猪δ冠状病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立与初步应用

本研究旨在建立一种灵敏、快速检测猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)的TaqMan荧光定量RT-PCR方法。参照GenBank中PDCoV有关基因序列,设计一对特异性引物用于扩增PDCoV M 基因。将测序正确的基因片段克隆入pMD18-T载体,构建重组质粒作为建立标准曲线的病毒模板。设计合成一对特异性引物与TaqMan探针,进行反应条件和反应体系的优化,建立快速检测PDCoV的TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法,并进行该方法的灵敏性、特异性与重复性验证。结果表明,该方法能有效扩增1.0×10^1 ~1.0×10^9 拷贝·μL^-1 的PDCoV标准质粒,建立的标准曲线呈现良好的线性关系。该方法的检测灵敏度为1.0×10^1 拷贝·μL^-1;对猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪伪狂犬病病毒等病原不发生交叉反应,具有很好的特异性;重复性试验结果显示变异系数(CV)小于1%,重复性良好。对2017—2018年期间收集的河南省不同猪场的100份腹泻病料进行检测,PDCoV的阳性检出率为23%(23/100),与PDCoV SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法的符合率为100%。人工感染PDCoV的仔猪,取攻毒后不同时间的粪便样品,应用本研究建立方法与常规RT-PCR方法对样品进行检测,TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的灵敏度远远优于常规RT-PCR。上述结果表明,本研究所建立的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法能够灵敏、特异地检测PDCoV,可用于临床PDCoV的检测。     

修正的Gash模型在大兴安岭北部山地樟子松林林冠截留中的适用性

为验证修正的Gash模型在大兴安岭北部山地樟子松林林冠截留中的适用性,基于2011年和2012年的气象、林分和降雨观测数据,利用修正的Gash模型对林冠的截留效应进行了模拟研究。结果表明,研究期内大气降雨总量为493.12 mm,林冠截留总量为122.65 mm,穿透雨总量为368.34 mm,树干茎流总量为2.13 mm。运用模型模拟的穿透雨量、树干茎流量和林冠截留量分别为378.07、4.02和111.03 mm,林冠截留模拟值低于实测值11.62 mm,相对误差为9.48%,实测值与模拟值有着较好的一致性,说明修正的Gash模型适用于对大兴安岭山地樟子松林林冠截留的模拟。     

长臂虾科几种重要经济虾类的繁殖生物学研究进展

长臂虾科(Palaemonoidea)虾类具有巨大的研究与开发价值,但其中较大部分虾类的繁殖生物学相关研究信息缺乏或不全面,通过整理长臂虾科几种重要经济虾类的繁殖生物学相关研究文献,总结其繁殖生物学特征、生殖系统发育、胚胎和幼体发育及繁殖相关调控基因的研究进展,并分析对比长臂虾科内各虾类以及长臂虾科与对虾科和螯虾科虾类...     

临猗苹果政策性保险投保现状及建议

山西临猗是中国特色农产品优势区,果业生产在临猗县经济发展中占有主导地位.灾害性天气频繁发生对产业发展带来不利影响,果业防灾减灾和抵御灾害风险的能力不强,影响果业稳定发展.为了更好地支持和服务"三农",保护果农生产,助推果业高质量发展,增加果农收入,稳定果业经济,临猗县稳步推进政策性苹果保险试点工作,逐步完善果业风险保障...     

经典方枳实薤白桂枝汤基准样品制备工艺研究

目的建立枳实薤白桂枝汤基准样品多指标成分含量测定方法,采用单因素方法优选煎煮工艺,在“尊古”前提下,实现标准化的生产工艺,保证物质基准的质量稳定。方法在参考古籍的基础上,结合现代的研究手段,以柚皮苷、新橙皮苷、厚朴酚、和厚朴酚为指标,建立基准样品HPLC含量测定方法,以加不加盖、浸泡时间、煎煮火候、煎煮时间、干燥方式5个因素为参数,以出膏率和指标性成分含量为评价指标进行综合评分,优选合理的工艺参数,并对最佳工艺进行工艺验证。结果枳实薤白桂枝汤基准样品最佳工艺参数为:取枳实、厚朴,加水1000mL,加盖煎煮,武火煮沸,文火煎至煎液体积为400mL,100目筛网过滤,煎液加入薤白、瓜蒌、桂枝,武火煮至3沸(1h),100目筛网过滤,得汤液约200mL,减压浓缩至100mL,冷冻干燥,即得。结论优选的制备工艺参数稳定可行,为枳实薤白桂枝汤颗粒剂的制备工艺研究提供参考。     

KASP标记技术在作物基因定位中的应用进展

单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)是基于下一代测序(next generation sequencing, NGS)发展起来的第三代分子标记,单个核苷酸的变异导致核酸序列出现多态性,具有遗传稳定性好、密度高和二等位基因型等特点,容易实现高通量和自动化检测。竞争性等位基因特异性聚合酶链式反应(kompetitive allele specific PCR,KASP)是一种基于SNP的无凝胶荧光聚合酶链式反应基因分型技术,已广泛应用于动植物遗传育种研究中。该研究从KASP技术在作物基因定位研究中的试验群体选择及具体应用策略2个方面,阐述了该技术在作物产量、品质和抗性等重要性状相关基因精细定位中的研究进展,并总结了其优缺点,提出了优化作物KASP分型技术体系和建立功能基因多态性位点KASP数据库等建议,进一步推广其应用,旨在为作物性状遗传调控研究提供参考依据,加快作物从传统的经验育种到精准育种转化。     

陕西汉中地区危害蔬菜的蓟马种类调查研究

为调查汉中地区危害蔬菜蓟马的种类,通过采用盘拍法于2018～2019年以汉中地区2区6县作为调查地点,对当地为害蔬菜的蓟马昆虫进行了采集,经鉴定,隶属于2亚目2科10属24种,其中,蓟马科Thripidae包括9属21种,管蓟马科Phlaeothripidae包括1属3种。根据调查结果,汉中地区葱科、豆科、十字花科、茄科的蔬菜受到蓟马的危害比较严重,其中端大蓟马Megalurothrips distalis为危害汉中地区蔬菜的优势种;本文提供了汉中地区蔬菜蓟马害虫分种检索表,及不同蔬菜上蓟马危害种类,为当地蔬菜蓟马的综合防治提供指导。     

不同生境对歪头菜和鸭儿芹光合生理的影响

为指导歪头菜和鸭儿芹推广应用时立地条件的选择提供理论依据,设置林下(Ⅰ)和林缘(Ⅱ)两种生境对歪头菜和鸭儿芹的光合速率、电子传递速率(ETR)、光能利用效率和水分利用效率等光合荧光参数的影响。结果表明,生境Ⅰ下歪头菜叶片的最大电子传递速率(ETR_max)及其对应的饱和光强均显著高于生境Ⅱ,分别为85.895和640.283μmol·m^-2·s^-1;生境Ⅰ下鸭儿芹叶片的ETR_max及其所对应的饱和光强也显著高于生境Ⅱ,分别为136.160和861.633μmol·m^-2·s^-1。同ETR对光强响应的拟合结果类似,与生境Ⅱ相比,生境Ⅰ下歪头菜叶片的最大光合速率(P_nmax)及其对应的饱和光强均显著高于生境Ⅱ,分别为9.001和695.318μmol·m^-2·s^-1;生境Ⅰ下鸭儿芹叶片的P_nmax及其所对应的饱和光强显著高于生境Ⅱ,分别为14.786和967.158μmol·...     

不同产区白芷遗传多样性和品质特征

【目的】明确不同产区白芷Angelica dahurica种源遗传差异特征,分析具有遗传差异的白芷种源在同圃栽培条件下的品质特征差异。【方法】应用相关序列扩增多态性(SRAP)分子标记分析不同白芷种源的遗传组成,以同圃栽培的不同种源白芷为材料,应用高效液相色谱法(HPLC)测定7种香豆素类化学成分,构建HPLC指纹图谱,进而分析不同种源的品质特征。【结果】非加权组平均法(UPGMA)聚类分析显示：在遗传相似系数为0.84处,部分河北产区的白芷种源与南方产区的白芷种源产生分离。同圃栽培下,仅应用7种香豆素类化学成分不能明确区分不同白芷种源,应用HPLC指纹图谱进行主成分分析(PCA)后,具有遗传差异的种源之间出现品质特征的区分。【结论】不同产区白芷种源遗传相似度较大,同圃栽培的部分浙江白芷种源的药材可以应用HPLC指纹图谱与其他产地种源进行区分。图3表4参20