小反刍兽疫灭活抗原RT—PCR检测方法的建立及其相关序列分析

以灭活的检测用抗原为材料,抽提灭活小反刍兽疫病毒的基因组RNA作为模板,根据参考文献及GenBank下载的序列,设计3对位于F基因的引物（2对为套式引物）,进行RT-PCR扩增及扩增片段的T载体克隆、序列分析。结果显示,所设计引物单独或套式RT—PCR对模板均有预期大小的片段扩增;扩增片段经核苷酸序列测定和分析,表明所扩增片段为小反刍兽疫病毒的F基因片段。且所设计引物对同属牛瘟病毒、犬瘟热病毒无扩增,证明所用引物为小反刍兽疫病毒特异性引物,此3对引物可用于小反刍兽疫与牛瘟等同属病毒的鉴别诊断。     

云南省边境地区2008-2009年度蓝舌病血清学调查

蓝舌病（BLU）是由呼肠孤病毒科（Reoviridae）环状病毒属（Orbivirus）的蓝舌病病毒（Bluetongue virus,BTV）引起的一种侵害反刍动物的严重传染病,其特征是颊粘膜和胃肠道粘膜严重的卡他性炎症,乳房和蹄冠等部位也常发生上皮脱落、充血肿胀但不发生水泡的病变。传播媒介为昆虫一库蠓。该病毒主要引起山羊、绵羊发病和死亡,     

中山病多克隆抗体竞争ELISA检测方法的建立

为建立一种简便、快速的中山病血清抗体监测方法,本研究采用纯化的中山病病毒(CHUV)包被ELISA反应板,兔抗CHUV多克隆抗体作为竞争抗体,建立了检测CHUV抗体的竞争ELISA(C-ELISA)方法。结果显示:抗原最佳包被浓度为4.12μg/m L,竞争抗体最佳使用浓度为1∶12 000倍。特异性试验显示该C-ELISA方法仅能检测CHUV抗体,其它相关病毒阳性血清检测结果均为阴性。对已知阳性样品的检测结果表明,本研究建立的C-ELISA方法敏感性高于血清中和试验和琼脂扩散试验。分别用C-ELISA、RT-PCR和病毒分离试验对监控动物每周采集的血清和抗凝血样品进行检测,ELISA结果与其它两种方法检测结果对应一致。本研究建立的C-ELISA为CHUV抗体的检测提供了一种快速、方便、可靠的方法。     

琼脂扩散试验与竞争酶联免疫吸附试验检测反刍动物蓝舌病抗体比较

蓝舌病是由环状病毒属（Orbivirus）的蓝舌病病毒（Blue-tongue virus）引起牛、羊及反刍动物的一种急性传染病。自1905年在南非首次报道了蓝舌病以来,世界上许多地区有该病发生的报道,如美国、澳大利亚、日本等,1979年我国首次在云南发现并相应分离到蓝舌病病毒,随后在湖北、安徽、四川、山西、广西等省发现该病,从而确定本病在国内的存在.     

蓝舌病Ⅰ型灭活疫苗免疫绵羊后中和试验和cELISA检出抗体的特点与关系

为比较蓝舌病病毒(BTV)cELISA和血清中和试验(SNT)检测方法的特点与关系,通过灭活、浓缩,制备抗原含量为1、5、10、50、100μg/mL的BTV-1型灭活疫苗。每个含量为1组,并设对照组,每组6只绵羊,分别在0、3周免疫。每周采血1次,共采血6次。对所采血样分别用cELISA和SNT方法进行抗体检测。cELISA检测结果显示,免疫后第1周,抗体阳性率达到80.00%,第4周全部免疫羊转为抗体阳性,抗体产生较为迅速;SNT检测结果显示,中和抗体阳性率从免疫后第1周的6.67%持续上升至第3周的36.67%,至第4周达到70.00%,中和抗体产生持续而缓慢。随着时间延长,2种检测方法的符合率由23.33%增加到76.67%。当绵羊同时产生中和抗体和cELISA抗体时,中和抗体效价与cELISA抑制率间有显著的线性相关关系(r=0.63),相关方程为y=0.38+0.05χ。分析认为,中和抗体出现的时间之所以晚于cELISA抗体,可能是因为与宿主细胞识别并吸附的主要部位VP7蛋白位于病毒衣壳的中间位置,其主要表面抗原位点暴露需要时间。     

口蹄疫疫苗效力试验和血清学取代方法研究进展

口蹄疫疫苗效力试验是通过强毒攻击疫苗免疫动物来评价12蹄疫疫苗免疫效果的一种方法,该方法在安全性、经济性、动物福利方面存在问题,寻找更安全的12蹄疫疫苗效果评价方法成了各国口蹄疫疫苗研究的重要任务。许多研究表明,动物免疫后的血清学指标和动物能否抵抗强毒攻击有相关关系,提出了疫苗效力试验的各种血清学替代方法,如“抗体平均值预测”、“bootstrap”和“抗体滴度最佳临界点”等,取得了很多进展,其中用“抗体滴度最佳临界点”方法可以计算出疫苗的PD50（50％ protectivedose）,重复性（re—peatability）为65．8％,再现性（reproducibility）为60．7％,该方法有望标准化。     

云南边境地区帕利亚姆血清群中山病病毒的分离与鉴定

【目的】了解西南边境地区牛感染中山病病毒(Chuzan virus, CHUV)的情况。【方法】应用BHK21细胞对云南景洪、江城采集的312份健康黄牛血液样品盲传分离病毒,对出现细胞病变的毒株进行形态学、基因组带型和分子生物学鉴定,对分离到的病毒进行S7、S2基因序列测定和比对分析。【结果】4份血液样品可致BHK21细胞病变,电镜观察病毒颗粒呈球形,直径约50 nm;琼脂糖凝胶电泳发现,4株分离毒株基因组为10节段,带型为“3-3-4”,与2012年云南师宗分离的CHUV SZ187毒株相似;4株病毒S7、S2基因核苷酸序列相似性分别为98.7%～99.7%和97.9%～99.1%;S2基因片段核苷酸和氨基酸序列与中国本土分离的SZ187、GHN-GS-16等毒株相似性最高;S7基因片段核苷酸和氨基酸序列与日本分离的ON-1/E/18、ON-3/E/17及中国本土的SZ187、GHN-GS-16等毒株的相似性最高。S7、S2基因遗传进化分析结果显示,4株新分离毒株亲缘关系最近;4株毒株的S7基因序列与中国本土和日本分离的已知帕利亚姆血清群病毒(Palyam serogroup vir...