蓝舌病1型病毒VP2蛋白的原核表达及免疫反应性分析

试验旨在研究蓝舌病1型病毒（bluetongue virus serotype 1,BTV-1） VP2蛋白体外表达产物免疫反应性。根据已发表的BTV-1 Y863毒株L2基因序列设计合成特异性BTV-1 PCR引物,通过RT-PCR方法扩增L2基因,将纯化的L2基因克隆至pEASY-Blunt E1表达载体,对重组质粒进行鉴定,将阳性重组质粒L2克隆至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞进行表达,对获得的纯化的BTV-1 VP2重组蛋白进行Western blotting、ELISA、阻断ELISA分析。结果显示,BTV-1 VP2蛋白在pEASY-Blunt E1载体上以包涵体形式表达,通过Ni-NTA亲和层析,160和200 mmol/L咪唑是洗脱BTV-1 VP2蛋白表达产物的最佳浓度。纯化获得N末端携带多聚组氨酸标签的BTV-1 VP2重组蛋白,分子质量约105 ku,Western blotting、ELISA、阻断ELISA结果显示,重组BTV-1 VP2蛋白能与BTV-1型特异性抗体发生特异性结合,且此结合能被BTV-1阻断。本试验结果表明,通过原核表达载体pEASY-Blunt E1表达的BTV-1 VP2重组蛋白具有良好的免疫反应性,为BTV-1 VP2蛋白型特异性表位定位研究奠定了基础。     

应用qRT-PCR方法快速定量蓝舌病抗原的研究

在疫苗生产中需要对培养病毒的有效抗原数量进行定量,对其一般采用TCID50测定或噬斑滴定的方法。这些传统方法的缺点是耗时、重复性差异较大。本研究采用q RT-PCR检测蓝舌病病毒含量,并用准确滴定噬斑单位的蓝舌病病毒作为对照,比较待检样品和对照的Ct值,通过线性方程计算待检样品的病毒含量。对7个独立样品的检测结果表明,该方法的准确性和重复性均高于噬斑分析方法,并且可在蓝舌病病毒培养过程中实时检测病毒含量。该方法操作简单、快捷,可在病毒生产过程即时检测病毒含量,在蓝舌病疫苗生产中具有重要意义。     

潍坊市小麦叶枯病发生原因及综防措施

小麦叶枯病是近年来发生的一种新的病害,2003-2004年在潍坊市普遍大发生.2003年笔者在潍坊市辖的寒亭、坊子、昌乐、寿光等区县调查叶枯病病田率100%,病叶率平均48.7%,严重田块病叶率达80%;2004年在寿光、安丘、潍城、寒亭等市区调查叶枯病病田率为82.3%,病叶率为35%,严重田块病叶率达75%.2003年和2004年全市发生面积分别为17.7万hm2和18.2万hm2,严重影响了小麦的产量,给粮农造成重大经济损失.     

山羊痘琼脂凝胶扩散(AGID)抗原的制备及初步应用

筛选所分离到的山羊痘云南省地方流行毒株KM株,应用牛睾丸原代及次代细胞进行病毒增殖、提纯及浓缩,制备山羊痘琼脂凝胶扩散试验(AGID)抗原。同时对该抗原进行抗原效价、判定标准、特异性、符合率及稳定性测定。测定结果显示该抗原效价为1∶4,且特异性及符合率高、稳定性好。并应用所制备抗原及参考阳性血清对采集自非疫点山羊血清186份,疫点390份,自然发病康复山羊血清46份,山羊痘免疫血清216份进行AGID初步应用。检测结果与流行病学相符合,证明我们所制备的山羊痘AGID抗原完全能够用于山羊痘抗体的检测及监测,且经济、简单、易操作,适于在基层单位推广应用。     

口蹄疫疫苗研究进展

使用口蹄疫疫苗是目前世界上防制口蹄疫流行的有效措施 ,不同种类的疫苗在口蹄疫防制工作中发挥了不同的作用 ,各有优劣。目前常用的口蹄疫疫苗主要有 3类 ,即弱毒疫苗、灭活疫苗及新型疫苗。这些疫苗经过不断的研究改进 ,在不同的国家和地区以及口蹄疫不同的流行阶段发挥着举足轻重的作用。     

生活在受高致病禽流感(HPAI)病毒侵袭地的人群注意事项

1在有HPAI的地区与鸡、鸭或者其它禽类接触时应注意 ·应该尽量避免同鸡、鸭或其它禽类接触,儿童应该不要与家禽或其它染病鸟接触.*回家或者访友,即使你认为它们是健康的,也不要把鸡、鸭或其它家禽(不论死还是活)带回家或者带到朋友家.     

亚洲1型口蹄疫病毒RS株非结构蛋白P3区基因特征分析

经RT-PCR扩增得到一株口蹄疫亚洲1型流行毒株的非结构蛋白P3基因核苷酸序列,与其他代表性参考毒株的P3基因进行比较,分析该毒株P3区基因特征.结果表明,该毒株P3基因含有2 721个核苷酸,编码907个氨基酸;其中非结构蛋白3A的基因长度为459 bp,编码153个氨基酸;3个3B(VPg)基因长度分别是69、72、72 bp,分别编码23、24、24个氨基酸;3C基因长度为639 bp,编码213个氨基酸;3D基因长度为1 410 bp,编码470个氨基酸.氨基酸序列比较分析显示,3A基因C末端比其他基因更容易变异,根据3A基因构建的系统进化分析提示该流行毒株与YNBS/58和IND 321/01亲缘关系较近,属同一亚系谱.     

李氏杆菌活载体疫苗研究进展

李氏杆菌活载体疫苗是指把弱毒化李氏杆菌改造为外源性抗原载体,活的李氏杆菌携带外源性抗原进入机体细胞内,通过MHCⅠ和MHCⅡ系统递呈外源性抗原,使机体产生针对外源性抗原的免疫保护,这是一种新型的疫苗系统.李氏杆菌的细胞内寄生和黏膜感染的特性,使得李氏杆菌活载体疫苗系统具有很多优势,该疫苗具有同时使机体产生细胞免疫和黏膜免疫的特性.近年来,通过毒力基因的重组对李氏杆菌进行的弱毒化改造,已经获得了一些有价值的安全载体菌株,如ACTA和plcB毒力基因双重删除毒株等,使李氏杆菌活载体疫苗在安全性方面更有保障.在艾滋病疫苗研制中,携带gag基因的李氏杆菌活栽体疫苗可以使小鼠抵抗重组表达的HIV-1 gag的痘病毒对系统和黏膜的攻击,李氏杆菌活载体癌症疫苗已经可以使小鼠产生对肾肿瘤和直肠肿瘤的抗性.李氏杆菌活栽体疫苗的发展和应用有可能为一些较难免疫疾病的免疫预防带来曙光.     

猪瘟病毒Erns基因的克隆及原核表达

从猪瘟病毒石门株血液样品中提取总RNA,通过R-PCR对Erns基因进行cDNA扩增,获得了696 bp的片段.将该片段克隆于T-easy载体后进行序列分析,确认PCR产物为猪瘟病毒Erns基因,从阳性克隆中提取质粒,经Bam H Ⅰ和Hin d Ⅲ双酶切,回收产物亚克隆到pET-32a表达载体中,提取质粒后转化BL21(DE3)感受态细胞,并筛选出阳性克隆,经IPTG诱导后通过SDS-PAGE检测出Erns基因的表达.     

蓝舌病多克隆抗体C-ELISA检测方法的建立和比较研究

 为建立一种检测成本低、操作简便的蓝舌病血清抗体监测方法,本研究通过制备群特异性的蓝舌病多克隆检测抗体和优化抗原固定技术,建立了蓝舌病多克隆抗体C-ELISA检测方法。通过对150份牛羊已知阴性血清的检测确定该检测方法的cut-off值为40%;对58份已知阳性血清样品同时进行中和实验和C-ELISA检测,检测结果经SPSS软件进行t检测统计分析,Sig.（双侧）=0.651,相关性0.912,相关性显著。对24个BTV血清型阳性血清,2份牛BVD阳性血清,2份羊口蹄疫阳性血清,2份羊痘阳性血清进行检测。结果表明,24个BTV血清型阳性血清为阳性,其他血清全部为阴性。对150份已知阴性血清和55份已知阳性血清用中和试验、美国VMRD 公司试剂盒和本方法分别进行检测。结果表明,本检测方法与中和试验检测结果符合率达100%,进口试剂盒符合率为96.7%。