绵羊肺炎支原体TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

为建立一种快速检测绵羊肺炎支原体(Mo)的检测方法,本研究根据GenBank登录的Mo Y-98株(KR021380.1)黏附素基因p113基因序列设计1对特异性引物和探针,建立了针对Mo的TaqMan荧光定量检测方法。结果显示,该方法可以特异性检测Mo,对丝状支原体山羊亚种、山羊支原体山羊肺炎亚种、莱氏无胆甾原体及羊传染性脓疱病毒(ORFV)等羊常见病原扩增结果均为阴性;该方法最低检测限为10拷贝/μL;组内和组间变异系数均小于2%;采用该方法对96份临床样品进行检测,结果 Mo的阳性率为67.7%(65/96),比常规PCR法及支原体分离鉴定法更加敏感。以上结果表明本研究建立的Mo TaqMan荧光定量PCR方法可以用于Mo的准确快速检测及羊支原体性肺炎的诊断和流行病学调查。     

β-胡萝卜素-15,15′-加氧酶在利鲁牛各组织部位的表达

本试验以利鲁牛(利木赞牛×鲁西黄牛)为研究对象,通过免疫组织化学、蛋白质印迹法(Western blot)和荧光定量PCR等分子手段检测了BCMO1在利鲁牛肝脏、十二指肠、不同脂肪组织等部位的表达。免疫组织化学和Western Blot检测结果均显示,BCMO1在肝脏、十二指肠、心脏、肾脏和肺脏中具有较高的表达量,在脾和瘤胃内未表达;不同部位脂肪组织内BCMO1相对表达量差异较大,其中在Western Blot检测中BCMO1在皮下脂肪仅有极少量表达,但免疫组织化学结果显示BCMO1在不同脂肪组织中的表达量相当。荧光定量PCR检测结果显示,BCMO1除在十二指肠具有极高的表达量外,在肾脏、心脏、牛皮的表达量均高于肝脏。以上结果对深入研究β-胡萝卜素在肉牛体内的代谢机制提供了科学支撑。     

山羊支原体山羊肺炎亚种SYBR GreenⅠqRT-PCR检测方法的建立

山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae,Mccp)是山羊传染性胸膜肺炎(contagious capri pleuropneumonia,CCPP)的病原。本研究根据GenBank公布的Mccp F38株(No.LN515398.1)arcD(MCCPF38_00114)基因序列设计1对特异性引物,建立了针对Mccp的SYBR GreenⅠ qRT-PCR方法。结果显示,该方法能特异性检测Mccp,与丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp.capri,Mmc)、副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis,HPS)、绵羊肺炎支原体(Myplasma ovipenumoniae,Mo)、羊传染性脓疱毒(Orf virus,ORFV)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)、大肠杆菌(Escherichia coli,Ec)等羊常见病原均无交叉反应,表明该方法具有良好的特异性;该方法的最低检测限为279 copies/μL,组内和组间变异系数均小于1%,说明该方法灵敏度高、重复性好。本研究建立的检测Mccp arcD基因的SYBR GreenⅠ qRT-PCR方法为CCPP的临床早期诊断及定量分析Mccp感染水平提供了更准确的方法。     

利用TSPY基因鉴定奶牛早期胚胎性别的研究

TSPY(testis-specific protein)是Y染色体上特异的基因。公牛Y染色体上的TSPY基因的拷贝数达200个。本研究主要探讨利用TPSY基因鉴定胚胎性别的可能性。利用TSPY特异引物,通过PCR技术扩增牛血样DNA的结果为公牛血样均为阳性,母牛为阴性。结果表明,TSPY基因是一个很好的雄性特异标记。PCR扩增TSPY特异序列鉴定牛性别的灵敏度试验表明,DNA的最低需要量为20 pg/μL,提示,TSPY特异基因具有鉴定牛早期胚胎性别的可能。     

农机社会化服务是发展农业的重要保证─—关于长沙市农机社会化服务体系的调查

农机社会化服务是发展农业的重要保证─—关于长沙市农机社会化服务体系的调查关于我市建立农机社会化服务体系的情况如何？带者这个问题，我们从去年１０月初至１１月底对我市农村进行了一次专题调查。调查证明：我市衣机化社会服务体系发展快、作用大、效果好，初步形成...     

夹道子水库水文自动测报系统站网规划

在水利、水电工程管理运用中,可通过降雨径流预报洪水。有了准确及时的预报,管理部门便可根据水文预报合理安排调度运用方式,以便在洪水到来之前作好防汛抢险的准备,必要时有计划地采取蓄洪、分洪措施,使洪水灾害减到最低程度。     

福建山羊溶血性曼氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析

【目的】对福清一山羊养殖场发生的山羊肺炎病原进行确诊,为福建山羊溶血性曼式杆菌的分离鉴定及检测提供研究基础。【方法】对剖检采取的组织进行细菌分离培养,随后对溶血性曼氏杆菌、羊口疮病毒、绵羊肺炎支原体和丝状支原体簇等羊常见呼吸道病原进行PCR检测,对分离菌进行16S rRNA基因克隆测序,并对分离株进行药物敏感性研究。【结果】细菌分离培养结果显示:从病死羊肺脏中分离到1株细菌;PCR检测结果显示,除溶血性曼氏杆菌有扩增条带外,未检测到其他病原;16S rRNA测序结果显示:分离株16S rRNA基因序列与GenBank上公布的其他溶血性曼氏杆菌的同源性为97.1%～100.0%,与溶血性曼氏杆菌美国D171参考株同源性高达100%;以上结果表明分离菌为溶血性曼氏杆菌,命名为FJ-FQ2018。药物敏感性试验表明分离株对氟苯尼考、恩诺沙星、头孢噻吩、头孢唑啉、环丙沙星等高敏,对氨苄西林中敏,对多粘菌素B、林可霉素低敏。【结论】福建某养殖场引进的山羊发生肺炎后经病原分离鉴定确诊为溶血性曼氏杆菌感染,分离菌株对8种抗生素的耐药性存在差异。     

肉用杂交犊牛小肠上皮细胞的分离培养和鉴定

本试验旨在建立肉用杂交犊牛小肠上皮细胞分离培养和鉴定的方法,为研究犊牛小肠上皮细胞营养吸收、免疫调控及肠道屏障功能提供原代细胞培养模型。选用新生未吮乳的肉用杂交犊牛的空肠组织,应用胶原酶Ⅰ和中性酶联合消化法对小肠上皮细胞进行分离,应用相差消化法和相差贴壁法对犊牛小肠上皮细胞进行纯化。通过细胞形态学观察、生长曲线、免疫荧光及染色体核型分析等方法来鉴定细胞。结果表明:1)应用胶原酶Ⅰ和中性酶联合消化法得到的犊牛小肠上皮细胞生长状况良好,经纯化后得到90%以上纯度的犊牛小肠上皮细胞,并稳定传代至10代以上; 2)犊牛小肠上皮细胞的生长曲线为"S"形,符合细胞增殖规律; 3)免疫荧光鉴定犊牛小肠上皮细胞特异性表达角蛋白13和绒毛蛋白; 4)透射电镜观察发现犊牛小肠上皮细胞边缘有微绒毛结构,细胞与细胞之间的紧密连接结构清晰可见; 5)染色体核型分析显示细胞内含有60条染色体,形态正常,呈二倍体核型。综上所述,应用胶原酶Ⅰ和中性酶联合消化及相差贴壁纯化成功得到犊牛小肠上皮细胞,为研究犊牛小肠上皮细胞营养物质吸收、免疫调控和肠道屏障功能提供了细胞素材。     

玉米青贮和黄贮对奶牛饲喂效果的研究

为科学利用秸秆提供有效数据并起到实验示范带动作用,用玉米秸秆青贮与玉米秸秆黄贮进行奶牛饲喂对比试验。试验设为3组,分别为青贮组、黄贮＋青贮组和黄贮组,试验期为60天。结果表明：TMR日粮在能量、蛋白水平相近的情况下,玉米秸秆青贮组和玉米秸秆黄贮组,产奶量和乳品质差异不显著,获利基本相同。饲喂青贮加黄贮组,无论是产奶量、乳品质,还是获利在3个组中都是最低的。     

饲粮油菜籽添加水平对肉牛生长性能、瘤胃发酵及血液生化指标的影响

【目的】旨在探讨饲粮中不同油菜籽添加水平对肉牛生长性能、瘤胃发酵及血液生化指标的影响,从而为肉牛育肥过程中合理使用油菜籽提供依据。【方法】试验采用单因子完全随机设计,选取18月龄、平均初始体重为（447±35.67）kg的西门塔尔杂交公牛40头,依据饲粮中油菜籽含量随机分为对照组（0%）、低菜籽组（8.7%）、中菜籽组（17.4%）、高菜籽组（26.0%）,预饲期10 d,正试期90 d。试验结束后称重,计算饲料成本,并采集瘤胃液和血液分别用气相色谱法、比色法和放射免疫法测定瘤胃液挥发性脂肪酸、氨态氮和血清中三碘甲状腺原氨酸酸（T3）、甲状腺素（T4）、促甲状腺素（TSH）。用SAS9.2软件中一般线性模型对试验数据进行方差分析。【结果】试验结束各组牛末重之间差异不显著（P＞0.05）,中菜籽组日增重最高,为1.33 kg•d-1,显著高于高菜籽组（P＜0.05）,比对照组和低菜籽组分别高6.40%和7.25%;高菜籽组干物质采食量最高,对照组最低,但各组之间差异不显著（P＞0.05）。随油菜籽添加水平的提高,饲料成本降低（P＞0.05）;中菜籽组料重比最低,高菜籽组最高,各组之间差异不显著（P＞0.05）;不同油菜籽添加水平不显著影响瘤胃液pH、氨态氮以及挥发性脂肪酸的含量（P＞0.05）,但随油菜籽添加水平的提高瘤胃液中氨态氮、丁酸和乙酸/丙酸的含量呈降低的趋势,丙酸呈上升趋势,总的挥发性脂肪酸先上升后降低;血清中三碘甲腺原氨酸（T3）和甲状腺素（T4）各组之间差异不显著（P＞0.05）,中菜籽组和高菜籽组血清中促甲状腺素（TSH）显著低于对照组（P＜0.05）,与低菜籽组差异不显著（P＞0.05）。饲粮油菜籽添加水平对血清中谷丙转氨酶、肌酐、胆固醇含量影响差异不显著（P＞0.05）,对照组和低菜籽组的谷草转氨酶活性显著低于中菜籽组和高菜籽组（P＜0.05）,中菜籽组尿素氮水平显著低于对照组（P＜0.05）,与其它各组差异不显著（P＞0.05）。【结论】添加不同水平的油菜籽对瘤胃发酵参数无显著影响,肉牛育肥期间饲粮油菜籽添加到17.4%时日增重不受影响,饲粮中添加油菜籽可加重甲状腺和肝脏的代谢负担。