乙基环丙沙星对蓝舌病病毒在BHK-21细胞中的增殖影响研究

<正>乙基环丙沙星以其出色的抗菌、抗支原体特性,在细胞培养中的作用正日益凸显,而该药在细胞培养的下游工作,其在病毒扩增中是否会带来副作用,并未见相关的报道。本研究试用蓝舌病病毒1型感染BHK-21细胞来测定乙基环丙沙星对该病毒在细胞中增殖的影响。1材料与方法1.1材料1.1.1材料。BHK-21细胞、蓝舌病病毒1型,来自云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室;乙基环丙沙星,德国Bayer公司产品;血清、MEM培养     

一例人感染羊接触传染性脓疱皮炎的确诊

2013年6月6日,云南省江川县动物疫病预防与控制中心的一名兽医在保定可疑羊接触传染性脓疱皮炎发病羊时不慎被羊咬伤手指,10 d后在伤口愈合处形成丘疹,随后发展为水疱,最后形成结痂。随着痂皮的逐渐脱落,直至丘疹出现后1个多月感染病灶才完全愈合。经过对发病羊口唇痂垢及人手指丘疹、水疱液样品进行PCR、Real-time PCR及序列比对分析,2份样品均扩增出1225 bp的预期大小片段,Real-time PCR也扩增出标准S形曲线和Rn指数增长峰,2份病料测定出的序列（1133 bp）完全一致,与NCBI GenBank中的羊口疮病毒参考毒株NC-005336.1（1133/1133）对应序列的相似性达到100%,与AY386264.1（1115/1133）、AY386263.1（1114/1133）、HM133903.1（1113/1133）、KF837136.1（1110/1133）及普洱毒株PUER/YN/CHIA/2011（1113/1133）对应序列相似性达到98%,与DQ184476.1（1104/1133）对应序列相似性达到97%,与NCBI GenBank中同为副痘病毒属成员的伪牛痘参考毒株GQ329669.1（1052/1140）、GQ329670.1（1051/1140）对应序列的相似性达到92%,与牛丘疹性口炎病毒参考毒株AY386265.1（905/1130）的对应序列的相似性仅达到80%。由此,确诊此次病例为人感染羊传染性脓疱病毒。     

云南香格里拉、四川松潘、若尔盖地区牦牛蓝舌病抗体血清学研究

自1905年南非首次报道蓝舌病以来,世界上许多地区陆续有该病发生的报道,它给畜牧业生产带来严重影响。蓝舌病病毒抗体的检测在流行病学调查、防治和检疫中一直发挥着重要作用。张念祖等在云南省首次发现该病并分离到病毒,随后在湖北、安徽、四川、山西、广西等省发现该病,多以绵羊为主,从而确定本病在我国的存在。     

牛溶血性巴氏杆菌的分离与鉴定

云南省红河州个旧市鸡街镇乍甸罗科寺村养殖户,于2010年10月24日从山东郓城县购买10月龄小黄牛40头,运到蒙自县糖厂附近饲养。在饲养的15d中,小黄牛全部发病,其中死亡16头。由于畜主怀疑是水土不服等因素造成的,又于11月3日把其余牛搬运到乍甸罗科寺村饲养,至12月3日又死亡3头,此次牛群发病共死亡19头。2010年11月10日,个旧市养殖户从山东郓城县购买10月龄左右的小黄牛72头,于11月12日运到乍甸水头村饲养,第2d即开始发病,至12月22日共发病32头,死亡4头。     

我国牛羊中山病血清学调查

为了解中山病在我国的流行和分布情况,本研究采用竞争ELISA检测方法,对2016—2018年我国吉林、辽宁、内蒙古、河北、新疆、西藏、湖北、重庆、四川、贵州、云南、广西和广东13个省级区划的8 232份牛羊血清进行检测。结果显示,有12个省级区划检测出抗体阳性,且阳性率有明显的地域性和季节性,由北向南逐渐升高(0～74.03%),秋季阳性率(2.50%～60.00%)明显高于春季(0～10.00%)和夏季(2.22%～35.00%)。乌兰察布、哈密、河池和曲靖等4个采样点的牛羊血清检测发现,牛血清抗体阳性率均高于山羊和绵羊血清。以上结果表明中山病在我国的流行已具有广泛性,流行分布状况与其媒介昆虫的活动有密切关系,并且牛比羊更易被该病毒感染,同时本研究的试验数据将有助于我国更好地了解和防控中山病。     

云南多重耐药猪源大肠杆菌的分离鉴定及其耐药机制初步研究

从云南省3个规模化猪场仔猪黄白痢病猪病例分离到7株革兰氏阴性小杆菌,用生理生化鉴定、药敏试验和致病性试验对分离菌株进行鉴定,并提取细菌的质粒,分析质粒与细菌耐药性之间的相关性。结果表明:7株分离株经生理生化试验鉴定为仔猪黄白痢大肠杆菌,对小白鼠有强致病性,分离株对15种抗生素表现为多重耐药,其中14耐1株、13耐2株、11耐2株、8和8耐以下2株,头孢类抗生素是治疗仔猪黄白痢的首选药物,表明云南猪大肠杆菌已经呈现出十分严重的耐药性。质粒图谱分析表明,4株分离株均携带分子量约为5000bp的一个质粒,而另外3株不携带任何质粒。质粒转化实验表明,分离株所携带的质粒为非耐药性质粒,与细菌耐药性无直接相关性。     

蓝舌病病毒血清Ⅰ型VP2与VP5、VP3与VP7两组蛋白在杆状病毒系统中的表达与鉴定

为表达具有天然构象的蓝舌病病毒血清1型(BTV1)主要结构蛋白VP2、VP3、VP5和VP7,研制针对流行于我国的BTV1型毒株的病毒样颗粒(virus-like particles,VLP)疫苗提供基础,将编码BTV1 VP2和VP5蛋白的基因分别克隆到双表达载体pFastBacDual的启动子pPH和pP10下游,构建重组质粒pFastBacDualBTV1-VP2-VP5,将重组质粒转化DH10Bac感受态细胞,获得重组穿梭质粒rBacmidBTV1-VP2-VP5,转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBacBTV1-VP2-VP5;按照同样策略,制备重组杆状病毒rBacBTV1-VP3-VP7。使用兔抗BTV1-VP5蛋白多克隆抗体和鼠抗BTV-VP7蛋白单克隆抗体,分别对rBacBTV1-VP2-VP5和rBacBTV1-VP3-VP7感染的Sf9细胞进行间接免疫荧光试验(IFA)检测,结果病毒感染细胞可见特异性荧光出现;使用兔抗BTV1-VP2蛋白多克隆抗体和兔抗BTV1-VP3蛋白多克隆抗体,分别对rBacBTV1-VP2-VP5和r BacBTV1-VP3-VP7感染的Sf9细胞进行Western-blot检测,可见相对分子质量约100 kDa左右的条带,大小与预期相符。IFA检测和Western Blot检测结果显示,BTV1 VP2、VP3、VP5和VP7蛋白均得以表达,且具有良好的反应原性。     

猪瘟病毒Erns基因的克隆及原核表达

从猪瘟病毒石门株血液样品中提取总RNA,通过R-PCR对Erns基因进行cDNA扩增,获得了696 bp的片段.将该片段克隆于T-easy载体后进行序列分析,确认PCR产物为猪瘟病毒Erns基因,从阳性克隆中提取质粒,经Bam H Ⅰ和Hin d Ⅲ双酶切,回收产物亚克隆到pET-32a表达载体中,提取质粒后转化BL21(DE3)感受态细胞,并筛选出阳性克隆,经IPTG诱导后通过SDS-PAGE检测出Erns基因的表达.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒通用型实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

根据GenBank登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）北美型毒株和欧洲型毒株N蛋白基因保守序列,设计1对特异性引物和1条探针,以ABI公司PRRSV RNA为标准品,优化了PRRSV实时荧光定量RT-PCR检测方法,25μL反应体系引物prrsv-f/prrsv-r（20μmol/L）各0.5μL,探针prrsv-p（10μmol/L）0.5μL为反应最佳工作浓度,标准曲线Ct值和模板启始浓度的log值之间具有良好的线性相关性。特异性、敏感性和重复性检测结果显示,该方法能特异的检测PRRSV北美型毒株和欧洲型毒株,与其他主要猪病病原检测无交叉反应;针对PRRSV RNA标准品检测,灵敏度可以达到10拷贝;重复性检测Ct值变异系数为0.74%～1.52%。用建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法,对40份临床样品检测,与商品化试剂盒检测结果完全一致。