单增李斯特氏菌actA基因的克隆及原核表达

利用PCR技术从单增李斯特氏菌中扩增出actA基因,将PCR产物纯化后克隆到pMD 18Tsimple vector中,成功构建出克隆载体pMD-18T/actA。以BamHⅠ和EcoRⅠ分别双酶切pMD-18T/ActA和表达载体pGEX-3X,将纯化的actA基因亚克隆到表达载体pGEX-3X。构建的重组表达载体pGEX-3X/ActA转化到E.coli BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE分析,可见约120 ku外源蛋白带,Western blot分析表明该蛋白可与单增李斯特氏菌多克隆抗体发生特异性反应。该研究为ActA的生物学特性和功能的研究及诊断试剂的研制奠定了基础。     

猪血清C_(1q)的提取及其抗血清制备

C_(1q)是补体经典途径中的第一成分的亚成分之一.制备特异性抗C_(1q)血清将有助于临床上多种疾病(如免疫复合物性疾病及自身免疫病等)的诊断和研究.C_(1q)本身也可用放射性同位素或酶标记后用于循环免疫复合物等的检测.因此,C_(1q)的纯化和抗血清制备在临床上具有一定意义.C_(1q)的纯化方法很多,常用的有DNA法、ED-TA法、层析法和亲和层析法,但各有优缺点.本实验将有关方法进行了改进,     

网状内皮组织增殖病病毒与马立克氏病病毒快速鉴别诊断

鸡群易发生网状内皮组织增殖病(RE)、马立克氏病(MD)、淋巴白血病(AL)等多种病毒的混合感染,金文杰等人[1]从66份疑似IBDV感染鸡的法氏囊的检查中,发现了免疫抑制性病毒二重和多重感染的普遍性.     

新城疫病毒F基因在新型杆状病毒表达系统中的表达及重组病毒的免疫原性

将新城疫病毒（四平株）F基因插入到pFastBac Ⅰ质粒中，构建了重组质粒pFF。pFF转化大肠杆菌DH10Bac后，F基因在助手质粒（helper plasmid)提供转座酶的情况下，通过转座进入Bacmid，构建了重组Bacmid(re-Bacmid)。在含有X－gal/IPTG、庆大霉素、卡那霉素和四环素的琼脂平板上，筛选白色菌落后，提取re-Bacmid转染Sf-9昆虫细胞。在昆虫细胞内，re-Bacmid经复制、表达、装配、形成重组杆状病毒，并表达F蛋白。经SDS－PAGE和Western-blot分析，表达的F蛋白的分子大小为63000，并证明在昆虫细胞内表达的蛋白能部分糖基化。表达的F蛋白约占细胞总蛋白的10％。动物试验证明，约建的重组杆状病毒具有良好的免疫原性。     

猪链球菌耐药性的检测

采用药敏纸片扩散法、微量稀释法及双纸片扩散法对分离自长春地区的22株猪链球菌进行了耐药性测定。结果表明，82％～100％的菌株对大环内酯-林克酰胺-链阳菌素B(MLSB)类、四环素类、氟喹诺酮类、氯霉素类、氨基糖苷类耐药，但对青霉素和氨苄青霉素不耐药，对利福平的耐药率为5％；82％的菌株为多重耐药(MDR)；91％的菌株为MLSB型耐药，其中构成型耐药占95％。除青霉素外，其他5种抗生素的MIC50和MIC90高度集中(≥128／μg／mL)。     

鸡痘病毒282E_4株基因组2.9kbBamHI片段的序列测定与分析

对我国鸡痘病毒 ( FPV) 2 82 E4株基因组 2 .9kb Bam HI片段进行了序列测定与分析。结果表明 ,该片段全长 2 92 3 bp,A T含量为 72 .0 8%,含 6个完整的开放读码框架 ( ORF)和 2个不完整的 ORF,最大的ORF所编码多肽的相对分子质量为 2 4 60 0。在 2个 ORF的上游存在痘苗病毒晚期启动子的保守序列TAAAT,在 6个 ORF的下游和 2个 ORF的编码区内存在痘苗病毒早期转录终止信号 T5NT。把该片段的核苷酸序列和每个 ORF所编码的氨基酸序列分别对 EMBL核酸序列库和 SWISS-PROT蛋白质序列库进行了同源性搜索 ,未发现同源性片段     

应用抗多肽抗体鉴别新城疫病毒强弱毒株

在克隆我国流行的新城疫病毒（ＮＤＶ）强毒株Ｆ４８Ｅ８株、四平株及弱毒株长春株、Ｖ４株和ＨＮ和Ｆ基因并进行测序的基础上,针对我国流行的ＮＤＶ强毒株Ｆ蛋白前体（Ｆ０）的Ｆ２片段的特异结构,人工合成特异性多肽,将其与小牛血清白蛋白（ＢＳＡ）化学偶联制备成全抗原,免疫小鼠制备出抗多肽血清。经ＥＬＩＳＡ检测,该抗体与ＮＤＶ强毒株呈强阳性反应,而与鸡痘病毒、鸡传染性法氏囊病病学、ＮＤ 弱毒株长春株和Ｖ４株呈阴     

马铃薯不同种植方式产量效益比较

在海原县中部干旱带不覆膜种植马铃薯的情况下采用起垄种植,是提高稀植作物产量的一条有效途径。     

口蹄疫病毒2B基因的生物信息学分析及其siRNA真核表达系统的建立

应用RT-PCR方法扩增口蹄疫WLF株2B基因,将其克隆到pMD18-T载体中,测序后进行序列保守性分析和RNA二级结构分析,筛选适合作为siRNA的靶序列。根据siRNA表达载体要求,合成shRNA表达模板,连接到含有U6启动子的真核表达载体中,建立了靶向口蹄疫2B基因的真核表达系统,为进一步研究靶向2B基因的RNA干扰对口蹄疫病毒的抑制作用奠定了基础。     

淮安市乳苗越冬小麦高产应变栽培技术

本文总结了淮安市乳苗越冬小麦在生长发育、个体性状、群体性状、综合抗性等方面的变化,提出了以应用适宜品种、精细播种、增加播量、减氮后移、精心管理为核心的乳苗越冬小麦应变高产栽培技术。