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脂质体法是一种传统的向哺乳动物细胞导入外源基因的方法,然而其转染效率受多种因素影响。本研究将从脂质体和质粒DNA量、转染暴露时间以及混合孵育时间等四方面进行探索,以寻找最佳的转染体系。试验结果表明最佳转染体系为:脂质体1.25μL、DNA 0.7μg、脂质体-DNA混合孵育0 min以及转染暴露6 h。随后我们用优化过的转染体系对新生广西巴马小型猪肾脏成纤维细胞进行转绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)操作,获得了(26.45±2.11)%的转染率,并以此为核供体经体细胞核移植技术成功构建表达GFP的广西巴马小型猪克隆胚胎,同时证实转基因克隆胚的体外发育能力比得上非转基因克隆胚。这为我们构建用于人类疾病研究的基因修饰广西巴马小型猪奠定了基础。 相似文献
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近年来,随着江西省赣南地区果树产业结构调整与转型,软枣猕猴桃‘红宝石星’先后被引进栽培。通过连续3年(2017-2019)对其在亚热带赣南地区生长适应性、物候期、果实品质等系统观测与研究,结果表明其植株生长势较强,四倍体,在田间未发现溃疡病等病害,具有较强的抗旱性和耐热性;伤流期在2月中旬,萌芽期在3月中旬,花期在4月上旬,花期长达6-7 d,8月上旬果实成熟,11月下旬开始落叶进入休眠期;该品种果实呈长椭圆形,果形指数为1.51;平均单果重为25.85 g,最大可达32.49 g;丰产性能较强,三年生猕猴桃亩产可达500 kg;果实可溶性固形物含量为16.60%,干物质含量为16.84%;可溶性糖含量较高,为17.30%,可滴定酸含量低,为0.83%,风味甜香;在亚热带赣南地区,该品种果实维生素C与花青苷含量积累较低,分别为107.43 mg/100g FW和0.21 mg/100g FW。综上所述,‘红宝石星’软枣猕猴桃在亚热带赣南地区表现出适应性强、抗性强、丰产、果实糖度积累显著增加、综合性状良好等特点,但其维生素C与花青苷含量较低,在赣南地区栽培时可采用适当遮阳、套袋等技术措施,有利于促进维生素C和花青苷含量的积累。 相似文献
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2009年是湖南实施退耕还林工程十周年。我曾工作过的湘西,是退耕还林重点地区。10年共完成退耕还林2678万公顷,其中退耕地造林13.18万公顷、荒山造林136万公顷,如今效益如何?邀三位“老湘西”故地重访,并约定,“每到一处。轮流写一首诗或词。记录观光的心得。” 相似文献
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本研究通过PCR方法从小鼠(Mus musculus)基因组中扩增出Oct4启动子的CR4区和CR1区,将其克隆到真核报告载体pEGFP-1,构建了携带Dct4启动子片段的小鼠生殖细胞特异性报告载体CR1,4-pEGFP-1.用该载体转染多种细胞,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(EGFP)在细胞中的表达情况,同时以半定量RT-PCR检测转染细胞中Oct4及其它生殖细胞特异性基因的转录情况.结果显示,GFP在小鼠胚胎干细胞、小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)和C2C12细胞中均不表达,而在P19细胞和睾丸细胞中表达.RT-PCR结果显示,Oct4在P19、睾丸细胞和生殖干细胞中特异性转录.这表明所构建的绿色荧光蛋白报告载体只在生殖细胞和多能生殖干细胞中内表达,该质粒可作为示踪生殖细胞的工具,同时也可以作为生殖干细胞多能性状态的一个监测标记. 相似文献