水稻土溶液中Se(Ⅵ)的价态转化条件研究

为了有效利用土壤硒，以紫潮泥和红黄泥为试验材料，在pH分别为7.5和6.5条件下研究了两种土壤在淹水原原培养和氧化培养过程中Se(Ⅵ）价态转化的条件，结果表明：随着土壤溶液Eh值的变化。Se(Ⅵ）逐渐向有机硒，Se(Ⅵ）转化；Se(Ⅵ）与Se(Ⅵ）相互转化体系的临界电位范围为216.6-74.1mV，同时土壤溶液pH值从6.5上升到7.5，临界电位下降50.1mV;Se(Ⅵ）与Se(Ⅵ）相互转化的氧化还原体系在土壤重要的氧化还原体系序位中处于NO3^-－N体系，锰体系之后，大致与铁体系平行。     

实时荧光定量环介导等温扩增方法检测马铃薯黑胫病菌

正由马铃薯黑胫果胶杆菌Pectobacterium atrosepticum引起的生产上日趋严重的马铃薯黑胫病,其初侵染来源是带菌种薯(Mattinen et al.,2008),种薯带菌数量直接决定田间病害发生的严重程度。因此,播种前明确种薯中马铃薯黑胫果胶杆菌的含量至关重要。目前国内外应用实时荧光定量PCR方法对病原菌进行定量检测已有很多(娄兵海等,2014),但还未见利用实时荧光定量环介导等温扩增     

双重PCR技术检测马铃薯环腐病菌和黑胫病菌方法的建立

 【目的】利用双重PCR技术快速检测马铃薯环腐病菌（Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus）和黑胫病菌（Pectobacterium atroseptica）。【方法】根据GenBank上发表的马铃薯环腐病菌pCS1质粒上纤维素酶A基因序列,对比近缘种及马铃薯上几种重要病原菌的核苷酸序列,设计并合成了1对特异性引物CMS1/CMS2,将设计的引物与已发表的PCR检测马铃薯黑胫病菌特异性引物ECA1f/ECA2r结合,经过条件优化后,建立了双重PCR体系。【结果】利用引物CMS1/CMS2扩增出了1条913 bp的马铃薯环腐病菌特异性条带。检测灵敏度在DNA水平上达100 fg•μL-1,在细菌数上达105 CFU•mL-1。利用双重PCR体系对马铃薯环腐病菌和黑胫病菌进行扩增,可获得913和690 bp的2条特异性条带。检测灵敏度在DNA水平上达600 fg•μL-1,在细菌数上达5×105 CFU•mL-1。【结论】成功建立了双重PCR检测马铃薯环腐病菌和黑胫病菌技术体系,该技术能够同时快速可靠地检测出马铃薯环腐病菌和黑胫病菌。     

湖南省旱地土壤硫素状况及作物施硫效应

对湖南省127个旱地表土(0~20 cm)和56个旱地底土(20~40 cm)进行了有效S含量分析及花生和油菜施S效应的田间试验。结果表明:湖南省旱地土壤有效S含量表土低于底土;表土有效S含量低于30mg/kg的土样所占的比例为49%,低于16mg/kg的土样所占的比例为21%;旱地土壤有效S含量和缺S频率因成土母质而异,河流冲积物发育的土壤有效S含量最低(16.4?.80 mg/kg),S含量低于16mg/kg的频率最高(64%),其次为紫色砂叶岩发育的土壤(有效S含量为28.3?.21mg/kg,S含量低于16mg/kg的频率为37%)。花生、油菜施S效应因S肥类型和S肥用量而异,单作时S的增产量和经济效益均以SSP为好,S肥用量为30kg/hm2的经济效益较高;轮作时连续施S,S的经济效益以SSP最好,S95和ES次之,最差的数石膏,花生施S效益为油菜的1.8~11.4倍;S肥类型和S肥用量不同,S残效不同。此外,施用S肥还能够增加花生、油菜的吸N量和粗脂肪量,提高N肥利用率,但S对花生吸N量和粗脂肪的累积效果好于油菜。     

致病疫霉NLP家族基因PITG_10839的克隆和功能分析

【目的】分析致病疫霉（Phytophthora infestans）NLP（Necrosis- and ethylene-inducing like proteins）家族基因PITG_10839的致坏死功能及所编码蛋白的活性位点对其功能的影响。【方法】以PITG_10839作为研究对象,选inf1作为正对照,以致病疫霉菌株HK09-19的总RNA为模板,通过RT-PCR获得基因的cDNA全长序列。将所得cDNA与表达载体pBI121连接,构建所选基因的重组表达载体,并采用冻融法将其转入农杆菌LBA4404中。利用农杆菌介导的瞬时表达体系在本生烟（Nicotiana benthamiana）中对PITG_10839的表达和功能进行分析。利用over-lap PCR方法定点突变基因PITG_10839的活性位点,同时构建活性位点突变后的重组表达质粒,并通过农杆菌注射接种本生烟来研究各活性位点在基因坏死功能中所起的作用。通过荧光定量PCR分析致病疫霉游动孢子侵染马铃薯叶片后不同时期PITG_10839的表达模式。【结果】获得了PITG_10839和inf1的全长cDNA,分别为405及357 nt。同时,成功构建了PITG_10839和inf1的真核表达载体pBI121-10839和pBI121-inf1,并成功转入农杆菌。将含有重组质粒pBI121-10839的农杆菌注射接种本生烟,5 d后接种叶片开始逐渐黄化,7 d后叶片出现典型的皱缩坏死症状。然而含有对照重组质粒pBI121-inf1的农杆菌在注射接种3 d后,本生烟叶片便开始出现萎蔫,5 d时则出现坏死症状,7 d时坏死症状严重。进一步对PITG_10839编码蛋白的活性位点进行突变,发现D9A、E22A和D20A 3个氨基酸位点的突变使基因PITG_10839所编码蛋白的致坏死功能丧失,叶片仅出现轻微的黄化现象,然而H17A位点氨基酸的突变对该基因的致坏死功能没有影响,注射接种7 d后,仍然可以使本生烟叶片出现皱缩坏死的症状。同时,荧光定量PCR表明,致病疫霉游动孢子接种后不同侵染阶段PITG_10839的表达呈现出了不同水平的增加。接种后12 h至36 h,表达量变化水平稳定,增加了20倍左右;48 h时其表达量急剧上升至350倍左右;随后表达量开始下降,但仍高于接种36 h时的表达水平。【结论】致病疫霉NLP家族基因PITG_10839具有致使烟草叶片坏死的功能,并确定了影响该基因所编码蛋白致坏死功能的氨基酸活性位点。     

南阳市高油酸花生新品种比较试验研究

花生是南阳市的重要经济作物,近年来种植面积逐年增加,但是95%以上是普通花生,因其亚油酸含量高、易酸败、储存期短,越来越不能满足市场和消费的需求。根据河南省推进"四优四化"为重点抓手的农业供给侧结构改革的要求,引进和推广高营养、耐储存、高油酸花生品种,满足人们对高端绿色健康食品的需求已迫在眉睫。本试验拟通过引进近几年育成的高油酸花生新品种,鉴定其丰产性、抗病性、适应性及综合表现,为选择适宜南阳市种植推广的高油酸花生新品种提供科学依据。     

马铃薯晚疫病菌抗甲霜灵的SCAR标记

建立马铃薯晚疫病菌抗甲霜灵SCAR(sequenced characterized amplified region,序列特征扩增区域)标记,以马铃薯晚疫病菌对甲霜灵高抗菌株HD01-3和对甲霜灵高感菌株DK98-1为亲本,通过无性单游动孢子分离和有性杂交获得菌株HD01-3无性后代群体、菌株DK98-1无性后代群体以及F1代分离群体,以此为试验材料,利用BSA法(bulked segregant analysis,分离群体分组分析法)构建抗感基因池对后代菌系的甲霜灵抗性进行RAPD(random amplified polymorphic DNA,随机扩增多态性DNA)分析。从178条RAPD随机引物中找到一条特异性引物S2054,其可以扩增出一个与晚疫病菌对甲霜灵抗性相关的遗传标记,将该特异条带回收、克隆、测序,发现此标记大小为457bp,根据测序结果设计特异PCR引物,用于扩增抗感基因池,成功地将特异RAPD标记转化为SCAR标记。初步建立了马铃薯晚疫病菌抗甲霜灵SCAR标记,辅助监测晚疫病菌对甲霜灵的抗性。     

5种杀菌剂对马铃薯晚疫病田间防效比较

为筛选防治马铃薯晚疫病经济有效的药剂,测定了5种杀菌剂对马铃薯晚疫病的防治效果。结果表明,5种杀菌剂对马铃薯晚疫病均有不同程度的防效。其中,烯酰·唑嘧菌和氰霜唑对马铃薯晚疫病防控效果最佳,第5次施药后7d的防效分别为94.5%和94.1%;其次为丁子香酚和唑醚·代森联,防效分别为88.7%和76.1%;苦参碱防效较差,仅为23.7%。供试的5种杀菌剂中,氰霜唑和烯酰·唑嘧菌处理的防效和增产率均较高,建议可在生产上大面积推广使用。     

马铃薯晚疫病菌的常规研究方法

马铃薯晚疫病菌很难分离培养并得到纯菌株，本文根据作者8近年的工作经验总结出了马铃薯晚疫病菌的一般研究方法，主要内容包括马铃薯晚疫病菌的症状识别，马铃薯晚疫病标样的采集方法，马铃薯晚疫病菌的分离纯化方法，马铃薯晚疫病菌的形态鉴定，马铃薯品种对晚疫病的抗病性评价方法等。     

淹水土壤有效态硒提取剂的比较研究

采集几种肥力水平与含硒量差异较大的土壤连续两季（次）盆栽水稻,以植株含硒量和吸硒量作参比标准,对６种提取剂所提取的有铲态硒作相关分析,结果表明,提取剂与水稻植株提取量的相关系数均达到显著或极显著水平的提取剂有水和０．０３ｍｏｌ／ＬＮＨ４Ｆ－０．０２５ｍｏｌ／ＬＨＣｌ;均未达到显著水平的取剂为０．２ｍｏｌ／ＬＫ２ＳＯ４,除第一季（次）水稻植株的吸硒量外,０．５ｍｏｌ／ＬＮａＨＣＯ３和ＡＢ－ＤＴＰＡ与