猪细小病毒PPV-SD1株VP2全基因的克隆及原核表达

为研究猪细小病毒PPV-SD1分离株的VP2蛋白的结构与功能,自行设计引物,通过PCR扩增的方法,获得VP2全基因,克隆到pMD18-T载体中进行测序,然后亚克隆到pET30a(+)表达载体中,构建并筛选出阳性重组子,标记为pET30a-VP2。将阳性重组质粒转化进RosettaTM宿主菌中,通过改变IPTG浓度、诱导温度和诱导时间,使重组蛋白获得表达,并确定最佳诱导条件为:IPTG终浓度1.0 mmol/L、诱导温度37℃、诱导时间为3~4 h。经SDS-PAGE和Western-blotting分析表明该重组蛋白相对分子量约为68 ku,具有良好的免疫学活性。     

一例鸡新城疫病RT-PCR的诊断

正鸡新城疫(Newcastle disease,ND)是由副粘病毒引起的禽类的高度接触性传染病。该病呈世界性分布,又称为亚洲鸡瘟~([1-3])。以高度呼吸困难、便稀、神经紊乱、粘膜和浆膜出血为主要特征~([1-3]),具有较高的发病率和致死率,对养鸡业危害严重。2018年4月,山东博兴县某鸡场发生了以呼吸困难、拉绿色粪便及腺胃出血等特征的疑似鸡新城     

嘉兴市推进优质稻米产业化的优势与对策

在粮食连年高产丰收的背景下,全国不少地方又出现了农民卖粮难和种粮效益低下问题。结合农业供给侧结构性改革,长江三角洲经济发达地区要大力推进优质稻米产业化,粮食生产要从"高产超高产模式"调整为"优质稳产模式",提高种粮经济效益,满足城乡居民消费升级后的市场需要。本文分析了浙北地区嘉兴发展优质稻米产业化的优势及存在的薄弱环节,并提出了"龙头企业带动、差异化政策支持、完整产业链"等针对性对策。     

绵羊肺腺瘤病毒SYBRGreenI实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

根据GenBank登录的绵羊肺腺瘤病毒gag基因序列设计1对特异性引物，经RT—PCR扩增出了276bp的片段。产物经回收与pMD18-TVector连接后转化到基因工程菌DH5a中，提取重组质粒，经PCR及测序鉴定后，作为阳性模板建立SYBRGreenI荧光定量PCR标准曲线，并做敏感性试验、特异性试验、重复性试验和临床检测应用。结果表明，标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系，产物Tm在82～82．5℃之间，灵敏度为2．22个拷贝／μL，特异性和重复性较好，较常规RT—PCR方法提前1h出检测结果。本试验建立了检测JSRV的SYBR—GreenI荧光定量PCR方法，为该病的早期快速诊断，并定量分析JSRV感染程度奠定了基础。     

创建测土施肥合作社 推进土肥社会化服务

测土配方施肥是当前农业土肥的中心工作,通过测土施肥,可培肥地力,改良土壤,是促进农业增产、农民增收的需要;是提高粮食综合生产能力,保障粮食安全的需要;是确保农产品质量安全、保护生态环境的需要。测土施肥工作是一项长期性,基础性、实用性、公益性工作。涉及面广,技术要求高。近年来,我们在省土肥站和市农经局的支持下,积极探索测土配方施肥新模式。     

羊源A型产气荚膜梭菌α毒素基因截短表达及其间接ELISA方法的建立与应用

基于GenBank登录的产气荚膜梭菌α毒素的氨基酸序列进行抗原决定簇及抗原性的分析,确定优势抗原区(101 aa～334 aa)。设计合成1对引物,以A型产气荚膜梭菌的DNA为模板,应用PCR方法扩增出702 bp大小的基因片段,克隆至表达载体pET32a(+)中进行原核表达。经亲和层析纯化的蛋白,Western blot鉴定相对分子质量约为43 kDa。以纯化的截短α毒素蛋白为包被抗原建立了间接ELISA方法,最适条件：2 mg/L重组蛋白100μL/孔、4℃过夜包被,血清样本1∶50稀释、37℃孵育40 min, HRP标记二抗1∶2 500稀释、37℃孵育40 min,底物37℃显色10 min后终止反应。使用建立的方法对226份临床羊血清进行检测,阳性率为71.68%。结果表明,该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于羊群疫苗免疫后的抗体监测及流行病学调查,为试剂盒的开发奠定了基础。     

产肠毒素性大肠埃希菌主要毒力因子及疫苗的研究进展

产肠毒素性大肠埃希菌是目前幼畜腹泻的主要致病因素.文章综述了在畜牧业中产肠毒素性大肠埃希菌的主要致病因子黏附素和肠毒素、EatA及其生化特性,并介绍了产肠毒素性大肠埃希菌的传统灭活苗及新型基因工程疫苗的研究进展.     

跨境电子商务发展对茶叶经济贸易的影响及对策研究

随着互联网大数据时代到来,信息技术的不断发展带动跨境电子商务在全球多地区多领域展开。电子商务在区域信息技术、物流网络及新媒体宣传等多方面革新,降低传统贸易成本和渠道限制。茶叶产品是我国传统出口经济作物,拥有悠久的历史和丰富的品种,世界茶文化沟通的密切使"中国茶"在世界市场上日益受到关注。因此,本文立足于茶叶经济贸易的跨境电商,探究跨境电商对茶叶经济贸易的潜在影响,为相关企业提供建议。     

蔬菜种子的网络营销市场控制

随着蔬菜种植面积日益扩大,从事蔬菜种子生产的公司越来越多、种子销售人员也随之增加,各类种子产品层出不穷,质量参差不齐。面对众多选择,蔬菜种植户越来越谨慎,相应地种子销售业务开展也变得较为困难。此种情况下,如何拨开乌云见明日呢?根据实际经验,提出"农村包围城市"的想法,即从提高种植户的认知和认同入手,打开市场、维护市场,最终顺利地实现品种推广。