检测到稻瘟菌DNA,接种48 h,菌量拷贝数达到最高峰,接种72 h,菌量拷贝数开始下降。不同品种中病原菌拷贝数存在差别,在接种12 h的蒙古稻中稻瘟菌含量为7.2×103个拷贝数,在合系39中为4.9×103个拷贝数。本研究结果表明,应用实时荧光定量PCR技术可以在接种后12 h症状未显现之前检测到稻瘟菌,为稻瘟病流行监测和早期防治提供了科学依据。     

三叶青种质资源遗传多样性的随机扩增多态性DNA分析

利用RAPD技术对64个三叶青种质资源样本进行遗传多样性分析,从40对引物中筛选出10对引物进行批量PCR实验。结果表明:64个三叶青样本的观测等位基因数(Na)为1.666 7~2.000 0,有效等位基因数(Ne)为1.247 9~1.701 3,Nei's基因多样性指数为0.167 0~0.398 4,Shannon多样性指数(I)为0.262 8~0.583 0,平均多态位点为7.5,平均多态百分数为93.145%;在遗传相似系数0.720 56处,可以将64个三叶青样本分成11大类;在遗传相似系数0.697 04处,则可将64个三叶青样本分成4大类;聚类分析的结果与种源的地理距离存在不一致性,这可能与种质资源库的地形、气候等自然因素有关。表明所测三叶青种质资源遗传多样性丰富,具有一定的开发利用价值,可为合理保护三叶青的基因资源及其遗传改良提供科学依据。     

植原体分类研究进展

目的明确云南元谋地区发生的萝卜花变叶病病原以及赤霉素合成途径中关键酶基因表达量的变化。方法对自然表现花变叶、丛枝和节间缩短的萝卜感病植株总DNA进行植原体16S rRNA基因扩增、克隆、测序及系统进化树构建,并采用实时荧光定量PCR技术分析赤霉素合成及代谢途径中关键酶基因(GA20ox1、GA3ox1和GA2ox1)表达量的变化。结果该植原体株系与16SrII-A亚组相似性最高(0.98),并与16SrII-A亚组中的其他植原体株系明显形成一个进化支。结论萝卜花变叶植原体(Raphanus sativus phyllody,RsPh-YNym)为植原体16SrII-A亚组成员,且与候选种Candidatus Phytoplasma aurantifolia相关,明确了该株系的分类地位;感病植株茎中3种关键酶基因GA20ox1、GA3ox1和GA2ox1表达水平发生了变化,表达量均下调,说明植原体的侵染造成了植株赤霉素稳态被破坏,从而导致植株表型改变。     

怀玉山三叶青TOM2B isoform X1基因克隆和功能分析

为揭示怀玉山三叶青TOM2B isoform X1(tobamovirus multiplication protein 2B isoform X1)的生物学功能提供理论依据,本研究通过怀玉山三叶青试管苗转录组数据库筛选到怀玉山三叶青TOM2B isoform X1基因的核心片段,利用RT-PCR技术克隆了该基因,并采...     

柑桔木虱有效寄主的初步测定

目的研究柑橘木虱在云南省的分布区域,确定限制柑橘木虱生存和扩散的关键环境参数。方法应用MaxEnt生态位模型软件,基于柑橘木虱地理分布记录划分柑橘木虱在云南的最适生区域,并确定影响木虱分布的主要环境限制因子。结果柑橘木虱高适生区集中分布于云南六大水系流域的中低海拔(200~1800 m)地区;最冷季度平均温度和年平均温度是影响柑橘木虱在云南分布的最主要限制因子,年平均气温低于15 ℃和最冷季度平均温度低于10 ℃的高海拔(1800 m以上)区域不适于柑橘木虱生存。结论研究结果可为柑橘木虱在云南的发生提供早期预警及有效防控,从而为解决柑橘木虱传播黄龙病难题提供理论依据。     

烟草丛顶病毒复制酶基因克隆及序列分析

烟草丛顶病是近年来在云南省西部的保山、大理等各大烟区频繁爆发流行的一类新的烟草病害。关于这类病害的病原 ,一直众说纷纭 ,有人认为这是一种植原体引起的“烟草丛枝病” ,有人认为这是一种病毒引起的病害。本课题组从 1 995年起对这类病害进行立项研究 ,并相继排除了植原体病原的可能 ,认为这应该是一类病毒或病毒类似物引起的病害。Ｍｏ等认为云南发生的这类烟草病害与津巴布韦发生的烟草丛顶病 (Ｔｏｂａｃｃｏｂｕｓｈｙｔｏｐｄｉｓ ｅａｓｅ)是同一种病害 ,并认为暂定为幽影病毒属(Ｕｍｂｒａｖｉｒｕｓ)的烟草丛顶病毒 (Ｔｏｂａ…     

云南省唐菖蒲花叶病的鉴定研究

 对云南省的唐菖蒲花叶病进行调查和病样采集,通过鉴别寄主反应、电镜负染观察、免疫双扩散实验证实此病原为黄瓜花叶病毒CMV.