家蚕抗核型多角体病毒病分子标记辅助新品种选育研究

利用分子标记技术开展向家蚕实用品种中导入核型多角体病毒病抗性基因的研究.实验结果发现已报道的分子标记在不同品种间表现出差异,与抗性性状并非完全相关.添毒结合标记检测,筛选出抗性品种"多化N"和敏感性的实用品种"春华"作为育种素材,并从特定品种"多化N"中获得了特异性连锁片段.通过组配近等基因系,结合添毒试验在BC<,3>-F<,2>代抗性个体中明显检测到该标记.     

细菌诱导家蝇蛹抗菌物质的分离纯化

家蝇生境中充满病原菌,其有效的防防机制成为研究的热点。通过三氟乙酸缓冲液浸提、热处理、固相萃取以及两次RP-HPLC等方法,从混合细菌液诱导的家蝇蛹中分离纯化出4种具有抗菌活性的物质。结果表明,提取的家蝇蛹粗提液抗菌谱较广,对多种微生物具有不同程度的抗菌作用,且抗菌效果好于天然肽类防腐剂和一些化学防腐保鲜剂。4种抗菌物质中包括3个抗菌肽和1个抗菌化合物。Tricine-SDS-PAGE结果显示3个抗菌肽的分子量分别约为12kDa、8kDa和4kDa。本研究表明细菌诱导家蝇蛹中具有丰富的抗菌物质。     

两种抽提家蚕基因组DNA方法的比较

基因组DNA是开展分子生物学研究的基础工作,而抽提方法繁多.为此,本研究主要对蛋白酶K、CTAB法进行了系统的分析比较,结果发现两种方法抽提的DNA均能满足一般的PCR分析,CTAB法抽提耗时较短,但的蛋白酶K抽提法DNA得率更高,且不同的缓冲液对抽提效果有一定影响.这为今后广泛开展家蚕分子生物学研究有一定的参考作用.     

浙江马尾松毛虫不同地理种群间基因差异的ISSR分析

马尾松毛虫(Dendrolimus punctatus)是浙江省重要的森林害虫,也是我国南方林区松林主要食叶害虫之一,在浙江往往呈周期性发生并猖獗成灾,造成严重的经济损失和生态环境的破坏.     

马尾松毛虫的人工饲养

从马尾松毛虫Dendrolimus punctatus新发生区采集虫源,在自然温湿度和光照条件下,借鉴家蚕的人工饲养经验和技术,采取卵面、松针、饲养室和饲养用具等的消毒措施,提高了室内饲养松毛虫幼虫的存活率和茧蛹的羽化率.马尾松毛虫在室内的规模化人工饲养取得了初步成功,顺利完成从卵到卵的生活世代,经过消毒的卵孵化率为91.4%,室内饲养幼虫的存活率达到92.54%,茧蛹的羽化率达88.4%,雌雄性比为1.08：1.     

家蚕性连锁平衡致死系雌性胚胎的组织形态学初步研究

为了调查家蚕性连锁平衡致死系中Z染色体携带致死基因l2的雌性胚子(简称l2胚子)致死的时间和原因,收集家蚕性连锁平衡致死系品种平2不同胚胎发育时期的雌性黑卵,解剖获取胚胎后用光学显微镜对不同发育时期的l2胚子进行组织形态学观察。形态观察可见l2胚子在胚胎发育早期和能正常发育的雌性胚子没有区别,但l2胚子发育至晚期的己2期,约有一半胚子的体表未能正常着色,因此推断那些仍没有正常着色的胚子即为致死的l2胚子。通过胚胎的半薄切片观察发现,己2期l2胚子的组织器官结构完整,与正常发育的雌性胚子之间无明显的差异。观察结果提示:l2胚子死亡可能不是由于胚胎组织结构异常造成的,有可能是在己2期胚子停滞发育致死。     

家蚕基因组DNA甲基化分析

DNA甲基化在生物的基因表达调控与发育调节过程中具有重要作用。应用甲基化敏感扩增多态性(MSAP)技术对7个家蚕保存品种的胞嘧啶甲基化模式和程度进行评估。在所能检测的CCGG序列中,至少有8.6%~10.9%的胞嘧啶发生了甲基化;12对引物共获得1 156条扩增带,其中376条在品种间呈多态性,多态性比例为32.5%。结果显示:家蚕基因组可检测到DNA甲基化,各品种间的甲基化模式存在差异,CCGG序列中胞嘧啶外部甲基化(10.9%)高于内部甲基化(8.6%)。     

马尾松毛虫腺苷酸转移酶基因的克隆与分析

 【目的】克隆马尾松毛虫腺苷酸转移酶基因。【方法】采用RACE方法克隆基因,利用软件分析推导蛋白的保守结构域,并与已报道的其它8种昆虫腺苷酸转移酶进行比较,并构建系统树,用southern法分析该基因在单倍体基因组中的拷贝数。【结果】获得马尾松毛虫腺苷酸转移酶基因全长cDNA（GenBank登录号：EF194157）,该基因无内含子,在烟草天蛾(M. sexta)、棉铃虫（H. armigera）、家蚕（B. mori）蜜蜂(A. mellifera)、绿蝇( L. cuprina)、果蝇(D. melanogaster )、蚊子(A. gambiae) 等昆虫间高度保守。基因组酶切后呈单一Southern杂交带。【结论】马尾松毛虫松毛虫腺苷酸转移酶基因高度保守,在基因组中单拷贝存在。     

枯草芽孢杆菌作为外源基因表达系统的研究进展

枯草芽孢杆菌是目前研究较为详尽的外源基因表达宿主,但由于受自身分泌蛋白酶多、构建的表达质粒不太稳定等因素影响,其应用受到一定的限制.文章综述了枯草芽孢杆菌基因组的特征、蛋白的分泌机制、重组表达质粒不稳定的原因,指出了枯草芽孢杆菌作为外源蛋白表达系统的瓶颈及今后的研究重点.     

AcNPV对棉铃虫的感染试验

棉铃虫穿刺接种病毒滴度为1×108,1×107,1×106,1×105,1×104,1×103,1×102 pfu的AcNPV液,在幼虫期或蛹期都能感染发病,且随着AcNPV病毒浓度的增加死亡率也提高;镜检死亡幼虫或死亡蛹都可见AcNPV病毒多角体.设计AcNPV特异引物,对试验区存活的棉铃虫成虫进行PCR检测,收集阳性个体的后代幼虫,饲养后进行PCR检测AcNPV,结果均为阴性,初步试验表明,AcNPV病毒能感染棉铃虫幼虫、蛹及成虫,但并不能垂直传播.