用RT-PCR技术检测盐渍猪肠衣中猪瘟病毒的研究

参考GenBank中发表的猪瘟病毒（CSFV）序列，设计一对CSFV特异性PCR引物；从CSFV感染猪盐渍小肠中提取总RNA，经逆转录后进行PCR扩增，在盐渍小肠中成功扩增出与预期大小（168bp）一致的特异性条带，而正常猪和感染猪伪狂犬病病毒的猪小肠扩增结果均为阴性。用本方法对20例不同稀释浓度的盐渍猪肠衣样本进行检测，结果显示比经典抗原检测方法（抗原捕获ELISA法）具有更高的敏感性。实验表明，本RT—PCR技术能应用于盐渍猪肠衣的CSFV检测，为快速、准确检测盐渍猪肠衣中CSFV提供了一条新途径。     

规模化猪场几种主要动物疫病监测

随着我国养猪业快速发展，生猪品种改良步伐的加快。生猪及其产品流通渠道进一步畅通，生猪疾病日渐复杂，一些影响生猪生产的主要传染性疾病在规模化猪场时有发生，严重影响我国生猪及猪产品的国际贸易，给养猪业造成巨大经济损失。笔者根据我省规模化猪场引种特点以及生产实际中存在的问题，2003年3月至2004年10月对我省年出栏1万头以上的24个规模化养殖场进行了口蹄疫、古典猪瘟、猪生殖一呼吸综合征、猪伪狂犬病、猪细小病毒病、猪水泡病、结核病等7种影响生猪生产的主要传染病进行监测，并根据监测结果制定了相应控制措施，报告如下。     

利用双重PCR技术检测柑橘溃疡病菌

建立了柑橘溃疡病菌的双重PCR检测方法.根据柑橘溃疡病菌的基因片段OPM-12SCAR fragment(AF312370),设计特异性PCR检测引物,并结合rpf基因设计的引物对柑橘溃疡病菌和其近缘菌株、植物原性细菌的DNA进行了双重PCR检测方法的研究.该方法特异性强,菌液浓度检测灵敏度达到102CFU/mL,能够满足快速、准确诊断柑橘溃疡病菌的要求.     

三系杂交水稻真伪及纯度实时PCR技术的鉴定

如何建立一套快速、准确的杂交水稻真伪及纯度检测体系一直是困扰着口岸检疫人员的难题。实时荧光PCR技术是近年来新兴的检验技术。通过对已报道的雄性不育特异片段R2-630WA进行PCR验证,发现其可作为鉴定杂交稻不育胞质的分子标记。依据此片段设计并合成1对引物和1条TaqMan荧光探针,对17个水稻(Oryza sativa)品种进行实时荧光PCR检测并对反应体系进行优化。结果表明:此探针能特异扩增三系杂交稻F1及不育系,并可准确地鉴定单粒稻种,准确率为100%。探针在测定低浓度(10%~40%)样品时偏差在2%左右,在测定高浓度(50%~100%)样品时,偏差在5%左右,能初步用于三系杂交稻的纯度检测。反应体系的最佳复性-延伸温度为60℃;最佳Mg2 浓度为3.5mmol/L,由此建立了一套准确、快速的三系杂交稻鉴定体系。     

试述毕节市畜禽养殖业污染防治对策

以畜禽养殖业为调查对象,分析毕节市畜禽养殖业的特点和排污现状,以及畜禽养殖污染物对环境的影响,提出了’污染防治对策。     

利用双重PCR技术快速检测水稻细菌性谷枯病菌

根据水稻细菌性谷枯病ITS和gyrB基因,设计两对特异性PCR检测引物,建立了水稻细菌性谷枯病菌的双重PCR检测方法。用该方法对水稻细菌性谷枯病菌和其它植物源性细菌进行双重PCR扩增及灵敏度测试,并对采自不同地区的水稻样本进行水稻细菌性谷枯病菌的检测。结果显示,双重PCR方法能特异性地检测出8株水稻细菌性谷枯病菌,可从含水稻细菌性谷枯病菌浓度为102cfu/mL的菌液中检测出该病菌;采用该方法对我国不同地区的水稻材料进行检测,并未发现水稻细菌性谷枯病菌。