分子生物学技术在茶树科学研究中的应用与展望

茶树[Camellia sinenesis（L．）O．Kuntze]源于中国,兴在亚洲,传向世界,有着重要的社会、生态和经济价值。茶叶是我国传统的出口商品,茶产业是我国丘陵山区农业产业结构调整和高效农业建设的一个重要组成部分,也是效益明显的优势产业和特色产业。在传统农业向现代农业转化过程中,现代高新技术显现出越来越强的支撑作用。最近十多年来,茶树分子生物学研究己成为茶树科学研究中最活跃和进展最快的一个领域。充分利用我国丰富的优异茶树种质资源,用现代生物技术构建茶树育种的新技术平台,研究茶树抗性特性,分析茶树功能基因的作用机理,     

枯草芽孢菌株TL2对茶轮斑病的防病机制

枯草芽孢菌株（Bacillus subtilis）TL2能产生多种外分泌抗菌蛋白,抑制茶轮斑病菌（Pestallozzia theae）的菌丝生长及其分生孢子的形成和萌发。另外,菌株TL2通过改变茶树体内活性氧代谢相关酶系如SOD等的活性,以调节茶树受轮斑病菌侵染后活性氧的代谢平衡,同时诱导茶树产生抗性酶系如PAL和β-1,3-葡聚糖酶,以限制茶树轮斑病菌的扩展。     

苏云金芽胞杆菌不同分化发育时期总RNA的有效分离

将苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis,简称Bt）8010在LB液体培养基30℃、230r／min下振荡培养,通过生长曲线测定（OD600）和显微镜观察,分别在8、30、39、42h和46h取样得到营养生长期、孢子囊期和裂解期样品来提取总RNA。通过对试剂提取方法的改进,找到一种方法可以很有效的提取Bt3个不同分化发育时期（营养生长期、孢子囊期和裂解期）的总RNA。提取的总RNA质量很好,可以进行cDNA合成、RT-PCR和转录组学研究等下游实验。     

辣椒内生细菌的分离及拮抗菌的筛选

对健康辣椒植株体内的内生细菌及拮抗菌进行了分离筛选。结果表明 ,不同品种、部位及种植地 ,内生细菌的数量有所不同 ,品种间内生细菌的数量变化为 2 83× 1 0 3 ～ 1 346×1 0 4cfu/g(FW) ;各品种以叶片中内生细菌的数量最多 ,其次为根 ,再次为茎 ,果最少 ;不同种植地中 ,前作为水稻田种植辣椒叶片中内生细菌的数量比旱地种植的多 ,而根、茎、果中内生细菌的数量正相反。拮抗、防病测定表明 ,1 0 8株辣椒内生细菌中 ,有 2 8 7%的菌株对香蕉枯萎菌和黄瓜枯萎菌有拮抗作用 ;来自辣椒叶片和茎杆内的BS 2和BS 1两菌株 ,对 1 3种植物病原真菌有较强和稳定的拮抗作用 ,其中对辣椒炭疽病有 57 34%～ 94 0 8%的防病效果 ,并可以在辣椒体内定殖。经鉴定该两菌株为枯草芽孢杆菌。     

从稻谷上分离、筛选用于拮抗水稻白叶枯病的泛菌

从福州、闽侯、建瓯等地采集的稻谷样品中分离得到63个分离物，经生理生化测定结果表明，其中有18个为泛菌属（Pantoea）菌株，通过泛菌属种间鉴别测试，将18个泛菌菌株鉴定到种，做所有泛菌菌株对水稻白叶枯病菌（Xanthomonas oryzae pv.oryzae）的拮抗筛选，得到拮抗效果好的菌株DAT4（分散泛菌Pantoea dispersa）和FDQ4（成团泛菌Pantoea agglomerans）。     

越冬期茶树叶片生理指数分析及抗寒种质材料的筛选

本文以叶片解剖结构指数较高的30份种质材料为研究对象,测定和分析它们的叶片生理指标和田间冻害发生程度。结果表明,30份种质材料的质膜相对透性（X1）、可溶性糖含量（X2）、可溶性蛋白含量（X3）和冻害发生程度都存在显著差异;叶片生理指数（Y1）的计算公式为Y1=0.45X1+0.3X2+0.25X3;冻情指数（Y2）的逐步回归方程为Y2=2.799+0.050X1-0.401X2-1.850X3;30份种质材料被聚类成三个不同特点的类群,并且可以判断第一、二类群中的19份材料具有很强的抗寒能力。茶树叶片生理的综合评价体系,可应用于茶树幼苗期抗寒性的鉴定,从而提高抗寒种质材料的筛选效率。     

越冬期茶树叶片生理指数分析及抗寒种质材料的筛选

本文以叶片解剖结构指数较高的30份种质材料为研究对象,测定和分析它们的叶片生理指标和田间冻害发生程度。结果表明,30份种质材料的质膜相对透性（X1）、可溶性糖含量（X2）、可溶性蛋白含量（X3）和冻害发生程度都存在显著差异;叶片生理指数（Y1）的计算公式为Y1=0.45X1+0.3X2+0.25X3;冻情指数（Y2）的逐步回归方程为Y2=2.799+0.050X1-0.401X2-1.850X3;30份种质材料被聚类成三个不同特点的类群,并且可以判断第一、二类群中的19份材料具有很强的抗寒能力。茶树叶片生理的综合评价体系,可应用于茶树幼苗期抗寒性的鉴定,从而提高抗寒种质材料的筛选效率。     

氯氰菊酯降解菌Y-3的诱变育种与筛选

以从菠菜叶片内分离到对氯氰菊酯降解率较高的菌株Y-3（Corynebacterium vitarumen）为出发菌,进行化学诱变和紫外诱变。结果显示,DES对菌株Y-3的最佳诱变条件为2% 60min、3% 40min和4% 20min,紫外线对对菌株Y-3的最佳诱变条件为5cm 8min、10cm 20min和15cm 30min。通过诱变与筛选,最终获得13株突变株,与野生菌株对比,7株突变株对氯氰菊酯的降解率有明显的提高,其中有3株突变株具有一定的遗传稳定性。     

生防菌株TL2的菌剂研制及大田防病试验

本文以一株能在茶树体内内生定殖、对茶叶斑病防病效果好的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）菌株TL2为研究对象,优化该菌株的发酵条件和生产工艺,筛选它的适宜助剂,测定它在大田对茶叶斑病的防病效果。结果表明：该菌株的最佳产朊条件为氮源（蛋白胨）、培养温度（35℃）、碳源（蔗糖）、培养时间（72h）、初始pH（6.6）和250ml装液量（50ml）。它的最佳固态发酵工艺为氮源（豆饼粉）、碳源（麸皮)、含水量（25ml）、接种量（4%）、培养温度（35℃）和初始pH(7.0)。筛选得到该菌剂的4种良好载体,碳酸钙、高岭土、滑石粉和硅藻土等,1种良好的润湿分散剂,木质素磺酸钙,以及2种优良的紫外保护剂,腐植酸和糊精。该菌剂（孢子粉可湿性粉剂）在田间对茶叶斑病有较好的防治效果,防效达70%以上,与对照药剂多菌灵的防治效果相当。     

不同种植年限酸化果园土壤微生物学性状的研究

土壤微生物学指标能够反映土壤质量,是敏感的土壤质量指标。本文以山东果园土壤急剧酸化为背景,研究了山东5个不同种植年限酸化果园(5a～30a)土壤pH值、土壤的微生物数量、土壤微生物量和酶活性的变化,分析果园土壤微生物学性状与土壤pH值的相关性。结果表明:随着种植年限的延长,除真菌、磷酸酶活性只在一定范围内呈现波动趋势外,土壤pH值与微生物数量,土壤微生物量、土壤酶活性呈现不同程度下降。其中酸化果园土壤pH值与微生物量碳、蔗糖酶、过氧化氢酶之间都存在着极显著相关,相关系数分别为0.92、0.97和0.94。土壤微生物数量、土壤微生物生物量、土壤酶活性之间也存在着某种关联,集中体现在土壤酶活性之间及与土壤微生物生物量之间。